Infarto do Miocárdio e Avaliação de Resultados Funcional em porcos

Todos os experimentos in vivo foram conduzidos de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, preparados pelo Instituto de Recursos Animais de Laboratório. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Experimentação Animal local. 1. Medicação, Anestesia Venosa Access, e intubação Medicação e Anestesia A pré-medicação Iniciar amiodarona 150 mg / kg, 10 dias antes da cirurgia para evitar arritmias. Continuar a amiodarona em uma dose de 100 mg / kg desde o dia da operação até ao dia 28. Reduzir a dosagem de 50 mg / kg no dia 29 e continua até ao final do estudo. Comece a terapia anti-plaquetária, 1 mg / kg de clopidogrel dia 3 antes da cirurgia e 4,5 mg / kg de ácido acetilsalicílico um dia antes da cirurgia. Continuar clopidogrel 1 mg / kg por dia e de ácido acetilsalicílico a 80 mg / dia. Comece a medicação para a dor um dia antes da cirurgia por fentanilo, 25mg / h para porcos ~ 70 kg. Continue o uso de adesivos de fentanil por 24 horas no pós-operatório para garantir medicamento adequado da dor. Além disso, monitorar diariamente para sinais de desconforto putativo (ou seja, o comportamento, a respiração, marcha, mobilidade, etc) para aumentar a medicação para dor. Rápido o animal por 12 horas, manter o acesso ilimitado à água. Anestesia Para prevenir o stress e desconforto desnecessário, sedar o porco na sua estável por injecção intramuscular de uma mistura de midazolam 0,4 mg / kg, quetamina a 10 mg / kg, e atropina 0,014 mg / kg. Obter acesso venoso através da canulação da veia da orelha com um 18 G iv cânula. Induzir a anestesia por administração intravenosa de 5 mg / kg sodiumthiopental, e dar 1000/100 mg de amoxicilina / ácido clavulânico para evitar infecções. O porco receberá 1000/100 mg de amoxicilina / ácido clavulânico no dia após a cirurgia, o tratamento com antibióticos. Entubar o porco usando um endotrachtubo eal (tamanho 8.5 para suínos com peso ~ 70 kg). Se for necessário realizar balão de ventilação com uma frequência de 12/min e transportar o porco para a sala de operação. Na chegada ao teatro de operação, começar imediatamente a ventilação com pressão positiva mecânica com FiO 2 0,50, 10 ml / kg volume corrente e uma freqüência de 12/min sob continua capnografia. Comece a anestesia balanceada por continua infusão intravenosa de uma combinação de midazolam 0,5 mg / kg / hr, sufentanil 2,5 mcg / kg / hr e pancurônio brometo de 0,1 mg / kg / hr. Durante toda a operação, monitorar continuamente ECG, pressão arterial, temperatura e capnografia para medir a profundidade da anestesia. Por exemplo, se uma taquicardia sinusal está presente, verifique se medicação para a dor e / ou anestesia são adequados. Infundir 4,3 mg / kg de amiodarona em 500 ml venofundin 6% por via intravenosa. Monitorar o ritmo do coração por um 5 leva ECG. Raspar e limpar a garganta e traseira limárea b. Insira um cateter de Foley. 2. Ecocardiografia transtorácica Colocar o animal em decúbito lateral direito. Em suínos da raça Landrace, como porcos Dalland, apenas paraesternal (eixo longo e curto) podem ser obtidos. Devido à forma do tórax, aquisição apical não é viável. Oriente e obter paraesternal eixo longo vista em 2D (modo B). Determine as dimensões do VE em diástole e sístole final final no modo-M. Gire a sonda echo 90 ° no sentido horário, mantendo a sua posição paraesternal para adquirir os LV eixo curto a nível da válvula mitral, músculo papilar e ápice. O eixo curto do músculo papilar e ápice pode exigir a colocação da sonda echo um ou dois espaços intercostais inferiores em relação à posição da válvula mitral curto vista eixo. 3. Surgical Acesso Preparação e Vascular Disinfect as áreas cirúrgicas com iodo a 2% e usar panos cirúrgicos estéreis para cobrir as partes não estéreis do porco. Faça uma incisão medial no pescoço. Passe a linha alba para minimizar o dano muscular e sem rodeios abordar a artéria carótida ea veia jugular