Myocardinfarct en Functional Outcome Assessment in Pigs

Alle in vivo experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren opgesteld door het Institute of Laboratory Animal Resources. Experimenten werden goedgekeurd door de lokale Dierproevenbesluit Comite. 1. Medicatie, Anesthesie, veneuze Access en intubatie Medicatie en Anesthesie Premedicatie Start amiodaron 150 mg / kg 10 dagen voor chirurgie om aritmieën te voorkomen. Verder amiodaron in een dosis van 100 mg / kg op de dag van de procedure tot dag 28. Verlaag de dosering tot 50 mg / kg op dag 29 en tot het einde van de studie. Start anti-bloedplaatjes therapie, 1 mg / kg clopidogrel vanaf dag 3 voor de operatie en 4,5 mg / kg acetylsalicylzuur 1 dag voor de operatie. Doorgaan clopidogrel 1 mg / kg per dag en acetylsalicylzuur 80 mg / dag. Start pijnmedicatie 1 dag voorafgaand aan de operatie door Fentanyl pleister, 25ug / uur gedurende ~ 70 kg varkens. Voortzetten van het gebruik van Fentanyl pleisters gedurende 24 uur post-operatief een adequate pijnmedicatie garanderen. Ook dagelijks controleren op tekenen van mogelijke ongemak (bijvoorbeeld gedrag, ademhaling, lichaamshouding, mobiliteit enz.) pijnstillers verhogen. Snel het dier gedurende 12 uur, behouden onbeperkte toegang tot water. Anesthesie Om onnodige stress en ongemak te voorkomen, verdoven het varken in zijn stal door intramusculaire injectie van een mengsel van midazolam 0,4 mg / kg ketamine 10 mg / kg, en atropine 0.014 mg / kg. Verkrijgen veneuze toegang cannuleren het oor ader met een 18 G iv canule. Laten verdoofd door intraveneuze toediening van 5 mg / kg sodiumthiopental en geef 1000/100 mg amoxicilline / clavulaanzuur om infecties te voorkomen. Het varken zal 1000/100 mg amoxicilline / clavulaanzuur ontvangen de dag na de operatie als behandeling met antibiotica. Intubate het varken met behulp van een endotrachpaling buis (maat 8,5 voor varkens met een gewicht van ~ 70 kg). Indien nodig voeren ballon-ventilatie met een frequentie van 12/min en transporteren het varken naar de operatiekamer. Bij aankomst op de operatiekamer, onmiddellijk beginnen met mechanische positieve druk ventilatie met FiO 2 0.50, 10 ml / kg ademvolume, en een frequentie van 12/min onder blijft capnografie. Begin evenwichtige anesthesie voortgezet door intraveneuze infusie van een combinatie van midazolam 0,5 mg / kg / uur, sufentanil 2,5 microg / kg / uur en pancuroniumbromide 0,1 mg / kg / uur. Tijdens de gehele procedure, permanent toezicht ECG, bloeddruk, temperatuur en capnografie diepte van anesthesie meten. Als bijvoorbeeld een sinustachycardie aanwezig is, controleer dan pijnstillers en / of anesthesie toereikend. Bezielen 4.3 mg / kg amiodaron in venofundin 6% intraveneus 500 ml. Monitor hartritme door een 5 leidt ECG. Scheren en reinigen van de hals en achterste limb gebied. Plaats een Foley katheter. 2. Transthoracale Echocardiografie Plaats het dier in de juiste zijligging. In landras varkens zoals Dalland varkens, kan alleen parasternale uitzicht (lange en korte as) worden verkregen. Door de vorm van de thorax, apicale aanzicht verkrijging niet haalbaar. Orient en het verkrijgen parasternale lange as weergave in 2D (B-mode). Bepaal de LV afmetingen aan het eind diastole en eind systole in M-modus. Draai de echo sonde 90 ° met de klok mee met behoud van haar parasternale positie om de LV korte views as te verwerven op het niveau van de mitralisklep, papillairspier en apex. De korte as aanzicht van de papillaire spier en de apex kan plaatsing van de echo-probe zijn een of twee intercostale ruimten onderste opzichte van de positie van de mitralisklep korte as weergeven. 