Myokardinfarkt und Functional Outcome Assessment in Schweine

Alle in-vivo-Experimente wurden in Übereinstimmung mit dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durch das Institut für Labortier Ressourcen vorbereitet durchgeführt. Die Versuche wurden von der örtlichen Tierversuchs Committee genehmigt. 1. Medikamente, Anästhesie, Venenzugang und Intubation Medikamente und Anästhesie Prämedikation Starten Sie Amiodaron 150 mg / kg 10 Tage vor der Operation, um Herzrhythmusstörungen zu verhindern. Weiterhin Amiodaron in einer Dosierung von 100 mg / kg vom Tag des Verfahrens bis zum Tag 28 auf. Reduzieren der Dosis auf 50 mg / kg am Tag 29 und weiter bis zum Ende der Studie. Starten Sie Anti-Thrombozyten-Therapie, 1 mg / kg Clopidogrel von Tag 3 vor der Operation und 4,5 mg / kg Acetylsalicylsäure 1 Tag vor der Operation. Weiterhin Clopidogrel 1 mg / kg pro Tag und Acetylsalicylsäure 80 mg / Tag. Starten Sie Schmerzmittel 1 Tag vor der Operation von Fentanyl-Patch, 25ug / h für ~ 70 kg Schweine. Fahren Sie mit der Verwendung von Fentanyl Patches für 24 Stunden nach der Operation, um eine ausreichende Schmerzmittel zu gewährleisten. Auch Tages Monitor auf Anzeichen von vermeintlichen Beschwerden (dh Verhalten, Atmung, Gang, Beweglichkeit, etc.), um Schmerzmittel zu erhöhen. Schnell das Tier 12 Stunden, zu erhalten unbegrenzten Zugang zu Wasser. Anästhesie Um unnötigen Stress und Unbehagen zu verhindern, sedieren das Schwein in seiner stabilen, durch intramuskuläre Injektion einer Mischung von Midazolam 0.4 mg / kg, Ketamin 10 mg / kg Atropin und 0,014 mg / kg. Erhalten venösen Zugang durch Kanülieren des Ohrvene mit einer 18 G iv-Kanüle. Induzieren Anästhesie durch intravenöse Verabreichung von 5 mg / kg sodiumthiopental und geben 1000/100 mg Amoxicillin / Clavulansäure, um Infektionen zu verhindern. Das Schwein wird 1000/100 mg Amoxicillin / Clavulansäure der Tag nach der Operation Antibiotika-Behandlung erhalten. Intubate das Schwein durch die Verwendung eines endotracheal Rohr (Größe 8,5 für Schweine mit einem Gewicht von ca. 70 kg). Bei Bedarf führen Ballon-Beatmung mit einer Frequenz von 12/min und transportieren das Schwein, um den OP. Bei der Ankunft auf dem OP sofort mechanische Überdruckbeatmung beginnen mit FiO 2 0,50, 10 ml / kg Tidalvolumen, und einer Frequenz von 12/min unter Kapnographie weiter. Starten ausgewogene Anästhesie durch intravenöse Infusion weiterhin aus einer Kombination von Midazolam 0,5 mg / kg / h, Sufentanil 2,5 Mikrogramm / kg / h und Pancuroniumbromid 0,1 mg / kg / h. Während des ganzen Vorgangs kontinuierlich überwachen EKG, arterieller Blutdruck, Temperatur und capnography zu Narkosetiefe zu messen. Zum Beispiel, wenn ein Sinus-Tachykardie vorhanden ist, prüfen Sie, ob Schmerzmittel und / oder Anästhesie angemessen sind. Infuse 4,3 mg / kg in 500 ml Amiodaron venofundin 6% intravenös. Überwachung des Herzrhythmus durch ein EKG-5 führt. Rasur und reinigen Sie den Nacken und Hinter limb-Bereich. Legen Sie eine Foley-Katheter. 