interna ao lado da traquéia. Cuidadosamente isolar a artéria carótida ea veia jugular interna. Verifique se o nervo vago não está danificada. Coloque suturas Vicryl 2-0 em torno de ambos os navios para ganhar o controle embarcação. Alcançar o acesso arterial através da canulação da artéria carótida interna com uma bainha 8F pela técnica de Seldinger. Fixe a bainha até a artéria, certifique-se a artéria não está totalmente obstruído pela sutura. O acesso venoso pode ser adquirido através da canulação da veia jugular com uma bainha 9F também utilizando a técnica de Seldinger. Antes de fixar a bainha certifique-se a veia é ligado. Alternativamente, a artéria femoral também pode ser utilizado para acesso arterial. Administrar 100 IE / kg de heparina imediatamente após a inserção da bainhahs para inibir a formação de trombos. Para a medição da pressão arterial estável e constante, canular uma das artérias menores em um dos membros traseiros, fazendo uma pequena incisão acima da artéria. A artéria é encontrado logo abaixo da pele, pulsações podem ser sentidos através da pele. Isolar a artéria do seu tecido circundante. Coloque 2 suturas Vicryl 2-0 ao redor do navio, uma proximal e distal 1. Ligadura do lado distal e inserir um 18 G iv cânula e segura firmemente conectar a pressão. 4. Pressão Invasiva Análise Volume de Loop Inserir um cateter Swann-Ganz (SG) através da bainha previamente colocado na veia jugular interna. Conectar um dispositivo de débito cardíaco para a parte da SG que culmina no lúmen proximal. Injetar 5 ml de solução salina 0,9% para o lúmen proximal do SG e medir o débito cardíaco; Repita isso três vezes e calcular a média dos índices. Calibre o sistema fotovoltaico, utilizando o anteriormentesaída cardíaca determinada. Insira o cateter 7F condutância através da artéria carótida para o ventrículo esquerdo sob orientação fluoroscópica. Selecione o maior presente segmento no LV para medições de volume e executar uma varredura de linha de base em apnéia. Após a calibração do volume é completado, ficha 10-15 bate em apnéia. Remover o SG e colocar um cateter de balão na veia cava inferior ao nível do diafragma sob orientação fluoroscópica. Realize redução da pré-carga por inflar o balão em apnéia e registrar os correspondentes PV-Loops. 5. Pressão intracoronária e Medição da vazão Diluir a nitroglicerina numa concentração de 100 ug / ml e dilui-se a adenosina a uma concentração de 30 ug / ml. Posicione um cateter guia 8F no óstio da artéria coronária esquerda. Coloque o fio de pressão / fluxo combinado na parte proximal do arter coronária esquerday. Administrar 200 ug de nitroglicerina intracoronária e normalizar a pressão distai (Pd), medido pelo fio, com a pressão arterial. Coloque o fio na parte média do artéria descendente anterior esquerda (LAD). Comece a medir a pressão da linha de base e de fluxo. Induzir hiperemia pela administração de 60 mg de adenosina intracoronária, lave com 2 ml de solução salina e medir a pressão hiperemia e fluxo. Aguarde até que o fluxo de restaurar aos valores basais. Repetir a medição duas vezes. Infundir mais 200 mg de nitroglicerina intracoronária e repita os passos 1.6 e 1.7 para a artéria coronária circunflexa esquerda. 6. Indução de MI Coloque o cateter intracardíaca desfibrilação no ventrículo direito utilizando a bainha venosa. Os eléctrodos distais devem ser no vértice do ventrículo, os eléctrodos proximal do átrio e / ou veia cava superior. Conectar o cateter para o desfibrilador e configurá-lo para 50J. Medir o diâmetro da LAD distal a partir da segunda diagonal (D2) em AP e LAO 30 ° vista. Escolher um balão de angioplastia com um diâmetro de acordo com o diâmetro da LAD distal do D2 (Figura 1). Coloque um fio-guia através do cateter guia distal no LAD. Avance o cateter balão sobre o fio-guia. Colocar o balão distai do D2. Administrar 30 IE / kg de heparina. Inflar o balão até que a pressão corresponde ao diâmetro direito da LAD. Verifique a oclusão total da