神経変性疾患のマウスモデルのための嗅覚アッセイ

プロトコルのすべてのステップはシンシナティ大学のIACUCによって設定された動物の管理と使用ガイドラインと規則に従ってください。 1一般的な考慮事項可能であれば、暗サイクルでの活動期中にマウスをテストします。一般的に、暗サイクルに低照度下でのテストと、少なくとも1時間行う。暗サイクルでのテストが不可能な場合は、明サイクル中にすべての3つのテストを実行します。マウスが彼らの睡眠サイクル中にテストされたときに時間を盗聴する低下する可能性があることに注意してください。注：テストは睡眠サイクルの間に実行することができるが、マウスが埋もれペレット、ブロック、または香りのカートリッジ内の少ない興味を示してもよい。 外嗅覚の影響を減らすそれぞれのテストを通して、常に手袋の塩基対を着用した後、各マウスと各試行のための塩基対の上の手袋のクリーンペアを配置するために。一般的なルールとして、疑わしい場合には、手袋のクリーンセットに置く。手袋のボックスには、読んだことがあります彼らは頻繁に変更されますので、ILY利用できる。注：私たちは、すべての動物の処理のためにニトリル手袋を使用しています。 殺菌剤/消毒剤を有する被験者との間で試験材料とケージのクリーニングは、病気を広める可能性を減らすだけでなく、望ましくない嗅覚を除去するために、テストのこの電池の重要なステップである。 ペレットテスト埋没2。 少なくとも二日試験前に、各マウスの体重を記録し、食品は、体重の90％に制限する。試験の前にし、食事制限中に、各マウスに、試験中に使用するペレットの1-2個を与える（ 例えば、加糖穀物の一部）。マウスは食品と新しいもの嫌いのであり、彼らが以前にペレットを食べていない場合は、試験中にペレットを探索しない可能性があるため、この手順を省略しないでください。 すべての試験日には、ない水のボトルやフィーダーbで試験室に彼らのケージを置くことによって、試験前に1時間マウスを慣らすインチだけでフィルタートップのふたでホームケージでそれらを家。 馴化中は、きれいな寝具寝具が均等にケージ全体に分散されている特定のことで高〜3センチメートルクリーンマウスのケージを埋める。 5分間のタイマーを設定してください。 それが見えないように馴化の1時間後に、寝具の下に1加糖穀物ペレット0.5cmに埋める。 そのホームケージから試験マウスを取り外し、試験ケージの中央に置き、ケージにフィルタートップの蓋を置き、タイマーを開始。 マウスがペレットをuncoversし、それを食べ始めたとき、タイマーを停止します。埋もれたペレットを発見するための時間に注意してください。 マウスは5分以内にペレットが見つからない場合は、裁判を終了し、そのマウス用の300秒のスコアに注意してください。マウスはそれへのアクセス権を持っているので、寝具のトップにペレットを移動し、マウスがペレットを食べることができます。 裁判に続いて、そのホームケージにマウスを返す。 試験ケージから寝具を空にして、Cをきれいに動物室の洗浄液と時代。 繰り返します各マウスについて2.4〜2.9を段階的に説明し、各マウスの前後に手袋を変更します。 すべてのマウスがテストされた後、彼らに90％の体重でそれらを維持するだけの十分な食料を与えます。 日2-5 1つの例外を除き、試験1日目と同じようにテストを実行。各試行のためにケージ内の別の場所にペレットを埋める。 テスト6日目に、表面ペレットトライアルを行う。 表面ペレット裁判では、その代わりに、寝具の上に布団地、その下にペレットを埋め込むテスト1日目と同じ手順に従ってください。マウスが発見し、ペレットを食べ始めるまでの時間を記録します。 3ブロックのテスト個別に各ケージを設定する前に、手袋を変え、（AEと表示）クリーンケージにマウスを収容し、ケージに5ブロックを配置。 後でテスト24時間を実行します。検査領域に試験マウスを移動し、水のボトルとフィーダビンを削除し、アルを配置lの動物の識別で標識されたプラスチック製の袋に布団の一握りと一緒にケージから5ブロック。マウスのホームケージの上に密封されたビニール袋を置きます。 試験前に1時間の水のボトル、フィーダビンなしのホームケージ内の動物、およびブロックを慣らす。 香りは、動物/ブロック間で交換されないように、各ケージの間に手袋を変更します。 各ケージの間に10cm以上でテーブルの上に互いに横にマウスのケージをラインアップ。ケージ（しないケージの長辺）の前面がクリアな視界に入るようにビデオカメラを置きます。 30秒間のタイマーを設定し、重要な実験の詳細（日付、マウスのID、裁判など ）でカードを標識する。 2-3秒間のビデオテープのラベルを。 