豚における心筋梗塞および機能的結果の評価

全てのインビボ実験は、実験動物資源協会によって調製実験動物の管理と使用に関する指針に従って行った。実験は、地元の動物実験委員会によって承認された。 1。薬、麻酔、静脈アクセス、及び挿管薬や麻酔前投薬アミオダロン150 mgの開始/不整脈を防ぐために、手術前に10日間キロ。 28日目​​には。29日目50 mg / kgの投与量を削減と研究の終了まで継続するまでの手順の日から100 mg / kgでの用量でアミオダロンを続ける。 手術および4.5 mg / kgのアセチルサリチル酸手術前に1日の前に抗血小板療法、3日目から1 mg / kgのクロピドグレルを開始します。クロピドグレル1 mg /日あたりのkgおよびアセチルサリチル酸80mg /日を続けています。 鎮痛薬1日は、フェンタニルパッチで手術前に開始し25〜70キロの豚μgの/時。適切な鎮痛薬を確保するために、24時間後に手術のためフェンタニルパッチの使用を継続する。また、推定される不快感の兆候鎮痛剤を増加させる（ つまり行動、呼吸、歩行、運動性など ） を毎日モニター。 12時間動物を絶食、水への無制限のアクセスを維持します。 麻酔不必要なストレスや不快感を防ぐために、ミダゾラム0.4 mg / kgを、ケタミン10 mg / kgであり、アトロピン0.014 mg / kgでの混合物の筋肉内注射により、その安定した中で豚を鎮静。 18 Gの静脈カニューレを耳静脈にカニューレを挿入することにより静脈アクセスを得る。 5 mg / kgのsodiumthiopentalの静脈内投与により麻酔を誘導し、感染を防ぐために、1,000 / 100mgのアモキシシリン/クラブラン酸を得た。豚は、抗生物質治療として手術後一日1,000 / 100mgのアモキシシリン/クラブラン酸を受け取ります。 endotrachを使って豚を挿管EALチューブ（〜70キロの重量を量る豚サイズ8.5）。必要に応じて12/minの周波数にバルーン換気を行い、手術室に豚を輸送する。 手術室に到着時、直ちにのFiO 2 0.50、10ミリリットル/キログラム回換気量と機械的陽圧換気を開始し、12/min下の周波数はカプノグラフィーを継続します。 ミダゾラム0.5 mg / kgの/時、フェンタニル2.5マイクログラム/キロ/時であり、パンクロニウム臭化物0.1 mg / kgの/時間の組み合わせの静脈内注入を続けることで、バランス麻酔を開始します。全体の動作中、連続的に、麻酔の深さを測定するためにECG、動脈血圧、温度、およびカプノグラフィーを監視する。洞性頻脈が存在する場合には鎮痛薬および/または麻酔が十分である場合は、確認してください。 静脈内に6％venofundin 500ミリリットル中のアミオダロンの4.3 mg / kgのを注入する。 5によって心臓のリズムを監視して心電図をリードしています。 首と後足LIMを剃るときれいB領域。 フォーリーカテーテルを挿入します。 2。経胸壁心エコー検査右側臥位で動物を配置します。このようなDalland豚などの在来種の豚では、唯一の胸骨傍のビュー（ロングとショート軸）を得ることができる。原因胸郭の形状に、心尖ビューの取得は現実的ではありません。 東洋と2D（Bモード）での胸骨傍の長軸像を得る。 Mモードでの拡張末期と収縮末期でのLV寸法を決定。 僧帽弁乳頭筋と頂点のレベルでLV短軸像を買収する胸骨の位置を維持しながら、エコープローブを時計回りに90度回転させます。乳頭筋と頂点の短軸像は、僧帽弁の短軸像のための位置を基準に低エコープローブ1または2肋間スペースの配置を必要とする場合があります。 3。手術の準備と血管アクセス感染駆除ヨウ素の2％で、外科分野をfectとブタの非滅菌部分をカバーするために、無菌の手術用ドレープを使用。 