Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Vários métodos para o estabelecimento de um modelo de RD em roedores olhos foram relatados ^{3-15 de 22.} A maioria deles utilizam a injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio porque é um material viscoso, utilizado durante a cirurgia intra-ocular em seres humanos, e não está associada com qualquer conhecida toxicidade ocular ^1-15. Hialuronato de sódio, em vez de solução salina normal tamponada com fosfato (PBS) ou solução salina, aumenta a duração da RD.

Os métodos para a injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio usar uma das duas abordagens: uma abordagem transvitreal ^3-6 ou uma abordagem escleral ^7-15. Ambos os métodos são realizados com a observação do fundo. Na abordagem transvitreal, um injector sub-retiniana é introduzida na cavidade vítrea, uma retinotomia é criada na periferia da retina, e o hialuronato de sódio é injectado no espaço sub-retiniano. Neste método, duas rasgaduras da retina são feitos, o que aumenta o risco da retinal hemorragia que pode ir para o espaço sub-retiniano. Além disso, existe o risco de lesão de lentes quando o retinotomia é criado. Existem vários métodos modificados para a abordagem escleral. Na maior parte destes métodos de ^7-12, após a redução da pressão intra-ocular com um punção da câmara anterior, uma agulha de 30 G ligada a uma seringa cheia com hialuronato de sódio está directamente inserida no espaço sub-retiniano através da conjuntiva, esclerótica, coróide e RPE. O hialuronato de sódio é então injectado no espaço sub-retiniano. O risco de desgaste e danos da retina lente usando este método escleral é menor do que utilizando a abordagem transvitreal. No entanto, o furo feito na esclerótica com uma agulha de 30 G é grande, especialmente para os olhos de rato, e o hialuronato de sódio injectado no espaço sub-retiniano facilmente fugas para fora do olho através da ferida escleral. Isto leva a uma RD inferior a menos persistente e a morte celular de fotorreceptores mais variável. Além disso, se a hemorragia ocorre na coróideo passo de perfuração de esclerótica, a hemorragia irá propagar-se no espaço sub-retiniano por causa da pressão intra-ocular tem sido reduzido antes da injecção sub-retiniana hialuronato.

Vários fatores podem influenciar o efeito de RD no descolamento de retina, incluindo a hemorragia sub-retiniana ea altura e persistência da RD ^16-21. Células fotorreceptoras de morte aumenta com o aumento da altura da RD ^{16, 17,} e danos às células fotorreceptoras podem ser mais extensa, devido à redução de difusão de oxigênio e nutrientes essenciais dos coriocapilares com maior RD comparação com RD superficial. Hemorragia sub-retiniana também é tóxico para as células fotorreceptoras ^18-21; possíveis mecanismos dessa toxicidade no descolamento de retina incluem hipoxia e perturbação metabólica, hemorragia sub-retiniana como uma barreira de difusão, e neurotoxicidade direta induzida por componentes do sangue (como o ferro). Lesão Lens, que tem sido relatado para ter um efeito protetor sobre a reticélulas ganglionares nal ^23, também podem afetar a morte das células fotorreceptoras após a indução da RD. Além disso, se o local da ferida de entrada não é selado, o hialuronato de sódio pode sair com a manipulação de olho durante a enucleação. Isso pode levar à classificação errônea de um RD como superficial, o que por sua vez pode afetar a interpretação dos resultados.

Nós modificámos o método escleral para injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio para aumentar a reprodutibilidade de TR e reduzir o índice de hemorragia sub-retinal. O passo fundamental deste protocolo é a criação de uma incisão escleral auto-selante usando uma agulha 30 G, o que impede o vazamento de hialuronato de sódio após a injeção. Ao contrário dos métodos anteriores, este protocolo é realizada sem a observação do fundo de olho para que maior atenção é dada à ferida escleral. Aplicação de cola também impede o hialuronato de sódio de vazar para fora do olho. Em nossa experiência, a taxa de hemorragia sub-retiniana com este protocolo wcomo significativamente menor do que com outros protocolos. Se o sangramento coróide ocorre durante a etapa de incisão da esclerótica, irá sair do olho através da ferida de esclerótica porque este passo é executado antes de reduzir a pressão intra-ocular. Se o sangramento coróide ocorra após a redução da pressão intra-ocular e descolamento da retina neurosensorial, sangue dissecar para o espaço sub-retiniano. Descobrimos que isso aconteça em cerca de 5% dos casos, em contraste com cerca de 10-20% com as outras técnicas. Estes animais devem ser excluídos da análise.

Esta técnica também pode ser usada para a injecção sub-retiniana de transferência de genes mediada por vector para atingir as células fotorreceptoras ou RPE ^{24, 25.} Porque o veículo típico (PBS, solução salina) para essas injeções é significativamente menos viscoso do que o hialuronato de sódio, técnicas padrão são atormentados por mais vazamentos. A técnica aqui descrita, reduzindo este risco, faz experiências de transferência de vector mais reprodutível efiável.