2. Transthorakale Echokardiographie Legen Sie das Tier in die richtige Seitenlage. In Landrasse Schweine wie Dalland Schweine, kann nur parasternal Ansichten (lange und kurze Achse) erhalten werden. Aufgrund der Form des Brustkorbes ist Apikalansicht Nahme nicht machbar. Orient und parasternalen langen Achse in 2D (B-Modus) zu erhalten. Bestimmen Sie die LV Dimensionen am Ende der Diastole und Systole Ende im M-Modus. Drehen Sie die Echo-Sonde 90 ° im Uhrzeigersinn, unter Beibehaltung seiner Position, um die parasternalen kurzen Blick LV-Achse auf der Ebene der Mitralklappe, Papillarmuskel und Spitze zu erwerben. Die kurzen Achse der Papillarmuskel und Spitze kann Platzierung der Echo-Sonde benötigen ein oder zwei Zwischenrippenräume unteren Bezug auf die Position für die Mitralklappe kurzen Achse. 3. Chirurgische Vorbereitung und Gefäßzugang Disinfect die chirurgischen Bereichen mit Jod 2% und sterile OP-Abdeckungen, die nicht sterile Teile des Schweins zu decken. Machen Sie eine mediale Inzision in den Nacken. Übergeben Sie die Linea alba, um Muskelschäden zu minimieren und unverblümt nähern sich der Halsschlagader und der internen Halsschlagader neben der Luftröhre. Sorgfältig isolieren der Halsschlagader und der internen Halsschlagader. Stellen Sie sicher, dass der Vagus-Nerv ist unbeschädigt. Zeigen Vicryl 2-0 Nähte rund um die beiden Schiffe, Schiff Kontrolle zu erlangen. Erreichen arteriellen Zugang Kanülieren die innere Halsschlagader mit einem Mantel 8F mit der Seldinger-Technik. Befestigen Sie den Mantel an der Arterie, stellen Sie sicher, dass die Arterie nicht vollständig durch die Naht verschlossen. Venösen Zugang kann durch Kanülieren des Halsschlagader mit einem 9F Mantel auch über die Seldinger-Technik erworben werden. Vor der Befestigung der Mantel sicherzustellen, dass die Vene ligiert. Alternativ kann die Femoralarterie auch arteriellen Zugang verwendet werden. Verwalten 100 IE / kg Heparin sofort nach dem Einlegen der sheaths Thrombusbildung hemmen. Für eine stabile und konstante arteriellen Druckmessung kanülieren einer der kleineren Arterien in eine der hinteren Gliedmaßen durch einen kleinen Schnitt oberhalb der Arterie. Die Arterie wird direkt unter der Haut gefunden wird, kann Pulsationen durch die Haut zu spüren. Isolieren Sie die Arterie von seiner Umgebungsgewebe. Platz 2 Vicryl 2-0 Nähte rund um das Schiff, 1 proximalen und distalen ein. Ligation des distalen Seite und legen Sie eine 18 G iv Kanüle und sicher dicht verbinden den Druck. 4. Invasive Druck Volumen-Kurve Analyse Legen Sie eine Swann-Ganz-Katheter (SG) über die zuvor platzierten Mantel in der internen Halsschlagader. Schließen Sie einen Herzausgabegeräts und der Teil der SG, die in den proximalen Lumen gipfelt. Spritzen 5 ml 0,9% Kochsalzlösung in den proximalen Lumen des SG und die Herzleistung zu messen; wiederholen Sie dies drei Mal und der Mittelwert der Indizes. Kalibrieren Sie die PV-Anlage mit Hilfe der zuvorbestimmt die Herzleistung. Legen Sie die Leitfähigkeit 7F Katheter über die Arteria carotis in den linken Ventrikel unter Durchleuchtungskontrolle. Wählen Sie in der LV das größte Segment vorhanden für Volumenmessungen und eine Baseline werden unter Apnoe. Nach Volumen Kalibrierung abgeschlossen ist, schlägt Rekord 10-15 unter Apnoe. Entfernen Sie die SG und setzen Sie ein Ballonkatheter in die untere Hohlvene auf der Ebene der Membran unter Durchleuchtungskontrolle. Führen Vorspannung Reduktion durch Aufblasen des Ballons unter Apnoe und notieren Sie die entsprechenden PV-Loops. 