Olfactorische Testen voor muismodellen van neurodegeneratieve ziekte

Alle stappen van het protocol volgt de verzorging van dieren en het gebruik van richtlijnen en voorschriften door de IACUC van de Universiteit van Cincinnati in te stellen. 1 Algemene overwegingen Test indien mogelijk muizen tijdens de actieve fase in het donker cyclus. Typisch, voeren testen bij weinig licht en minstens 1 uur in het donker-cyclus. Indien testen in het donker cyclus niet haalbaar, voeren drie tests tijdens de lichtcyclus. Houd in gedachten dat snuiven tijden kan afnemen als muizen worden getest tijdens de slaapcyclus. OPMERKING: Tijdens de tests tijdens de slaapcyclus kan worden uitgevoerd kunnen de muizen minder belangstelling voor het begraven pellet, blokken, of geparfumeerde patroon vertonen. Om eventuele effecten van buiten olfactorische signalen te verminderen, draag een base paar handschoenen te allen tijde gedurende elke test en plaats dan een schoon paar handschoenen over de basenparen voor elke muis en elke proef. Als algemene regel, bij twijfel, op een schone set handschoenen. Hebben een doos handschoenen lezenily beschikbaar omdat zij vaak worden veranderd. OPMERKING: We maken gebruik van nitril handschoenen voor alle dierlijke behandeling. Reinigen van testmateriaal en kooien tussen proefpersonen met een desinfecterend middel / sterilisatiestoffen is ook een belangrijke stap in deze batterij van tests met het oog op de mogelijkheid op verspreiding van ziekten, alsook te verwijderen ongewenste olfactorische signalen. 2 Begraven Pellet Test Ten minste twee dagen vóór de test registreer het gewicht van elke muis en voeding beperken tot 90% van het lichaamsgewicht. Alvorens de test en tijdens voedselrestrictie geven elke muis 1-2 stukken van de pellets te gebruiken tijdens de test (bijvoorbeeld een stuk gezoete ontbijtgranen). Sla deze stap niet over te slaan, want muizen zijn neophobic met voedsel en kunnen niet naar de pellet tijdens de test als ze niet eerder hebben gegeten van de pellets. Op alle testdagen, wennen de muizen gedurende 1 uur voorafgaand aan de test door het plaatsen van hun kooi in de testkamer met geen fles water of feeder bin. Huis in hun kooi met alleen een filter deksel. Tijdens de gewenning, vult een schone kooi muis ~ 3 cm hoog met schone beddengoed maken van bepaalde het beddengoed wordt gelijkmatig verdeeld over de kooi. Stel een timer voor 5 minuten. Na 1 uur van gewenning, begraven 1 gezoete granen pellet 0,5 cm onder het beddengoed zodat het niet zichtbaar is. Verwijder de test muis van de kooi, plaats het in het midden van de testkooi, plaats het filter deksel op de kooi en start de timer. Stop de timer wanneer de muis onthult de pellet en begint het eten ervan. Let op de tijd om de begraven pellet te ontdekken. Als de muis de pellet binnen 5 min niet vindt, eindigt het proces en noteer een score van 300 sec voor die muis. Verplaats de pellet aan de top van de aanwezige zodat de muis toegang daartoe, en laat de muis om de pellet te eten. Na het proces, de terugkeer van de muis aan zijn kooi. Het beddengoed uit de test kooi legen en reinigen van de cleeftijd met dierlijke schoonmaak oplossing. Herhaal stap 2,4-2,9 voor elke muis en handschoenen wijzigen vóór en na elke muis. Nadat alle muizen worden getest, geef ze net genoeg voedsel om ze te handhaven op 90% lichaamsgewicht. Voer de test op dag 2-5 net als testdag 1 met een uitzondering; begraaf de pellet op een andere plek in de kooi voor elk onderzoek. Op testdag 6, voeren het oppervlak pellet trial. Voor het oppervlak pellet proef, volgt u dezelfde procedure voor testdag 1, maar in plaats van begraven van de pellet onder het beddengoed plaats het op de top van het beddengoed. Noteer de tijd voor de muis vinden en beginnen te eten de pellet. 3 Block Test Individueel te huisvesten muizen in schone kooien en plaats 5 blokken in de kooi (het label AE), wisselen van handschoenen voor het opzetten van elke kooi. Voer de test 24 uur later. Verplaats testmuizen naar het testgebied, verwijder de fles water en voeder bak, en plaats all 5 blokken van de kooi samen met een handvol beddengoed in een plastic zak voorzien van de identificatie van het dier. Plaats de afgedichte plastic zak bovenop de muis kooi. Wennen de dieren in hun kooi zonder waterfles, toevoerbak en blokken 1 uur voor de test. Veranderen handschoenen tussen elke kooi, zodat de geuren niet worden uitgewisseld tussen dieren / blokken. Line up de muis kooien naast elkaar op een tafel met minstens 10 cm tussen elke kooi. Plaats een videocamera, zodat de voorkant van de kooi (niet de lange zijde van de kooi) is in zicht. Stel de timer voor 30 sec en label een kaart met de belangrijkste