そのマウスの識別とビニール袋からブロックADを取​​り外し、それらは、ビデオカメラにはっきりと見えるように、ケージの中央に配置します。 〜1cmのoが存在することを確認してください各ブロックの間にFスペース。ケージにフィルタートップをバックに配置します。 30秒間のタイマーとビデオテープを起動します。 30秒後、録画を停止し、ケージからブロックを削除し、バックビニール袋に入れます。 手袋を変更した後、次のマウスに移り、最初の試験のために使用したのと同じ手順を繰り返す。各マウスは約5分の試行間の間隔があることを確認させるための6試験の合計のためにこれを行います。 7 回目のトライアルでは、マウスの代わりから、A、B、Cのブロックに露出するように別のマウスのケージからブロックEを追加し、マウス自体のケージからブロックDを配置する以外は試験の1〜6と同じ手順に従って、その別のマウスのケージから自身のホームケージとブロックE。そのブロックE各マウスは、ブロックEが各マウスのケージ（ 例えば、ABCEまたはAEBC）に配置され、交互に露出している研究室の本に注意してください。同性のマウスからではなく、元のcagemateからブロックEを取る。 630秒間deotape。 7裁判に続いて、元のcagematesで新しいクリーンなケージに動物を返します。クリーンブロックは、中性洗剤と水で試験に使用し、後のテストで使用するために空気乾燥させ。 4。馴化/脱馴化ブロック試験と同様の方法で、慣れ/脱馴化テストを実行しますが、代わりにマウスの臭気を持つブロックを使用しての、抽出物の異なる対を用いて香りコットンを保持している組織のカートリッジを使用しています。 代わりに、ブロックのシングル、無香組織カートリッジを使用しての手順3.1から3.4に従ってください。 試験室でマウスを慣らす。 別の部屋に香り組織カートリッジを準備します。きれいなカートリッジに小さなコットンボールを置き、次に綿に抽出物（ 例えば、アーモンドエキス）の5μlを添加する。その香りで標識された専用の箱や袋に入れて綿と場所の上のカートリッジ上部をはめ込みます。 同じ手続きfの操作を行いますまたは第二の香り（ 例えば、アニスエキス）。異なる香りを取り扱う間に手袋を変更します。コットンボールが完全に組織カートリッジに収納されていることを確認します。注：コットンボールから露出した繊維は、動物が営巣目的ではなく、香り自体のコットンボールに興味を持っている可能性があります。 そして、一つの第6試験のための香りの組織カートリッジ及び第7の試用のための第二の香りの組織カートリッジを使用しての手順3.6から3.10に従ってください。 ビデオテープの5。分析ブロックと馴化/脱馴化のテストでは、実験条件に評価者のブラインドは、そのブロックと鼻連絡先として定義されてスニッフィングで、各ブロックをスニッフィング費やした時間を測定している。所望であれば、トライアル7および総活性、各試行の間（長さとホームケージの幅に沿って行わ移動回数）の間、新規のブロック（E）に近づくための時間のような他の行動を測定する。スニッフィング費やされた時間をスコアdは時間がストップウォッチを使用してビデオテープからアプローチする。 同様に、馴化/脱馴化試験のため、実験条件に評価者のブラインドを持っている時間を測定し、カートリッジをスニッフィングカートリッジにアプローチするための時間を過ごし、自発運動。 6。統計待ち時間はスコアが分散の不均一性を示す傾向にあるペレットを見つけることがあるため、ノンパラメトリック統計を使用して埋めペレットテストを分析します。日3-5全体でペレットを検索し、マン·ホイットニーのU検定を用いて、マウスの群間で比較するために待ち時間を平均。同様に、テスト表面ペレット部分について、遺伝子型を比較す​​るマン – ホイットニーU検定を使用してペレットを見つけるために待ち時間を分析する。 ブロックテストでは、試用7（小説の香りのブロックの導入）からのデータを分析します。一般的に、分散の不均一性を考慮するために、ノンパラメトリック分析を採用している。第スニッフィング費やされる時間の差を分析するために電子小説ブロックは、同様に異なる実験群のためのブロックにアプローチする時間として、マン·ホイットニーU検定を使用しています。おなじみのブロックをスニッフィング費やした時間に対する新規のブロックをスニッフィングに費やした時間を比較するためにウィルコクソン符号付き順位検定を使用してください。 馴化/脱馴化試験において、行動のパラメータは、以前の研究20と同様の試験1、図6及び図7に解析する。マウスは無いスニッフィングがほとんどを呈する場合は、ノンパラメトリック分析を使用しています。