首の内側の切開を行います。筋肉の損傷を最小限に抑え、ぶっきらぼう気管の隣に頸動脈と内頸静脈にアプローチする白線を渡す。 慎重に頸動脈と内頸静脈を分離します。迷走神経が損傷を受けていないことを確認します。血管制御を得るために両方の容器の周りのVicryl 2-0縫合糸を配置します。セルジンガー法を用いて8Fシースと内頸動脈にカニューレを挿入することによって、動脈のアクセスを達成する。動脈にシースを固定し、動脈が完全に縫合によって塞がれていないことを確認してください。静脈アクセスは9Fシースはまた、セルジンガー法を用いて頸静脈にカニューレを挿入することによって取得することができる。シースを固定する前に静脈を結紮されていることを確認します。代替的に、大腿動脈にも、動脈アクセスのために使用することができる。 すぐにsheatを挿入した後100、IE / kgのヘパリンを投与し血栓形成を阻害するために、HS。 安定かつ一定の動脈圧測定のために、動脈の上にある小さな切開を行うことで、後肢の一小さい動脈のいずれかにカニューレを挿入。動脈が皮膚のすぐ下にあり、脈動は、皮膚を通して感じることができる。その周囲の組織から動脈を分離します。容器の周りの2のVicryl 2-0の縫合糸、1近位およ​​び遠位の1を配置します。先端側を連結し、18のG静脈カニューレを挿入し、しっかりと圧力を接続して固定します。 4。侵襲圧力ボリュームループ解析内頸静脈内の以前に位置したシーズを経由スワンガンツカテーテル（SG）を挿入します。 近位の内腔で絶頂に達する、SGの一部に心臓出力デバイスを接続します。 SGの近位管腔に0.9％食塩水を5ml注入し、心拍出量を測定する;この3回繰り返すと指標を平均化。 以前を使用して太陽光発電システムをキャリブレーション心拍出量を決定した。 透視下で左心室に頸動脈を経由して 7Fのコンダクタンスカテーテルを挿入します。 容積測定のためのLVで最大のセグメントに存在を選択し、ベースラインが無呼吸の下でスキャンを実行します。 体積較正が完了した後、レコード10-15無呼吸の下で打つ。 SGを削除し、透視下で、振動板の高さで劣る大静脈にバルーンカテーテルを配置。 無呼吸の下でバルーンを膨張させることで負荷軽減を実行し、対応するPV-ループを録音。 5。冠動脈内圧力および流量測定ミリリットルは100μg/の濃度でニトログリセリンを希釈し、30μg/ mlの濃度でアデノシンを希釈。 左冠状動脈の口に8Fガイディングカテーテルの位置を決めます。 左冠状arterの近位部に組み合わさ圧力/流量線を配置Y。 ニトログリセリン冠動脈内の200μgのを投与し、動脈圧で、有線で測定された先端圧力（Pd）を、正規化します。 左前下行冠動脈（LAD）の中央部分にワイヤーを配置します。 基準圧力と流量の測定を開始する。 、アデノシン冠動脈内の60μgのを投与することにより、充血を誘導生理食塩水を2ミリリットルと同一平面と充血圧力と流量を測定します。ベースラインの値に復元するために流れを待つ。二回の測定を繰り返します。 別の200μgのニトログリセリンの冠動脈内に注入し、繰り返して、左回旋冠動脈のため1.6と1.7を繰り返します。 MIの6。誘導静脈シースを使用して、右心室に心腔内除細動カテーテルを配置します。遠位電極は、心室の頂点に心房と/または上大静脈における近位電極である必要があります。除細動カテーテルを接続し、50に設定しますJ. APとLAO 30°ビューで（D2）斜めからのLAD遠位の直径を測定します。 D2（ 図1）からLAD遠位の直径に従って径の血管形成バルーンを選択してください。 遠位にLADにガイディングカテーテルを介してガイドワイヤーを配置します。 ガイドワイヤ上にバルーンカテーテルを前進させる。 