3. Chirurgische Voorbereiding en Vascular Access Disinfect de chirurgische gebieden met jodium 2% en steriel chirurgisch afdekmateriaal aan de niet-steriele delen van het varken te dekken. Voeg een mediale incisie in de nek. Passeer de linea alba om spierschade te minimaliseren en botweg de aanpak van de halsslagader en de interne halsader naast de luchtpijp. Isoleren van de halsslagader en de interne halsader zorgvuldig. Zorg ervoor dat de nervus vagus is onbeschadigd. Plaats Vicryl 2-0 hechtingen rond beide schepen om controle vat krijgen. Bereiken arteriële toegang cannuleren de interne halsslagader met een 8F schede met de Seldingertechniek. Bevestig de mantel om de slagader, zorg ervoor dat de slagader niet volledig afgesloten door de hechtdraad. Veneuze toegang kan worden verkregen door cannuleren de halsader met een 9F schede ook met behulp van de Seldingertechniek. Alvorens de schede zorg ervoor dat de ader wordt afgebonden. Alternatief kan de femorale slagader ook voor arteriële. Dien 100 IE / kg heparine onmiddellijk na het plaatsen van de mantelhs trombusvorming remmen. Voor een stabiele en constante bloeddruk meting canule een van de kleinere slagaders in een van de achterpoten door een kleine incisie boven de slagader. De slagader is te vinden net onder de huid, kunnen pulsaties worden gevoeld door de huid. Isoleer de slagader van de omringende weefsel. Plaats 2 Vicryl 2-0 hechtingen rond het vat, 1 proximale en distale 1. Ligeren de distale zijde en plaats een 18 G iv canule en zet strak sluit de druk. 4. Invasieve druk Volume Loop Analyse Plaats een Swann-Ganz katheter (SG) via de eerder geplaatste schede in de interne halsader. Sluit een cardiac output apparaat om het deel van de SG die culmineert in het proximale lumen. Injecteer 5 ml 0,9% zoutoplossing in het proximale lumen van de SG en meet cardiac output; Herhaal dit drie keer en het gemiddelde van de indices. Kalibreer de PV-installatie met behulp van de eerderbepaald hartminuutvolume. Plaats de 7F conductantiecatheter via de halsslagader in de linker ventrikel onder fluoroscopische begeleiding. Selecteer het grootste segment in de LV voor volume metingen en het uitvoeren van een baseline scan onder apneu. Na volume kalibratie is voltooid, op te nemen 10-15 beats onder apneu. Verwijder de SG en plaats een ballonkatheter in de inferieure vena cava ter hoogte van het membraan onder fluoroscopische begeleiding. Voer preload reductie door het opblazen van de ballon onder apneu en noteer de bijbehorende PV-Loops. 5. Intracoronary Druk en Flow Measurement Verdun nitroglycerine in een concentratie van 100 ug / ml en verdun adenosine in een concentratie van 30 ug / ml. Plaats een 8F geleidingskatheter in het ostium van de linker kransslagader. Plaats de gecombineerde druk / debiet draad in het proximale gedeelte van de linker coronaire artery. Dien 200 ug nitroglycerine intracoronaire en normaliseren het distale druk (Pd), gemeten door de draad, de arteriële druk. Plaats de draad in het midden gedeelte van de LAD (LAD). Start nulmeting druk en debiet. Laten hyperemie door toediening van 60 ug adenosine intracoronaire spoelen met 2 ml zoutoplossing en meet hyperemic druk en debiet. Wacht tot de stroom te herstellen tot de uitgangswaarden. Herhaal de meting twee keer. Bezielen ander 200 ug nitroglycerine intracoronary en herhaal de stappen 1.6 en 1.7 voor de linker circumflex kransslagader. 6. Inductie van MI Plaats de defibrillatie intracardiale katheter in de rechter ventrikel via de veneuze mantel. Het distale elektroden moet in de top van de ventrikel, de proximale elektroden in het atrium en / of superieure vena cava. Sluit de katheter aan de defibrillator en zet deze op 50J. Meet de diameter van de LAD distaal van de tweede diagonaal (D2) in AP en LAO 30 ° weergeven. Kies een angioplastie ballon met een doorsnede volgens de diameter van de LAD distaal van het D2 (figuur 1). Plaats een voerdraad door de geleidekatheter distaal in de LAD. Vooraf de ballonkatheter over de voerdraad. Plaats de ballon distaal van de D2. Dien 30 IE / kg heparine. Blaas de ballon tot de druk overeenkomt met de juiste diameter van