全マウント神経筋接合解析のための トランス対アブドミン筋 の解剖

このビデオでは、マウスからのTVA筋肉の解剖と筋肉内のNmJの全マウント免疫蛍光標識のためのプロトコルを詳述しました。また、この筋肉を示すデータを示すデータを提示し、SMAのマウスモデルにおける神経筋接合病理を解析するために使用することができる。

この手法の成功は、さまざまな要因に依存しています。最も一般的な問題のいくつかを以下に概説します。まず、免疫体質染色が悪い。これには、このプロトコルに記載されているものとは異なる試薬を使用することが最も一般的な理由の1つがあります。高品質の電子顕微鏡検査グレードPFAは、このプロトコルに記載されている抗体の選択と同様に、良好な染色を確保するために非常に重要です。さらに、古い動物(すなわち>3ヶ月)では、良質の染色を得ることはより困難な場合があります。これは、筋肉を取り巻く筋膜の厚さの増加と、外的斜めと 斜めの 腹部との間の脂肪蓄積の増加のためである。免疫蛍光に進む前に、脂肪を取り除くことを重要です。また、筋肉を覆う筋膜の一部を剥ぎ取る必要があるかもしれません, これは厚くなる可能性があります.筋線維に何らかの損傷を与え、インナーブパターンに混乱を招くことなく、筋膜や脂肪を筋肉から取り除くのは困難な場合があります。しかし、この技術を注意深く行えば、少なくとも1歳までマウスから良好な品質染色を得ることができる。若いマウス(すなわち、3ヶ月未満の)では、筋線維のからかいや分離を行う必要はないはずです。第二に:解剖および染色に続くNmJを見つけることが困難である。これはしばしば、解剖が最後の肋骨の下に広がっていないためです。NmJの大部分は、最後の肋骨のすぐ下に位置しているので、筋肉のこの部分が解剖に含まれていることを確認するために注意を払う必要があります。第三に: TVA筋肉にEO筋肉の付着.これは、個人が内部斜め(IO)筋肉のレベルを下回る解剖を拡張しようとする場合にしばしば苦情です。IOも存在するTVA筋肉の面積は、どの筋肉がどの筋肉であるかの区別が困難な場合があり、分析が難しい。このため、私たちは日常的にTVA筋肉の最も優れた部分を解剖するだけです。このレベルでは、EOとTVAの筋肉の間に付着性がないため、これは重大な問題ではないはずです。

TVA筋肉を使用する際の重要な障害の1つは、付加的な筋肉と比較して、外科的操作または物質の注入のいずれかのためのアクセシビリティである。これらのタイプの実験は、特定の筋肉におけるNMJ生理学を調査するために重要であり得る。TVAは確かに チビアリス前部 または 胃頭蓋のようなより一般的に使用される筋肉よりも容易にアクセスできないが、以前の研究は肋間神経¹⁸の外科的傷害によってTVAを否定することが可能であることを示している。我々はまた、最近、一般的な麻酔下の物質の局所投与のためにこの筋肉を使用しています (未発表データ).これらの実験は適度な技術的課題を表すことができますが、この研究は、それらが実行可能であり、病理学的および生理学的操作の両方の下でNJの分析のためにこの筋肉の有用性を拡張することを示しています。

TVA筋肉は、インネクレーションパターンの全体マウント分析に使用できる体全体に位置する薄い平らな筋肉の数の一つです。他の筋肉は、脳幹の顔の核から発する運動ニューロンによって内在する頭蓋筋のグループを含み、長さ、オーリリスの優れた、及び内転筋を包含する^14,19に対する切離を包含する。さらに、TVAを取り巻く筋肉は、EO、IO、および直腸腹部を含む、また、NMJ分析のために標識および使用することができる。マウスモデルにおけるNMJ病理の包括的な分析のためには、全身に位置する筋肉の数を考慮し、単一の筋肉に分析を制限しないことが重要です。これは、異なる筋肉²⁰間のNMJ病理のレベルにおいて有意な不均一性がある運動ニューロン疾患のマウスモデルで例示される。このような筋肉間変動は、運動ニューロンの脆弱性のメカニズムを調査する際に非常に貴重なツールであり、したがって、単一の筋肉に分析を制限することは、研究の可能性を大幅に減少させる可能性があります。