Duração da Refeição como Medida de Respostas Nociceptivas Orofacial em Roedores

Modelos animais têm sido utilizados para estudar dor e nocicepção associadas a danos orofaciais e ou inflamação^1,2, mas a falta de modelos animais adequados resulta em uma compreensão incompleta dos mecanismos. Embora os modelos atuais nos ajudem a entender vários mecanismos envolvidos na dor orofacial aguda e crônica, existem pontos fortes e fracos nesses modelos animais.

Muitos modelos medem respostas nociceptivas comportamentais por curtas durações. O preparo facial é uma resposta comportamental conhecida após a constrição dos nervos faciais³. Outros estudos mediram a esfregação facial com o antebraço ipsilateral ou o lábio traseiro, bem como, o vacilo da cabeça após a administração de injeções de formalina na articulação temporomandibular (TMJ) ou lábio^4-7. As latências de retirada da cabeça são outro modelo para medir o comportamento nociceptivo onde um medidor de analgesia de movimento de cauda modificado é usado para quantificar a resposta nociceptiva (ou seja, retirada da cabeça) após aplicar calor na almofada de vibrissae raspada de um rato⁸. A atividade muscular digastrica e masseter também foi registrada como uma correlação de dor após injeções de glutamato no TMJ⁹. Outro estudo mediu mudanças nos parâmetros do sono para avaliar respostas nociceptivas em ratos do sexo masculino e feminino com TMJ inflamado, esses parâmetros incluíram latência do sono, movimento rápido dos olhos (REM), porcentagem de sono não-REM e percentual de sono REM¹⁰. A maioria dos modelos animais que medem respostas nociceptivas comportamentais utilizam um curto período de tempo, ou seja, minutos para horas por dia^11-14. Além disso, a maioria dos testes de modelos animais ocorre durante a fase de luz e em um animal noturno, como um rato, isso pode causar estresse que pode confundir os resultados nociceptivos^15-18. Os ensaios acima medem a resposta nociceptiva em condições orofaciais variadas, mas por curta duração e, portanto, só podem ser usados para estudar distúrbios agudos. Um ensaio alternativo tem usado a expressão facial como medida de nocicepção de duração moderada, mas essa metodologia pode ser subjetiva¹⁹.

Para avaliar a nocicepção orofacial persistente ou crônica, alguns utilizaram a aplicação de um filamento von Frey na superfície da pele para avaliar a sensibilidade mecânica de animais submetidos à constrição nervosa ou inflamação TMJ^3,20. Liverman et al. 2009 mediram as respostas de abstinência usando monofilamentos classificados após injeções de CFA no músculo masseter de ratos ^21,22. Yamazaki et al. 2008 injetaram o TMJ com CFA e, em seguida, ao longo de 14 dias quantificaram comportamentos nociceptivos para estimulação mecânica ou térmica ou fria aplicada sobre a região do TMJ. Infelizmente, esses ensaios comportamentais nociceptivos envolvem a contenção animal, que produz hormônios do estresse, aprendizado ou comportamentos alternativos que podem interferir nos desfechos medidos.

Modelos para medir o nociception em dentes utilizam o reflexo de abertura da mandíbula, mas este método pode ser não confiável²³ ou impreciso²⁴. A atividade eletromiográfica tem sido usada para medir a nocicepção do dente^25,mas este método normalmente exige que o animal esteja inconsciente, embora em um estudo a nocicepção do dente tenha sido investigada em ratos em movimento livre²⁶. Em 2008, Khan estudou a relação entre nocicepção dentária e função mastigatória usando um medidor de tensão sensível^27, mas este modelo de duração da mordida requer a restrição do animal da atividade normal ²⁸. A força da mordida é uma medida confiável de dor dentária em humanos, mas porque os ratos requerem treinamento e/ou contenção para medir a força da mordida uma fonte de estresse é introduzida que pode produzir achados com significado fisiológico questionável^29-31

Algumas limitações de contenção e estresse podem ser superadas usando um desenho operante para avaliar comportamentos nociceptivos. Um modelo operante usa evitar uma temperatura desconfortável para avaliar e caracterizar nocicepção orofacial^32-35. Este modelo de conflito de recompensas é baseado em uma recompensa de leite adoçado para induzir o roedor a posicionar seu rosto voluntariamente contra uma sonda térmica aquecida ou resfriada^34,36. No entanto, o teste requer treinamento em animais, mas uma força do ensaio é que os dados são coletados de forma automatizada.

Outro modelo animal usou disfunção de roer induzida pela nocicepção como índice de nocicepção orofacial³⁷. No entanto, o roedor está confinado a um tubo e sua única fuga é roer através de um dowel para sair. Uma vantagem deste modelo é que ele mede a função da mandíbula após lesão aguda ou crônica da mandíbula em camundongos. No entanto, o roedor está confinado, o que adiciona um comportamento de competição alternativa confuso, ou seja, fuga, o que seria estressante e, portanto, poderia influenciar os resultados do ensaio de não-concepção.

A duração da refeição tem sido usada para medir a nocicepção em animais com artrite TMJ^38-41,exposição à polpa dentária⁴²e dano muscular⁴³. Um roedor que experimentou nocicepção orofacial comeu mais lentamente depois que o animal iniciou uma refeição. Pacientes que experimentam dor de TMJ também demoram mais para mastigar seus alimentos e o comprimento do ciclo diminui quando a dor do TMJ é diminuída^44-46. Espera-se que o alongamento da duração da refeição quando a dor do TMJ esteja presente seja um “comportamento de guarda”, operacionalmente definido como comportamento nociceptivo⁴⁷.

A duração da refeição mede a nocicepção TMJ usando um método não invasivo por até 19 dias em ratos machos e fêmeas e 6 dias (período mais longo testado) em camundongos machos e poderia ser descrito como um marcador biológico de nocicepção^38-41. Em apoio à medida que a duração da refeição mede as respostas nociceptivas, a nocicepção pode ser reduzida por intervenção farmacológica fazendo com que a duração da refeição do animal volte ao normal^{de 38,40,41}. Isso também foi confirmado quando neurônios nociceptivos foram destruídos usando capsaicina; após a destruição nervosa, a duração da refeição dos animais não foi aumentada após a injeção de CFA no TMJ 40.

Abaixo está o protocolo sobre como obter e analisar estatisticamente os dados de duração da refeição.