Отслойки Модель в Грызуны по субретинальной инжекции гиалуронат натрия

Существует несколько методов для создания модели RD грызунов глазах были зарегистрированы ^{3-15, 22.} Большинство из них используют субретинальной инъекции гиалуроната натрия, потому что это вязкий материал обычно используется во время операции внутриглазного в организме человека, и это не связано с каким-либо известным глазной токсичности ^1-15. Гиалуронат натрия, а не физиологический раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), увеличивает продолжительность RD.

Методы субретинальной инъекции гиалуроновой кислоты использовать один из двух подходов: transvitreal подход ^3-6 или транссклеральная подход ^7-15. Оба метода выполняются с соблюдением глазного дна. В подходе transvitreal, субретинальная инжектор вводится в полость стекловидного тела, ретинотомии создается в периферийной сетчатке, а также гиалуронат натрия вводят в субретинальной пространстве. В этом способе две разрывы сетчатки сделаны, что увеличивает риск сетчаткил кровоизлияния, которые могут идти в субретинальной пространстве. Кроме того, существует риск получения травмы объектива, когда ретинотомии создается. Есть несколько модифицированные методы подхода транссклеральной. В большинстве из этих методов ^7-12, после снижения внутриглазного давления с передней камеры прокола, в G иглу 30, соединенного с шприц, наполненный гиалуроната натрия непосредственно вставленной в субретинальной пространства через конъюнктивы, склеры, сосудистой оболочки и ПЭС. Гиалуронат натрия затем вводят в субретинальной пространстве. Риск разрывов сетчатки и линзы травмы с помощью этого метода транссклеральная меньше, чем с использованием подхода transvitreal. Тем не менее, отверстие, сделанное в склере иглой 30 G является большим, особенно для глаз мыши, и гиалуронат натрия вводят в пространстве субретинальной легко протекает из глаза через склеры раны. Это приводит к более низкой, менее стойких РД и более переменной смерти фоторецепторов клеток. Более того, если хориоидальная кровотечение происходит всклеры шаг перфорации, кровотечение будет распространяться в субретинальной пространства, потому что внутриглазное давление было уменьшено до субретинальной инъекции гиалуроната.

Ряд факторов может повлиять на эффект РД на отслоение сетчатки, в том числе как субретинальной кровоизлияния и высоты и настойчивости РД ^16-21. Фоторецептора гибель клеток возрастает с увеличением высоты RD ^{16, 17,} и повреждение клеток фоторецептора может быть более обширный из-за уменьшения диффузии кислорода и необходимых питательных веществ из хориокапилляров с более высокой по сравнению с RD мелкой RD. Субретинальной кровоизлияния также токсичны для клетки фоторецепторов ^18-21; возможные механизмы этого токсичности в отслоение сетчатки включают гипоксии и метаболического нарушения по субретинальной кровоизлияния в качестве диффузионного барьера, а также прямой нейротоксичность, вызванную компонентов крови (например, железа). Травмы объектива, который, как сообщается, имеют защитное действие на RETINAL ганглиозных клеток ^23, также может повлиять на смерть фоторецепторов клеток после индукции РД. Кроме того, если запись рана сайт не запечатан, гиалуронат натрия может вытечь с манипуляцией глаз во время энуклеации. Это может привести к ошибочному классификации в РД, как мелкой, которые в свою очередь влияют на интерпретацию результатов.

Мы модифицировали метод транссклеральная для субретинальной инъекции гиалуроновой кислоты, чтобы увеличить воспроизводимость RDs и сокращения темпов субретинальной кровоизлияния. Важным шагом этого протокола является создание самоуплотняющийся склеры разрез, используя иглу 30 G, который предотвращает утечку гиалуроната натрия после инъекции. В отличие от предыдущих методов, этот протокол выполняется без соблюдения глазного дна так больше внимания уделяется склеры раны. Применение клея также предотвращает гиалуронат натрия от утечки из глаза. По нашему опыту, скорость субретинальной кровоизлияния с этим протоколом жкак значительно меньше, чем с другими протоколами. Если кровотечение хориоидеи происходит в течение склеры шаге разреза, он будет выходить из глаза через склеры раны, потому что этот этап выполняется до снижения внутриглазного давления. Если хориоидальная кровотечение имеет место после снижения внутриглазного давления и отрядом нейросенсорной сетчатки, кровь будет рассекать в субретинальной пространстве. Мы обнаружили, что это произойдет в приблизительно 5% случаев, в отличие от 10-20% с другими способами. Эти животные должны быть исключены из анализа.

Этот метод также может быть использован для субретинальной инъекции вектора-опосредованного переноса гена в целевой фоторецептора или клетки ПЭС ^{24, 25.} Потому что типичный автомобиль (PBS, солевой раствор) для этих инъекций значительно менее вязкой, чем гиалуроната натрия, стандартные методы страдают от более утечек. Методика описано здесь, за счет уменьшения этого риска делает эксперименты вектор переноса и более воспроизводимымнадежный.