5. Intrakoronare Druck-und Durchflussmessung Verdünnte Nitroglycerin in einer Konzentration von 100 ug / ml verdünnt und Adenosin in einer Konzentration von 30 ug / ml. Positionierung eines 8F Führungskatheter in das Ostium der linken Koronararterie. Setzen Sie den kombinierten Druck / Durchfluss Draht im proximalen Teil der linken Herzkranz artery. Verwalten 200 ug von Nitroglycerin intrakoronare und normalisieren den distalen Druck (Pd), gemessen durch den Draht, mit dem arteriellen Druck. Legen Sie den Draht in der Mitte Teil der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD). Starten Sie die Messung Basisdruck und Durchfluss. Induzieren Hyperämie durch Verabreichung 60 ug intrakoronaren Adenosin, bündig mit 2 ml Kochsalzlösung und messen hyperemisierend Druck und Durchfluss. Warten Sie, bis die Strömung um auf die Ausgangswerte wiederherzustellen. Zweimal wiederholen Sie die Messung. Infuse weiteren 200 ug Nitroglycerin intrakoronare und wiederholen Sie die Schritte 1.6 und 1.7 für die linke Herzkranzarterie. 6. Induktion von MI Platzieren der intrakardialen Defibrillationselektrode Katheter in die rechte Herzkammer mit der venösen Hülle. Die distalen Elektroden sollten in der Spitze des Ventrikels, die proximalen Elektroden im Atrium und / oder der oberen Hohlvene sein. Verbinden Sie den Katheter mit dem Defibrillator und setzen ihn auf 50J. Messen Sie den Durchmesser der LAD distal von der zweiten Diagonale (D2) in AP und LAO 30 °-Ansicht. Wählen eines Angioplastie-Ballons mit einem Durchmesser nach dem Durchmesser der LAD distal von der D2 (Fig. 1). Positionieren Sie einen Führungsdraht durch den Führungskatheter distal in der LAD. Schieben Sie den Ballonkatheter über den Führungsdraht. Setzen Sie den Ballon distal von der D2. Verwalten 30 IE / kg Heparin. Den Ballon bis der Druck den richtigen Durchmesser der LAD einstimmt. Überprüfen Gesamt Okklusion der LAD durch Angiographie (Abbildung 1). Bedecken Sie den sterilen Arbeitsfeld und die Wunde in den Hals mit sterilen Tüchern Tücher. Befreien Sie die Brust von jedem Abdeckung es für die Herzdruckmassage oder transthorakale Defibrillation verfügbar zu machen. Den Druck im Ballon während der nächsten 90 Minuten und Wiederherstellung des Drucks, falls erforderlich. Im Falle von Kammerflimmern: Herzdruckmassage beginnen sofort mit einer Frequenz von 100/min. Verwalten 300 mg Amiodaron intravenös als Bolus schnell (~ 1 min). Starten intra Defibrillation, geben Schocks von 50 J. Nach 5 erfolglosen Schocks, starten Sie die Herzdruckmassage. Ändern intra Defibrillation transthorakale Defibrillation und Schock mit 150 J. Im Falle der erfolglosen Schock, auf 200 J. ändern Falls notwendig, eine weitere Dosis verabreichen von 150 mg Amiodaron und / oder 1 mg Adrenalin. Wiederholen Adrenalin zweimal mit Abständen von 3-5 min, wenn notwendig. Weiter