de LAD. Controleer totale occlusie van de LAD door angiografie (figuur 1). Bedek het steriele werkveld en de wond in de hals met steriele doeken doeken. Bevrijd de borst van elke dekking aan het beschikbaar voor hartmassage of transthoracale defibrillatie maken. Controleer de druk in de ballon tijdens de volgende 90 min en de druk indien nodig herstellen. Bij ventriculaire fibrillatie: Onmiddellijk beginnen met hartmassage met een frequentie van 100/min. Dien 300 mg amiodaron intraveneus als een snelle bolus (~ 1 min). Start intracardiale defibrillatie, geven schokken van 50 J. Na 5 mislukte schokken, start hartmassage. Verander intracardiale defibrillatie te transthoracale defibrillatie en schokken met 150 J. In het geval van onsuccesvol shock, veranderen naar 200 J. Zo nodig op een andere dosis van 150 mg amiodaron en / of 1 mg adrenaline. Herhaal adrenaline tweemaal met tussenpozen van 3-5 minuten, indien nodig. Doorgaan hartmassage, afgewisseld met transthoracale defibrillatie Afwerking van de chirurgische procedure (voor Long Term Follow Up) Na 90 min controle door angiografie als de LAD is nog steeds volledig afgesloten. Dien eens 30 IE / kg heparine en leeglopen van de ballon. Controleer voor reperfusie. Verwijder de leeggelopen ballon met de guiding katheter uit de carotis schede. Verwijder voorzichtig de arteriële sheath en klem de halsslagader onmiddellijk met een anastomose klem (Figuur 1). Gebruik blijft steken (6-0 Prolene) de halsslagader sluiten. Verwijder de klem en controleer op lekkages. Verwijder de interne defibrillatie katheter en verwijder de huls van de interne halsader. Ligeer proximaal van de huls binnenkomst. Sluit de subcutis en de huid van de nek in twee lagen met behulp van 2-0 Vicryl. 7. Cardiac Magnetic Resonance Imaging Plaats het dier op de MRI tafel hoofd eerst in rugligging onder continue verdoving. Plaats een gewijd phased array cardiale coil over de borst van het dier. Voor het plan te krijgen scout afbeeldingen in korte as en uitzicht lange as met twee kamers. Acquire-ECG gated steady-state vrije precessie (SSFP) cine van korte as (van top naar de basis van LV) en twee chamber uitzicht lange as. Late gadolinium enhancement (LGE) kan worden verkregen met behulp van een inversie herstel 3D-turbo-gradiënt-echo-techniek 15 minuten na dubbele dosis iv bolus injectie van een gadolinium gebaseerd contrastmiddel. Voer offline analyse met gevalideerde software functionele parameters. Beoordelen linker ventrikel ejectiefractie (LVEF), LV massa, eind diastolisch volume, eind systolisch volume, slagvolume, het hartminuutvolume en litteken massa. 8. Einde van de studie en grootte van het infarct Aan het eind van de studie, volgen protocollen 1-5 en 7 te volgen metingen verkrijgen. Maak een mediane 30-40 cm incisie net onder de suprasternal inkeping tot een punt net onder de zwaardvormig proces. Vooraf door de linea alba tot aan het borstbeen. Splits de zwaardvormig en gebruik Klinkenberg schaar om het achterste borstbeen te scheiden van het hartzakje met de nodige voorzichtigheid. Na gebruik van de schaar bot blijven verdere scheiding. Voer een sternotomy by bijvoorbeeld met een hamer en Lebsch mes. Beenmerg bloeden wordt geminimaliseerd door te wrijven bot was op het merg. Open de thorax met een borstbeen oprolmechanisme. Voer de 3e pleuraholte en zoek de inferieure vena cava in het mediastinum. Humaan euthanaseren van het dier door het snijden van de inferieure vena cava onder diepe narcose. Verwijder bloed met een zuig-apparaat. Plaats een 9 V batterij op de top om ventriculaire fibrillatie induceren. Na excisie van het hart, snijden de rechter en linker hartkamer in vijf plakken van basis tot top en geïncubeerd in 1% trifenyl-tetrazoliumchloride opgelost in 0,9% zoutoplossing bij 37 ° C gedurende 15 minuten. Vervolgens was de plakjes in 0,9% zoutoplossing en fotograferen de segmenten van beide kanten.