仮想現実環境をナビゲートマウスにおける二光子カルシウムイメージング

（遺伝子GCaMP5 ⁷またはR-GECO ^8、又はOGB又はFLUO4など合成染料のような符号化された）カルシウム指示薬の2光子イメージングは、マウス^1-6挙動におけるニューロン活性を測定する強力な方法として登場した。それは、脳表面^9,10の下約800ミクロンまでのほぼ単一の活動電位解像度での細胞の何百もの活性の同時測定を可能にします。さらに、遺伝的にコードされたカルシウム指示薬（GECIs）を用いたニューロンの活動は、慢性的に^5,11,12を測定することができ、遺伝学的に定義された細胞型における^13。一緒に、これらの方法は、生体内での神経計算の研究に新たな可能性の多くを開く時間的および空間分解能の程度を提供する。

外科的介入は、イメージングのためのマウス脳を露出させ、標識する必要がある。細胞は、通常、組換えアデノ随伴VIRを使用してトランスフェクトする GECI送達および頭蓋窓のためのボランティア（AAV）系は、脳への光学的アクセスを得るために注射部位上に移植される。ヘッドバーは、次いで、二光子顕微鏡下で、ヘッド固定用の頭蓋骨に取り付けられている。目を覚ましイメージングに関する問題のほとんどは準備中の不安定性に起因するとして、これらのステップの設計と実装は非常に重要です。理想的には、ここで説明する手順は、手術後数ヶ月までの慢性的なイメージングを可能にする必要があります。

2光子イメージングの際に視覚的に導かれた動作を有効にするには、ヘッド固定マウスが空気に座って、それが仮想現実環境をナビゲートするために使用できる球状のトレッドミルを、サポートしていました。トレッドミル上でのマウスの移動は、マウス^14,15を囲むトロイダル画面上に表示される仮想環境内の動きに連結されている。このような運動、視覚刺激、及び瞳位置などの行動変数が⁰⁶を記録することができる。

tは ">我々は仮想現実環境を探索したマウスの慢性2光子イメージングに関わる手順を説明し対処さのキーポイントは次のとおりです。運動アーチファクトの低減、光漏れの低減、同時に記録する細胞の数の最大化、および最小化光損傷。また、空気がサポートしているトレッドミル、瞳孔の追跡、および仮想現実環境の設定について詳しく説明します。ここで説明する手順は行動パラダイムの可能性のある多種多様なヘッドを固定したマウスにおいて、蛍光標識された細胞集団を画像化するために使用することができます。