Herzdruckmassage, mit der transthorakalen Defibrillation durchsetzt Finishing der Surgical Procedure (für Long Term Follow Up) Nach 90 Minuten Scheck durch Angiographie, wenn die LAD wird noch immer vollständig verschlossen. Verwalten weitere 30 IE / kg Heparin und die Luft aus dem Ballon. Prüfen Sie, ob der Reperfusion. Entfernen Sie den leeren Luftballon mit der GUIDten Katheter aus der Halsschlagmantel. Entfernen Sie vorsichtig die Arterienscheide und klemmen die Halsschlagader ab sofort mit einer Anastomose Klemme (Abbildung 1). Verwenden Sie weiterhin Stiche (6-0 Prolene), um die Halsschlagader zu schließen. Entfernen Sie die Klemme und auf Dichtheit prüfen. Entfernen Sie die interne Defibrillation Katheter und entfernen Sie den Mantel von der internen Halsschlagader. Ligats proximal der Hülle Eintrag. Schließen Sie die Unterhaut und Haut des Halses in zwei Schichten mit 2-0 Vicryl. 7. Cardiac Magnetic Resonance Imaging Legen Sie das Tier auf dem MRT-Tisch Kopf zuerst in Rückenlage unter Daueranästhesie. Legen Sie ein gewidmet Phased-Array-Spule Herz über die Brust des Tieres. Für die Bildplanung erhalten scout Bilder in kurzen Achse und Zwei-Kammer-Blick lange Achse. Erwerben EKG-gesteuerten stationären kostenlos Präzession (SSFP) cine kurze Achse (von der Spitze zur Basis des LV) und zwei chamber Aussicht langen Achse. Später Gadolinium Enhancement (LGE) kann mit Hilfe eines 3D-Inversion-Recovery-Turbo-Gradienten-Echo-Technik, 15 min nach doppelten Dosis iv Bolus-Injektion eines Kontrastmittels Gadolinium erworben werden. Führen Sie die Offline-Analyse mit validierten Software von Funktionsparametern. Bewerten linksventrikuläre Ejektionsfraktion (LVEF), LV Masse enddiastolischen Volumen, endsystolische Volumen, Schlagvolumen, Herzzeitvolumen und Narbenmasse. 8. Ende der Studien-und Infarktgröße Am Ende der Studie, folgen Protokolle 5.1 und 7 zu verfolgen Messungen zu erwerben. Machen Sie eine mediane 30-40 cm Schnitt von knapp unter dem Jugulum bis zu einem Punkt direkt unterhalb der Schwertfortsatz. Vorsprung durch die Linea alba bis zum Brustbein. Teilen Sie die Schwertfortsatz und benutzen Klinkenberg Schere, um die hinteren Brustbein aus dem Herzbeutel mit Vorsicht zu trennen. Nach der Verwendung der Schere stumpf weiterhin weitere Trennung. Führen Sie eine Sternotomie by z. B. mit einem Hammer und Lebsch Messer. Das Knochenmark wird durch Reiben Blutungen Knochenwachs auf dem Mark minimiert. Öffnen Sie den Brustkorb mit einem Brustbein-Retraktor. Geben Sie den dritten Pleuraraum und suchen Sie die minderwertigen Hohlvene im Mediastinum. Menschlich das Tier einschläfern durch Schneiden der minderwertigen Hohlvene unter tiefer Narkose. Entfernen Sie mit einem Blutsauger. Legen Sie eine 9-V-Batterie auf der Spitze, um Kammerflimmern zu induzieren. Nach Exzision des Herzens, schneiden die rechten und linken Herzkammer in fünf Scheiben von der Basis bis zur Spitze und in 1%-Triphenyl-tetrazoliumchlorid in 0,9% Kochsalzlösung bei 37 ° C für 15 min inkubiert. Weiter, waschen Sie die Scheiben in 0,9% Kochsalzlösung und fotografieren Sie die Scheiben von beiden Seiten.