非宿主抵抗性に関与する遺伝子の同定のためのVIGS媒介フォワード遺伝スクリーニング

非宿主抵抗は、特定の病原体^1,2のレースに対するすべての植物種の抵抗である。これは、広いスペクトルおよび植物^2,3における耐久性耐病性を付与する。しかし、特に細菌の病原体に対するそのメカニズムは、ウェル^4を理解されていない。変異または沈黙植物その妥協非宿主抵抗性、および非宿主抵抗^5-9間に差次的に発現する遺伝子を同定するためのハイスループット転写プロファイリングのためのスクリーニングは以前に細菌の非宿主抵抗性を解剖するために使用される2つの主要なアプローチである。非宿主抵抗が多くの遺伝子、遺伝子同定のためのハイスループット機能的ゲノムアプローチの関与を持つ複雑なメカニズム^（S）4によって制御されているので、非宿主抵抗機構（s）を理解し、より良いために重要です。

ウイルス誘発性遺伝子サイレンシング（VIGS）が成功裏に内因性の植物を沈黙するのに使用されています多くの植物種の遺伝子^10,11。 ベンサミアナタバコは VIGS ^10,12に最適な植物の一つで、そのドラフトゲノム配列は現在¹³入手可能です。 たばこガラガラウイルス （TRV）ベースVIGSが広く逆遺伝学ツールとして使用されてきた非宿主抵抗^2,4,14に関与する遺伝子を特徴づける。このVIGSベクトルと誘導体はシロイヌナズナの生 ​​物遺伝資源センター（ABRCを通じて利用可能になりましたhttp://www.arabidopsis.org/abrc/catalog/individ_cloned_gene_1.html ）。 VIGSはまた、植物免疫^15-17、特に非宿主抵抗^6,18に関与する遺伝子を同定するための順方向遺伝学ツールとして使用されている。過敏感反応（HR）媒介性の非宿主特異的病原体に対する植物によって誘導される細胞死を評価し、疾患誘発される細胞死を評価することidentifyin主に使用される2つの主要なアッセイであるgの影響を受けやすい遺伝子は、植物を沈黙。しかし、HR細胞死は、タイプ-IIの非宿主病原体に対するとしないタイプ-I非宿主病原体²に対して誘導される。したがって、HRアッセイは普遍的に、特に、I型非宿主病原体の広い範囲に対して、プラントで使用される非宿主抵抗戦略を識別するために使用することができない。また、遺伝子の沈黙植物における非宿主抵抗性の部分的な損失は、常に病気の症状⁶ひいては病気のスコアが非宿主抵抗性を損なう植物を識別するために使用することはできないにつながるものではない。逆に、遺伝子沈黙植物の非宿主病原体の成長を評価する遺伝子沈黙植物の非宿主抵抗性の損失を研究するための良い方法です。

従来の増殖アッセイ^6,19に比べて、遺伝子サイレンシング植物に非宿主細菌の増殖を評価するための高速な方法は、フォワード遺伝スクリーニングに要する時間を短縮することができる。我々は以前にバクテリアを観察するための方法を報告紫外線の下で肉眼での葉の上にL病原体の成長（UV）は、ライトグリーン蛍光タンパク質（GFP） ^を発現している¹⁹細菌を用いた。この原稿では、非宿主抵抗を侵害された遺伝子沈黙植物の識別を容易にするための非宿主細菌性病原体を表現GFPuvのの有用性を実証する。この方法は、感受性植物を同定するための正確かつハイスループットスクリーニングに適している。