Тестирование<em> Дрозофилы</em> Обоняние с Y-лабиринт Пробирной
Summary
Мы представляем тест выбор, чтобы выявить влияние пахучих веществ на Drosophila поведения с помощью Y-лабиринт анализа.
Abstract
Обнаружение сигналов из окружающей среды имеет важное значение для животных, чтобы обеспечить их выживание. С этой целью они используют экологические сигналы, такие как видение, mechanoreception, слуха и chemoperception через вкус, через прямой контакт или через обоняния, который представляет ответ на летучих молекулы действующего на большей дальности. Летучие химические молекулы очень важные сигналы для большинства животных в обнаружении опасности, источник питания, или для обмена данными между физическими лицами. Дрозофилы является одним из наиболее распространенных биологических моделей для ученых, чтобы исследовать клеточные и молекулярные основы обоняния. Чтобы подчеркнуть обонятельные способности этого маленького насекомого, мы описываем модифицированный выбор протокол, основанный на тесте на Y-лабиринт классически используется с мышами. Данные, полученные с Y-лабиринты дать ценную информацию, чтобы лучше понять, как животные иметь дело с их постоянно меняющихся условиях. Введем протокол шаг за шагом изучатьВоздействие пахучих веществ на лету разведочного ответ, используя эту Y-лабиринт анализа.
Introduction
Хеморецепция через вкуса или обоняния является ключевым сенсорные модальности для выживания животных. Это дает жизненные сигналы, необходимые для обнаружения опасности или источников питания, а также для социальных взаимодействий. Он также помогает животным, чтобы найти партнера необходимую секс для их воспроизводства. На протяжении более 20 лет, интенсивные исследования, в том числе лауреат Нобелевской премии работы Ричард Аксель и Линда Бак в 2004 году "за открытия, одоранта рецепторов и организации обонятельной системы", была проведена выявить молекулярные и клеточные основы обоняние 1,2.
Один из любимых животных моделях для ученых рассекать обонятельный восприятие является Д. MELANOGASTER. Это насекомое похожая клеточной и молекулярной запах кодирования стратегию с млекопитающих. Научное сообщество использует различные поведенческие парадигмы, чтобы изучить роль отдушек в этой плодовой мухи. Эти тесты включают мультимодальные анализы, такие как courtshiр Тесты, где различные сенсорные модальности, в том числе обоняния, которые важны для выявления мужского ухаживания 3. Другие анализы также были разработаны для решения роль одорантов более конкретно; к ним относятся Т-лабиринты, Y-лабиринты, ловушки анализы, четыре полевых арен и аэродинамических трубах 4,5,6,7,8.
В этой статье мы приведем простой модифицированный Y-лабиринт анализа, которая обеспечивает надежные обонятельные ответы с помощью D. MELANOGASTER. Наш набор использует конечных советы в отличие от ранее описанного метода 9. Таким образом, наше Y-лабиринт имеет два преимущества. Во-первых, он позволяет избежать возвращения в системе после того, как муха сделала свой выбор. Во-вторых, это ограничивает обмен пахучих веществ во всех областях Y-образном лабиринте. Этот последний преимуществом является важным, поскольку Drosophila очень чувствительны к воздушным потоком, которая часто используется, чтобы избежать одоранта насыщенность. Для регулировки экспериментальной установки с воздушным потоком будет время и стоимость трудоемким. Таким образом, наша Y-лабиринт анализ представляет собой эффициента и быстрый способ проверить обонятельный производительность дрозофилы.
Protocol
Representative Results
Discussion
Наш протокол Y-лабиринт основан на описанной выше протоколом 9. Тем не менее, мы вводим два основных отличия. Во-первых, мы используем узкие наконечники для предотвращения мух от возвращения, как только они решили вступить в пробирку, содержащую растворитель или растворитель плюс ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим 4 анонимных рецензентов за их работу, чтобы улучшить рукопись. Мы благодарим Национальный центр Научных Исследований за финансовую поддержку в МБГ и Ю.Г. и Университет Бургундии и французское министерство исследований в MMS. Исследования в лаборатории Ю. Г. финансируется Европейского исследовательского совета (ERC Начиная Грант, GliSFCo-311403), Национальное агентство по де-ла-Recherche (ANR-JCJC, GGCB-2010), в Conseil Régional Бургундии (Faber), и CNRS.
Materials
| Drosophila Polystyrene tube | VWR europe | 734-2255 | 30 x 25 mm Y-maze |
| Drosophila Borosilicate tube | Dijon verre | 95 X 25 mm Y-maze |
|
| Foam stopper | Dutscher | 999038 | Y-maze |
| Y-shaped connector | Europrix | 11020605 | Y-maze |
| 100-1000µl pipet tips | Corning | 4868 | Join the following pipet tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipet tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ∼2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipet tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial. Y-maze |
| Far-Red LED Bulb | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Phenylacetic Acid | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Yeast | Sensient Flavors Strasbourg | 1018880464 | |
| Cornmeal | eurogerm | Farine de maïs | |
| Agar | Kalys | HP-697-25 | |
| Methyl hydroxy 4 benzoate | VWR international | 25605293 |
References
- Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).
- Silbering, A. F., Benton, R. Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: ‘chance or design. EMBO Rep. 11, 173-179 (2010).
- Ziegler, A. B., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. The smell of love in Drosophila. Front. Physiol. 4, (2013).
- Silbering, A. F., et al. Complementary function and integrated wiring of the evolutionarily distinct Drosophila olfactory subsystems. J. Neurosci. 31, 13357-13375 (2011).
- Grosjean, Y., et al. An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila. Nature. 478, 236-240 (2011).
- Woodard, C., Huang, T., Sun, H., Helfand, S. L., Carlson, J. Genetic analysis of olfactory behavior in Drosophila: a new screen yields the ota mutants. Genetics. 123, 315-326 (1989).
- Semmelhack, J. L., Wang, J. W. Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion. Nature. 459, 218-223 (2009).
- Budick, S. A., Dickinson, M. H. Free-flight responses of Drosophila melanogaster to attractive odors. The Journal of Experimental Biology. 209, 3001-3017 (2006).
- Martin, F., Charro, M. J., Alcorta, E. Mutations affecting the cAMP transduction pathway modify olfaction in Drosophila. J. Comp. Physiol. A. 187, 359-370 (2001).
- Barron, A. B. Anaesthetising Drosophila for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).
- Ai, M., et al. Acid sensing by the Drosophila olfactory system. Nature. 468, 691-695 (2010).
- Becher, P. G., Bengtsson, M., Hansson, B. S., Witzgall, P. Flying the fly: long-range flight behavior of Drosophila melanogaster to attractive odors. J. Chem. Ecol. 36, 599-607 (2010).
