Роговицы Micropocket Анализ: Модель ангиогенеза в Mouse глаз

Процесс ангиогенеза, образование новых кровеносных сосудов образуют уже существующие те, в высшей степени сложным и регулируется с помощью нескольких эндогенных факторов, которые контролируют различные этапы прорастания сосудов и морфогенеза. Ангиогенез срабатывает за счет смещения в балансе между про-и анти-ангиогенеза факторов, баланса, что обычно ведет сосудистую в состоянии покоя. Ангиогенез у взрослых происходит в определенных физиологических условиях, таких как в женской яичников цикла или в репаративных процессов, таких как заживление ран и регенерации тканей. Тем не менее, это также отличительным признаком нескольких патологий в том числе злокачественных опухолей, аутоиммунных состояний и воспалительных заболеваний. Участие ангиогенеза в этих физиологических и патологических условиях делает его важным объектом для исследований и привлекательной мишенью для терапии.

В связи со сложностью ангиогенеза и привлечением нескольких сезаполняет и факторы в процессе, в том числе эндотелиальных клеток, перицитами, циркулирующих клеток и стромальных клеток, в пробирке модели остаются ограниченными и не могут резюмировать уникальную микросреду в естественных условиях. Основной в анализах пробирке ангиогенеза в значительной степени сосредоточены на наблюдении прямое воздействие на эндотелиальные клетки и измерение определенные шаги в процессе ангиогенеза в контролируемых условиях. Эти анализы включают количественную оценку пролиферации эндотелиальных клеток ^1, миграции ^2, формирование сети ^3, формирование трубки ⁴ и прорастания от сфероидов ^5. Экс естественных моделей, в отличие от тех в пробирке, являются более сложными и включать различные типы ткани клеток, примером чему кольца аорты анализ ^6. Тем не менее, как и в других системах, он не может захватывать вклад циркулирующих клеток и естественную стромы эндотелиальных клеток, как существует в естественных условиях. Попыткиизучать ангиогенез в потоке, чтобы имитировать настройку в естественных условиях выполняются с помощью микрофлюидных системы ^7, однако даже эти анализы, хотя значительно улучшилось, по-прежнему не в состоянии учесть все отсеки, существующих в естественных условиях.

В связи с ограничениями в пробирке и бывших естественных условиях моделей ангиогенеза, в естественных условиях модели остаются более надежные варианты для ангиогенеза исследований. Примерами таких моделей включают имплантацию прозрачных камер, "Windows", которые позволяют визуализировать растущих кровеносных сосудов под микроскопом ^8, инъекционные подкожные имплантаты, такие как Матригель и сосудов образования в нормальных тканях, таких как уха мыши и курицы хориоаллантоисной мембране (CAM ). Тем не менее, одним из наиболее приемлемых и количественных моделей ангиогенеза в естественных условиях является роговицы micropocket неоваскуляризация анализ, описанный здесь, в которой использована, естественно, аваскулярныйРоговица как «экран», чтобы отследить и проанализировать новый ангиогенную рост ^9.

Здесь мы опишем роговицы micropocket анализа, разработанные на мышах. Изначально модель была использована для измерения неспецифические ангиогенные стимулы в кролика роговицы. Это было сделано путем введения опухолевых части в водянистой влаги из передней камеры глаза кролика и измеряется индуцированного опухолью неоваскуляризацию ^11.

Тем не менее, анализ был впоследствии превратилась для изучения последствий конкретного факторов роста ¹⁰ для лучшего определения и стандартизации ангиогенную эффект. Для того, чтобы освободить фактор роста в глаза, с медленным высвобождением гранулы, содержащие известные количества ангиогенных факторов роста были использованы вместо тканей. Наличие очищенных рекомбинантных ангиогенными белков, таких как bFGF или VEGF включен их использование в качестве конкретных задач ангиогенеза modulaters ^12. Первоначально анализа былашироко используется в кроликов, которые легче работать с в силу своего размера, но позже модель была переведена на мышах; меньше и менее дорогой модели на животных. Переход от кролика мышам условии важное преимущество, которое позволяет использовать генетически манипулировать животных, создавая тем самым новую область исследований в генетических компонентов, влияющих ангиогенез ^13. В дополнение к более приемлемым использование роговицы анализа в изучении ангиогенеза, другие биологические процессы также могут быть исследованы с использованием модифицированных анализов. Например, исследования лимфангиогенеза стали возможными благодаря имплантации гранулы с низким доза bFGF, которые позволили визуализацию лимфатических сосудов с помощью специальных молекулярных маркеров ^14. Кроме того, это исследование служит средством для оценки воздействия радиации на ангиогенез ^15.

В суммирования, роговицы micropocket ангиогенез анализ является количественная, представительroducible, гибкая оценка ангиогенеза в естественных условиях. Основным преимуществом этого анализа является то, что измерение фона сосудов является необходимым, так как сосуды растут на, естественно, лишенной сосудов ткани. Мы описываем здесь протокол этом анализе в деталях и обсудить различные сценарии, которые могут возникнуть. Анализ состоит из 3 отдельных сегментов. Здесь мы опишем приготовление фактор роста включено гранул, последующее хирургическую имплантацию и, наконец, метод, используемый для количественного определения результате неоваскулярную рост.