Um Procedimento volume pequeno para Concentração Viral da Água

Vírus entéricos humanos são importantes causadoras doenças transmitidas pela água ^1-3, mas são geralmente presentes em números baixos nas águas ambientais contaminados, tornando difícil a sua detecção, sem concentração. Os procedimentos usados ​​para concentrar os vírus incluem, tipicamente, uma etapa de filtração, seguido por eluição do filtro, e concentração secundária do eluato filtro. Um procedimento de filtração comum se baseia em uso de membranas carregadas, tais como filtros electropositivos (recentemente revisados ​​em ^4,5). Estes filtros dependem de captura de vírus em suspensão em água usando interacções electrostáticas entre a superfície de filtro (carregado positivamente) e partículas de vírus segmentados (carregada negativamente). Dois filtros electropositivos que estão disponíveis comercialmente confiam nesta tecnologia, os filtros de vidro / celulose e nano-alumina / fibra de vidro. Os custos de filtro de vidro / celulose são até 10 vezes maior do que a nano-alumina / fibra de vidro, o que limita o uso do vidro / cefiltros llulose para monitoramento de vírus de rotina. Estudos recentes concluíram que as diferenças são nominais entre estes dois filtros em recuperação de enterovírus de ^6,7 água do ambiente, o que justifica o uso de um filtro alternativa mais barata. Outras opções de filtros, como filtros electronegativos e de fibra de vidro foram estudadas, no entanto, que quer impor ao pré-tratamento da água de nascente (filtros electronegativos) ou não estão disponíveis comercialmente (filtros de fibra de vidro). O desenvolvimento de processos de concentração de vírus tenha focado principalmente na optimização das técnicas de concentração primária (filtros), a fim de melhorar a recuperação de vírus a partir de água. No entanto, os procedimentos de concentração secundários, os quais reduzem o volume de eluente, tipicamente de 1 L para mililitro volumes, também pode ter um impacto significativo sobre a recuperação de vírus ^8.

Concentração Secundária de vírus entéricos normalmente se baseia em um agente de floculação, como alguns tipos de extrato de carne bovina (floccu orgânicamento) ou floculação leite desnatado ^9-12 para remover partículas do vírus a partir de superfícies de filtro. Recentemente, um outro processo de concentração secundária utilizando extracto de carne juntamente com a adição de Celite (partícula fina) mostrou-se promissor para a recuperação de adenovírus, enterovírus, e norovírus ^8,13,14. Obras de concentração de celite sob princípios semelhantes aos do método de floculação orgânico em que as partículas de vírus para anexar e são libertados de partículas (ou flocos de celite), alterando o pH da solução de suspensão. As comparações entre estas duas técnicas de concentração secundários foram avaliadas em recuperação de adenovírus cravado (Adv) tipos 40 e 41 ^8. Este estudo concluiu que as duas técnicas de concentração secundários foram estatisticamente semelhantes em recuperação de adenovírus. No entanto, o método de floculação biológica requer um 30 min. de incubação a pH 3,5, enquanto que a técnica de celite requer uma incubação mais curto (10 minutos) a pH 4,0. O flocculat orgânicaião também requer a utilização de equipamento de laboratório caro (centrífugas), para recolher as partículas de flocos durante a concentração terciária, a técnica de celite em contraste utiliza apenas equipamentos básicos de laboratório (filtração no vácuo) para separar as partículas de celite suspensão.

Determinadas combinações de filtros e técnicas de eluição secundárias pode também afectar as recuperações de vírus. Um estudo concluiu que certas combinações de (filtros) electropositivos primárias e secundárias técnicas de concentração (Celite ou floculação orgânica) teve um impacto significativo de recuperação de adenovirus ^13. Estes resultados sugerem que a optimização é necessária, a fim de recuperar o vírus alvo de forma óptima a partir de uma dada matriz de água quando se utiliza estas técnicas. Optimization é um demorado, árduo processo muitos pesquisadores evitam ativamente desde inúmeras variáveis ​​serão avaliadas (tipo de filtro / marca, solução de eluição pH, Celite / floculação orgânica).

Para este study, foi desenvolvido um processo para identificar as condições óptimas para a concentração de vírus a partir da água utilizando adenovírus humano cravado estirpes 40 e 41. Presumivelmente, uma vez que cada tipo de vírus exibe uma morfologia única e capsídeo cápside carga específica, protocolos de concentração pode necessitar de ser optimizado para cada vírus alvo, a fim de alcançar a recuperação viral ideal. Este estudo fornece uma abordagem para AdV 40 e 41 concentração por: 1) avaliar as recuperações de vírus na água da torneira usando discos de filtro electropositivos seguidos de 2) avaliação de um método de floculação orgânica estabelecida versus a técnica de celite como uma concentração secundária, e 3) avaliação da tampões de eluição para a concentração terciária.