蛍光色素で大人のゼブラフィッシュの網膜神経節細胞の逆行性標識

大人のゼブラフィッシュは、視神経損傷¹の後に軸索を再生する強力な能力を持っているように、全体のRGCをカウントするための適切な方法は、RGCを生存と再生^2を評価することが不可欠である。哺乳類や金魚³の逆行性標識のRGCの方法に基づいて^{– 5、}私たちは、大人のゼブラフィッシュにおける視蓋からのRGCを標識する方法を構築した。大人のゼブラフィッシュの場合は、2の重要な技術的な問題に注意する必要があります。大人のゼブラフィッシュの頭蓋骨は^、6非常に小さい。彼らは水環境に住んでいます。ここでは^、5掘削に伴う危険を最小限に抑えることがエッチング液で頭蓋骨を扱う。その後、我々は手術後、動物の生存率を改善する光硬化性ボンドで穴を密閉する。

以前は、いくつかの他の技術は、間接的な方法でのRGCの数をカウントするために採用された。網膜切片における染色HEはRGCL ⁷内のセルのすべてのタイプのラベルを付けます。全体Rでの抗体標識このような膵島-1のようなetinaも、アマクリン細胞^8にラベル^を付けることができます。視神経の切り株から逆行標識は、網膜内のすべてのRGCにラベルを付けることができますが、それは視神経への追加として傷害の原因になりますので、それはクラッシュモデルで採用することができない。蓋から逆行ラベルを利用して、我々は視神経挫滅でのRGCの生存と再生を研究している。結果は、ほとんどすべてのRGCが生存し、RGCの90％以上がクラッシュモデル⁹の最初の週で蓋を再生成することを示している。

正常にすべてのRGCを標識するために、DiIをペーストは、他のいくつかの市販の染料¹⁰との比較後に選択されました。第一に、これは特にin vivoでの組織標識のために設計されている。第二に、それは、水に拡散することができない、親油性染料である。さらに、この蛍光はそれのRGC生存研究のための優れた候補になり、長時間持続することができます。