LAD pela angiografia (Figura 1). Cubra o campo de trabalho estéril ea ferida no pescoço com panos de campos estéreis. Livre o peito de qualquer cobertura para torná-lo disponível para as compressões torácicas ou transtorácica desfibrilação. Verifique a pressão no balão durante a próxima 90 min e restaurar a pressão, se necessário. No caso de fibrilação ventricular: Iniciar imediatamente as compressões torácicas com uma frequência de 100/min. Administrar 300 mg de amiodarona por via intravenosa na forma de bolus rápido (~ 1 min). Comece a desfibrilação intracardíaca, dar choques de 50 J. Após 5 choques sem sucesso, reiniciar as compressões torácicas. Mude desfibrilação intracardíaca à desfibrilação transtorácica e choque com 150 J. Em caso de choque sem sucesso, mudar a 200 J. Se necessário, administrar outra dose de 150 mg de amiodarona e / ou 1 mg de adrenalina. Repetir adrenalina duas vezes com intervalos de 3-5 minutos, quando necessário. Continue as compressões torácicas, intercaladas com desfibrilação transtorácica Finalizando o procedimento cirúrgico (para acompanhamento a longo prazo) Após 90 min de verificação por angiografia se o LAD é ainda totalmente ocluído. Administrar outros 30 IE / kg de heparina e desinflar o balão. Verifique a existência de reperfusão. Retire o balão vazio com o guidção a partir da bainha de cateter da carótida. Cuidadosamente remover a bainha arterial e prender a artéria carótida imediatamente com uma pinça de anastomose (Figura 1). Utilização continua pontos (6-0 prolene) para fechar a artéria carótida. Retire o grampo e verificar se há vazamentos. Remover o cateter de desfibrilhação interna e retirar a bainha da veia jugular interna. Ligadura proximal da entrada da bainha. Feche o tecido subcutâneo e pele do pescoço em duas camadas, utilizando 2-0 Vicryl. 7. Ressonância magnética cardíaca Colocar o animal na cabeça mesa MRI primeiro em decúbito dorsal sob anestesia contínua. Coloque um phased array bobina cardíaca dedicado sobre o peito do animal. Para o planejamento de imagem obter imagens de escoteiros no eixo curto e duas câmaras visualizações eixo longo. Adquirir fechado-ECG de estado estacionário de precessão livre (SSFP) cine de eixo curto (de ápice para a base de LV) e dois chamber visualizações eixos longo. Realce pelo gadolínio Tarde (LGE) pode ser adquirida usando uma recuperação inversão 3D-turbo-gradiente-eco-técnica 15 minutos após a dose dupla injeção iv bolus de um agente de contraste gadolínio base. Realizar análise off-line com software validado de parâmetros funcionais. Avaliar fração-ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE), massa do VE, o volume diastólico final, volume sistólico final, volume sistólico, débito cardíaco, e massa cicatriz. 8. Fim de Estudo e infarto Tamanho No final do estudo, a seguir protocolos 1-5 e 7 para adquirir seguimento medições. Faça uma média de 30-40 cm de incisão logo abaixo da fúrcula a um ponto logo abaixo do apêndice xifóide. Avance através da linha alba até o esterno. Dividir o xifóide e usar a tesoura Klinkenberg para separar o esterno posterior do pericárdio com cautela. Depois de usar a tesoura sem rodeios continuar mais separação. Realize uma esternotomia by por exemplo, usando um martelo e Lebsch faca. Hemorragia de medula óssea é minimizado pela fricção cera óssea na medula. Abra o tórax com um afastador de esterno. Digite o espaço pleural 3 e localizar a veia cava inferior no mediastino. Humanely sacrificar o animal, cortando a veia cava inferior sob anestesia profunda. Retirar sangue com um dispositivo de sucção. Coloque uma bateria de 9 V no ápice de induzir fibrilação ventricular. Após excisão do coração, cortado a direito e no ventrículo esquerdo em cinco fatias de base para o ápice e incubadas em 1% de cloreto de trifenil-tetrazólio dissolvido em 0,9% de solução salina a 37 ° C durante 15 min. Em seguida, lavar as fatias em 0,9% de solução salina e fotografar as fatias a partir de ambos os lados.