experiment gegevens (datum, muis-ID, het proces, etc.). Videoband het label voor 2-3 sec. Verwijder blokken AD uit de plastic zak met de identificatie van die muis en plaats ze in het midden van de kooi, zodat ze duidelijk zichtbaar op de videocamera. Zorg ervoor dat er ~ 1 cm of ruimte tussen elk van de blokken. Plaats het filter boven terug op de kooi. Start de timer en videotape gedurende 30 sec. Na 30 sec is, stoppen met opnemen en verwijder de blokken van de kooi en plaats ze terug in de plastic zak. Veranderen handschoenen en ga dan verder naar de volgende muis, het herhalen van dezelfde procedure gebruikt voor de eerste proef. Doe dit voor een totaal van 6 proeven voor elke muis om ervoor te zorgen is er een inter-trial interval van ~ 5 min. Op de 7 e proef, volgt u dezelfde procedure voor de proeven 1-6 behalve in plaats van het plaatsen van blok D uit eigen kooi van de muis toevoegen blok E van de kooi een andere muis, zodat de muis wordt blootgesteld aan blokken A, B en C uit de eigen huis kooi en blok E van de kooi een andere muis. Let op in het lab boek waarvan blok E elke muis wordt blootgesteld aan en alternatieve waar blok E wordt geplaatst in elke muis de kooi (bv ABCE of AEBC). Neem blok E van een muis van hetzelfde geslacht, maar niet van een origineel cagemate. Videotape gedurende 30 sec. Na de 7 proeven, terugkeren dieren naar een nieuwe schone kooi met hun oorspronkelijke lotgenoten. Clean blokken gebruikt in de test met zachte zeep en water en laat aan de lucht drogen voor gebruik in latere testen. 4 Gewenning / Dishabituation Voer de gewenning / dishabituation test soortgelijke wijze als de proef blok maar in plaats van blokken die de geur van een muis, gebruik tissue cartridges die katoen geparfumeerd met verschillende paren extracten. Volg de stappen 3.1-3.4 met een enkele, ongeparfumeerde weefsel patroon in plaats van de blokken. Wennen muizen in de testruimte. Bereid de geurende weefsel patronen in een aparte ruimte. Plaats een klein katoenen bal in een schone cartridge en voeg dan 5 ul van het extract (bijvoorbeeld amandel-extract) in de katoen. Klik de cartridge top over de katoen en plaats in een speciale doos of zakje waar die geur. Doe hetzelfde procedure fof een tweede geur (bijvoorbeeld anijs extract). Veranderen handschoenen tussen omgaan met verschillende geuren. Zorg ervoor dat de watten wordt volledig ingekapseld in het weefsel patroon. OPMERKING: Exposed vezels van de watten kan het dier de interesse in de watten voor het nestelen doeleinden in plaats van de geur zelf hebben. Daarna volgt u de stappen 3,6-3,10 met een geparfumeerde weefsel patroon voor de eerste zes proeven, en de tweede geurende weefsel patroon voor de zevende proef. 5 Analyse van Videobanden Voor het blok en de gewenning / dishabituation testen, hebben een rater blind voor experimentele conditie meten de tijd doorgebracht snuiven elk blok, met snuiven gedefinieerd als nasale contact met dat blok. Desgewenst meet andere gedragingen zoals tijd om het nieuwe blok (E) in Proef 7 en totale activiteit (het aantal bewegingen over de lengte en breedte van de kooi) tijdens elke proef benaderen. De score van de tijd besteed snuiven eend tijd te benaderen van de videoband met een stopwatch. Ook voor de gewenning / dishabituation test, hebben een rater blind voor experimentele conditie meten van de tijd besteed snuiven de cartridge, de tijd om de cartridge, en bewegingsactiviteit benaderen. 6 Statistieken Analyseer het begraven pellet test met niet-parametrische statistiek, omdat de wachttijd aan de pellet scores hebben de neiging om de heterogeniteit van variantie zien te vinden. Het gemiddelde van de latency van de pellet over de dagen 3-5 te lokaliseren en vervolgens te vergelijken tussen groepen van muizen met behulp van een Mann-Whitney U-test. Ook voor het oppervlak pellet deel van de test analyseren latentie om de pellet te vinden met een Mann-Whitney U-test vergelijken genotypes. Voor het blok test analyseren de gegevens van Trial 7 (introductie van de nieuwe geurende block). Typisch, in dienst parametrische analyses rekening te houden met de heterogeniteit van variantie. Om verschillen in de tijd te analyseren besteed snuiven the nieuw blok, evenals de tijd om de blokken te benaderen voor verschillende experimentele groepen, gebruik maken van de Mann-Whitney U-test. Gebruik de Wilcoxon Signed Rank test om te vergelijken tijd snuiven de roman blok aan tijd besteed snuiven de bekende blokken. Voor de gewenning / dishabituation test, gedrag parametrische analyses over Trials 1, 6 en 7, vergelijkbaar met eerdere studies 20. Als muizen vertonen weinig tot geen snuiven, gebruikt niet-parametrische analyses.