D2からバルーンの遠位に配置します。 30 IE / kgのヘパリンを管理します。 圧力がLADの右直径と一致するまでバルーンを膨らませる。 血管造影（ 図1）によってLADの完全閉塞を確認してください。 無菌作業する分野、および滅菌ドレープ布で首の傷をカバーしています。胸骨圧迫や経胸腔除細動のためにそれを使用できるようにするために任意の報道から胸を解放します。 次の90分の間にバルーン内の圧力を確認し、必要に応じて圧力を復元します。 心室細動の場合：すぐに100/minの頻度で胸骨圧迫を開始します。 速いボーラス（〜1分）として静脈内の300mgアミオダ​​ロンを管理します。 50 Jの衝撃を与え、心腔内除細動を開始 5失敗したショックの後、胸骨圧迫を再開します。失敗したショックの場合、150 J.との経胸壁除細動ショックを心臓内除細動を変更、200 Jに変更必要に応じて、150ミリグラムのアミオダロンおよび/または1mgのアドレナリンの他の用量を投与する。必要に応じて3〜5分間隔で二回アドレナリンを繰り返します。 経胸壁除細動が散在し、胸部圧迫を継続手術を終えた（長期フォローアップのための） LADは、まだ完全に閉塞している場合、血管造影による90分の確認後。 別の30のIE / kgのヘパリンを投与し、バルーンを収縮させる。再灌流のために確認してください。 GUIDに収縮したバルーンを削除頸動脈鞘からカテーテルをING。 慎重に動脈シースを除去し、吻合クランプ（ 図1）で直ちに頚動脈をクランプする。使用は頸動脈を閉じるには、ステッチ（6-0プロレン）を続けています。クランプを外し、漏れをチェックする。 内部除細動カテーテルを取り外し、内頸静脈からシースを除去します。シースエントリのライゲーション近位。 2-0ビクリルを使用して2層に首の皮下組織や皮膚を閉じます。 7。心臓磁気共鳴画像連続麻酔下仰臥位で最初のMRIのテーブルの頭の上に動物を配置します。 動物の胸の上に専用フェーズドアレイ、心コイルを配置します。 画像計画のための短軸と2室の長軸像でのスカウト画像を得る。 心電図同期定常状態自由歳差運動（SSFP）短軸のシネ（頂点からのLVのベースに）と2 chambeを獲得長軸景色R。 後期ガドリニウム増強（LGE）は、反転回復3D-ターボ勾配エコー手法ガドリニウムベースの造影剤の二重用量静脈内ボーラス投与後15分を使用して取得することができる。 機能パラメータの検証ソフトウェアを使用してオフラインで解析を実行する。左室駆出率（LVEF）、LV質量、拡張末期容積、収縮末期容積、拍出量、心拍出量、および瘢痕塊を評価する。 8。研究の終了および梗塞サイズ試験終了時、フォローアップ測定値を取得するためのプロトコル1-5と7に従ってください。 ただ剣状突起下の点にちょうど胸骨上切痕下から中央値30〜40センチメートル切開を行います。胸骨まで白線を進む。剣状突起を分割し、慎重に心膜から事後胸骨を分離するためKlinkenbergはさみを使用しています。ぶっきらぼうにハサミを使用した後、さらに分離を継続する。胸骨切開Bを実行するY 例えばハンマーとLebschナイフを使用。骨髄出血は骨髄に骨ろうを擦ることにより最小化される。胸骨リトラクタで胸部を開きます。 第三胸膜腔に入り、縦隔に劣る大静脈の位置を確認します。 人道的に深い麻酔下で劣る大静脈を切断した動物を安楽死させる。吸引装置で血液を除去。心室細動を誘発するために頂点に9 Vバッテリーを置きます。 心の切除した後、右をカットし、頂点までのベースから5スライスに心室を出て、15分間、37℃で0.9％生理食塩水に溶解し、1％トリフェニルテトラゾリウムクロライド中でインキュベートした。次に、0.9％食塩水にスライスを洗って、両側からのスライスを撮影しています。