Desprendimiento de Retina modelo en roedores por inyección subretiniana de Hialuronato de Sodio

Existen varios métodos para el establecimiento de un modelo de desarrollo rural en los ojos de roedor se han reportado ^{3-15, 22.} La mayoría de ellos utilizan la inyección subretiniana de hialuronato de sodio debido a que es un material viscoso utilizado comúnmente durante la cirugía intraocular en seres humanos, y no se asocia con ninguna toxicidad ocular conocido ^1-15. El hialuronato de sodio, en lugar de solución salina normal o solución salina tamponada con fosfato (PBS), aumenta la duración de la RD.

Los métodos para la inyección subretiniana de hialuronato sódico usan uno de dos enfoques: un enfoque transvítrea ^3-6 o un enfoque transescleral ^7-15. Ambos métodos se llevan a cabo con la observación del fondo de ojo. En el enfoque transvítrea, un inyector de subretiniano se introduce en la cavidad vítrea, un retinotomía se crea en la retina periférica, y el hialuronato de sodio se inyecta en el espacio subretiniano. En este método, se hacen dos lágrimas de la retina, lo que aumenta el riesgo de la retinal hemorragia que podría ir en el espacio subretiniano. Además, hay un riesgo de lesión de la lente cuando se crea el retinotomía. Hay varios métodos modificados para el enfoque transescleral. En la mayoría de estos métodos ^7-12, después de reducir la presión intraocular con un pinchazo de la cámara anterior, una aguja de 30 G conectada a una jeringa llena de hialuronato de sodio se inserta directamente en el espacio subretiniano través de la conjuntiva, la esclerótica, la coroides, y el RPE. El hialuronato de sodio se inyecta a continuación en el espacio subretiniano. El riesgo de desgarro de la retina y el cristalino lesión utilizando este método transescleral es menor que usando el enfoque transvítrea. Sin embargo, el agujero hecho en la esclerótica por una aguja de 30 G es grande, especialmente para los ojos del ratón, y el hialuronato de sodio se inyecta en el espacio subretiniano se escapa fácilmente fuera del ojo a través de la herida escleral. Esto conduce a una, RD menos persistente inferior y la muerte de las células fotorreceptoras más variable. Por otra parte, si la hemorragia coroidea se produce enla etapa de perforación de la esclerótica, la hemorragia se extienda en el espacio subretiniano porque la presión intraocular se ha reducido antes de la inyección de hialuronato subretiniano.

Varios factores pueden influir en el efecto de RD en el desprendimiento de retina, incluyendo tanto la hemorragia subretinal y la altura y la persistencia de RD ^16-21. Células fotorreceptoras muerte aumenta con el aumento de altura de RD ^{16, 17,} y el daño de las células fotorreceptoras pueden ser más extensa debido a la menor difusión de oxígeno y nutrientes esenciales de los coriocapilar con mayor RD en comparación con RD poco profunda. Hemorragia subretiniana también es tóxico para las células fotorreceptoras ^18-21; posibles mecanismos de esta toxicidad en el desprendimiento de retina incluyen la hipoxia y la alteración metabólica por la hemorragia subretiniana como barrera de difusión, y la neurotoxicidad directa inducida por los componentes de la sangre (como el hierro). Lesión de la lente, que ha sido divulgado para tener un efecto protector sobre Retilas células ganglionares nal ^23, también pueden afectar a la muerte de las células fotorreceptoras después de la inducción de la RD. Además, si el sitio de entrada de la herida no está sellado, hialuronato de sodio puede salirse con la manipulación ojo durante la enucleación. Esto puede conducir a una clasificación errónea de un RD tan superficial, que a su vez puede afectar a la interpretación de los resultados.

Hemos modificado el método transescleral para inyección subretiniana de hialuronato de sodio para aumentar la reproducibilidad de RDS y reducir la tasa de hemorragia subretiniana. El paso crítico de este protocolo es la creación de una incisión escleral de auto-sellado utilizando una aguja de 30 G, que evita la fuga de hialuronato de sodio después de la inyección. A diferencia de los métodos anteriores, este protocolo se realiza sin la observación del fondo de ojo por lo que se presta mayor atención a la herida escleral. Aplicación de pegamento también evita que el hialuronato de sodio se salga del ojo. En nuestra experiencia, la tasa de hemorragia subretiniana con este protocolo wcomo significativamente menor que con otros protocolos. Si la hemorragia coroidea se produce durante la etapa de incisión escleral, saldrá del ojo a través de la herida escleral porque este paso se lleva a cabo antes de reducir la presión intraocular. Si la hemorragia coroidea se produce después de la reducción de la presión intraocular y desprendimiento de la retina neurosensorial, la sangre se diseccionar en el espacio subretiniano. Encontramos que esto suceda en aproximadamente el 5% de los casos, en contraste con un 10-20% con las otras técnicas. Estos animales deben ser excluidos del análisis.

Esta técnica también se puede utilizar para la inyección subretiniana de la transferencia de genes mediada por vectores para dirigir las células fotorreceptoras o RPE ^{24, 25.} Debido a que el típico vehículo (PBS, solución salina) para estas inyecciones es significativamente menos viscoso que el hialuronato de sodio, técnicas estándar están plagados de más fugas. La técnica descrita en el presente documento, mediante la reducción de este riesgo, hace experimentos de transferencia de vector más reproducible yconfiable.