Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

Diversi metodi per la creazione di un modello di RD negli occhi di roditori sono stati segnalati ^{3-15, 22.} La maggior parte di loro utilizzano iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio perché è un materiale viscoso comunemente usato durante la chirurgia intraoculare nell'uomo, e non è associata ad alcuna nota tossicità oculare ^1-15. Ialuronato di sodio, piuttosto che normale soluzione salina o soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), aumenta la durata del RD.

I metodi per l'iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio utilizzare uno dei due approcci: un approccio transvitreal ^3-6 o di un approccio transscleral ^7-15. Entrambi i metodi vengono eseguite con l'osservazione del fondo. Nell'approccio transvitreal, un iniettore sottoretinico viene introdotto nella cavità vitreale, un retinotomia viene creato nella retina periferica, e il sodio ialuronato viene iniettato nello spazio sottoretinico. In questo metodo, due rotture retiniche sono fatti, che aumenta il rischio di retinal emorragia che potrebbe andare nello spazio sottoretinico. Inoltre, vi è il rischio di lesioni dell'obiettivo quando viene creato il retinotomia. Ci sono diversi metodi modificati per l'approccio transscleral. Nella maggior parte di questi metodi ^7-12, dopo riduzione della pressione intraoculare con una puntura camera anteriore, un ago G 30 collegato ad una siringa riempita di ialuronato di sodio è direttamente inserita nello spazio sottoretinico attraverso la congiuntiva, sclera, coroide, e RPE. Il ialuronato di sodio viene quindi iniettato nello spazio sottoretinico. Il rischio di strappo e lente lesioni retiniche con questo metodo transscleral è inferiore che utilizzando l'approccio transvitreal. Tuttavia, il foro praticato nella sclera da un ago 30 G è grande, soprattutto per gli occhi del mouse, e il sodio ialuronato iniettato nello spazio sottoretinico fuoriesce facilmente fuori dall'occhio attraverso la ferita sclerale. Questo porta ad un più basso, RD meno persistente e più morte cellulare dei fotorecettori variabile. Inoltre, se l'emorragia coroideale si verifica inil passo perforazione sclerale, l'emorragia si diffonderà nello spazio sottoretinico perché la pressione intraoculare è stata ridotta prima della iniezione ialuronato sottoretinico.

Diversi fattori possono influenzare l'effetto del RD sulla retina distaccata, che comprende sia l'emorragia sottoretinico e l'altezza e la persistenza di RD ^16-21. Cellule fotorecettore morte aumenta con l'aumentare dell'altezza del RD ^{16, 17,} e danni alle cellule fotorecettori possono essere più ampia a causa della ridotta diffusione di ossigeno e di nutrienti essenziali dalle coriocapillare con una maggiore RD rispetto a poco RD. Emorragia sottoretinico è anche tossico per le cellule fotorecettrici ^18-21; possibili meccanismi di questa tossicità nella retina distaccata comprendono l'ipossia e la distruzione metabolica da emorragia sottoretinico come barriera di diffusione, e neurotossicità diretta indotta da componenti del sangue (come il ferro). Lesioni Lens, che è stato segnalato per avere un effetto protettivo sulla retinacellule gangliari nali ^23, possono anche influenzare la morte delle cellule fotorecettori dopo l'induzione di RD. Inoltre, se il sito di entrata ferita non è sigillato, ialuronato di sodio potrebbe fuoriuscire con la manipolazione occhi durante l'enucleazione. Questo può portare alla classificazione errata di un RD come superficiale, che può a sua volta influenzare l'interpretazione dei risultati.

Abbiamo modificato il metodo transscleral per l'iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio per aumentare la riproducibilità di RDS e ridurre il tasso di emorragia sottoretinico. La fase critica di questo protocollo è la creazione di un'incisione sclerale autosigillante utilizzando un ago G 30, che impedisce la fuoriuscita di ialuronato di sodio dopo l'iniezione. A differenza dei metodi precedenti, questo protocollo viene eseguita senza l'osservazione del fondo oculare in modo maggiore attenzione è rivolta alla ferita sclerale. Applicazione di colla impedisce anche il sodio ialuronato di fuoriuscire dell'occhio. Nella nostra esperienza, il tasso di emorragia sottoretinico con questo protocollo wsignificativamente inferiore a quella di altri protocolli. Se l'emorragia coroideale si verifica durante la fase di incisione sclerale, uscirà l'occhio attraverso la ferita sclerale perché questo passo è eseguito prima di ridurre la pressione intraoculare. Se l'emorragia coroideale si verifica dopo la riduzione della pressione intraoculare e distacco della retina neurosensoriale, sangue sezionare nello spazio sottoretinico. Abbiamo trovato che questo accada in circa il 5% dei casi in contrasto con circa il 10-20% con le altre tecniche. Questi animali dovrebbero essere esclusi dall'analisi.

Questa tecnica può essere utilizzata anche per l'iniezione sottoretinico mediata da vettori di trasferimento genico per colpire le cellule fotorecettrici o RPE ^{24, 25.} Poiché il veicolo tipico (PBS, soluzione salina) per queste iniezioni è significativamente meno viscoso di ialuronato di sodio, tecniche standard sono afflitti da più perdite. La tecnica qui descritta, riducendo tale rischio, rende esperimenti di trasferimento vettore più riproducibile eaffidabile.