VIGS Mediada frente Triagem Genética para identificação de genes envolvidos na resistência não hospedeiras

Resistência não hospedeiras é a resistência de todas as espécies de plantas contra as corridas de ^1,2 patógeno particular. Isto dá amplo espectro e resistência a doenças em plantas durável ^2,3. No entanto, o seu mecanismo, em particular contra patógenos bacterianos, não é bem compreendido ^4. Triagem para mutantes ou plantas silenciadas que a resistência não hospedeiras compromisso, e alta taxa de transferência de perfis transcrição para a identificação de genes diferencialmente expressos durante a resistência não hospedeiras ^5-9 são duas abordagens principais usadas anteriormente para dissecar a resistência bacteriana não hospedeiras. Como a resistência não hospedeiras é controlada por um mecanismo complexo (s) ⁴ com o envolvimento de vários genes, uma abordagem funcional genómico de alto rendimento para a identificação de genes é essencial para uma melhor compreensão do mecanismo de resistência não hospedeiras (s).

Induzida por vírus silenciamento do gene (VIGS) tem sido utilizada com sucesso para silenciar planta endógenogenes em muitas espécies de plantas ^10,11. Nicotiana benthamiana é uma das melhores plantas adequadas para VIGS ^10,12 e seu projecto de seqüência do genoma já está disponível ^13. vírus chocalho do Tabaco (TRV) baseados VIGS tem sido amplamente utilizado como ferramenta genética reversa para caracterizar genes envolvidos na resistência não hospedeiras ^2,4,14. Este VIGS vetores e derivados estão agora disponíveis através Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC, http://www.arabidopsis.org/abrc/catalog/individ_cloned_gene_1.html ). VIGS também tem sido usada como ferramenta genética para a frente para a identificação de genes envolvidos na imunidade ^15-17 planta, especialmente resistência não hospedeiras ^6,18. Avaliação da resposta de hipersensibilidade (HR) mediada por morte celular induzida por plantas não hospedeiras contra um agente patogénico específico e avaliando a morte celular induzida pela doença são dois importantes ensaios utilizados principalmente para IDENTIFICARgene silenciado plantas susceptíveis g. No entanto, a morte celular HR é induzida apenas contra tipo II patógenos não hospedeiras e não contra os do tipo I não hospedeiras patógenos ^2. Assim, ensaios de RH não pode ser universalmente utilizado para identificar estratégias de resistência não hospedeiras utilizadas pelas plantas, especialmente contra ampla gama de tipo I não hospedeiras patógenos. Além disso, a perda parcial da resistência não hospedeiras em um gene da planta silenciada nem sempre conduz a sintomas da doença e, consequentemente, ⁶ marcar a doença não pode ser utilizado para a identificação de plantas não hospedeiras comprometer a resistência. Em contrário, a avaliação do crescimento de agentes patogénicos em plantas não hospedeiras silenciados genes é um método melhor para estudar a perda de resistência nas plantas não hospedeiras de genes silenciados.

Comparado ao ensaio de crescimento convencional ^6,19, um método mais rápido para avaliar o crescimento bacteriano nas plantas não hospedeiras de genes silenciados pode encurtar o tempo necessário para a frente de triagem genética. Nós relatamos anteriormente um método para observar bactériasl crescimento do patógeno em folhas por olho nu sob luz ultravioleta (UV) utilizando bactérias expressando a proteína fluorescente verde (GFP) ^19. Neste artigo, procuramos demonstrar a utilidade de GFPuv expressar patógenos bacterianos não hospedeiras para facilitar a identificação de plantas silenciadas genéticas que são comprometidos pela resistência não hospedeiras. Esta metodologia é preciso para identificação de plantas suscetíveis e passíveis de triagem em alta velocidade.