Modell Netzhautablösung in Nagetiere durch subretinale Injektion von Natriumhyaluronat

Mehrere Verfahren zur Gründung einer RD-Modell in Nagetier-Augen wurde berichtet, ^{3-15, 22.} Die meisten von ihnen nutzen subretinalen Injektion von Natriumhyaluronat, weil es ein viskoses Material, das üblicherweise während einer intraokularen Operation bei Menschen verwendet, und es ist nicht mit irgendeinem bekannten okulare Toxizität ^1-15 zugeordnet. Natriumhyaluronat, anstatt normaler Kochsalzlösung oder Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS), erhöht sich die Dauer der RD.

Die Methoden für das subretinale Injektion von Hyaluronsäure eine von zwei Ansätze: a transvitreal Ansatz ^3-6 oder ein transskleralen Ansatz ^7-15. Beide Verfahren werden mit der Beobachtung des Augenhintergrunds durchgeführt. Im transvitreal Ansatz wird ein subretinalen Injektor in den Glaskörperhohlraum eingebracht, ein Retinotomie in der peripheren Netzhaut erzeugt und das Natriumhyaluronat in den subretinalen Raum eingespritzt. In diesem Verfahren werden zwei Netzhautrisse gebildet, die das Risiko von Retina erhöhtl Blutung, die in den subretinalen Raum gehen könnten. Darüber hinaus besteht die Gefahr von Verletzungen, wenn die Linse Retinotomie erzeugt. Es gibt mehrere Methoden für die modifizierte transskleralen Ansatz. In den meisten dieser Verfahren ^7-12, nach der Verringerung des Augeninnendrucks mit einer Vorderkammerpunktion einer 30 G-Nadel in eine Spritze gefüllt mit Natriumhyaluronat wird direkt in den subretinalen Raum durch die Bindehaut, Lederhaut, Aderhaut und RPE eingesetzt ist. Die Natriumhyaluronat wird dann in den subretinalen Raum eingespritzt. Die Gefahr von Netzhautschäden Tränenlinse und mit diesen transskleralen Verfahren ist geringer als die mit der transvitreal Ansatz. Jedoch ist das Loch in die Sklera durch eine 30 G-Nadel groß gemacht, insbesondere für die Augen der Maus, und das Natriumhyaluronat in den subretinalen Raum injiziert leicht leckt aus dem Auge durch das sklerale Wunde. Dies führt zu einer niedrigeren, weniger hartnäckig RD und variabler Photorezeptorzelle Tod. Außerdem, wenn in der Aderhautblutungen auftrittdie Lederhaut Perforation Schritt wird die Blutung in den subretinalen Raum ausbreiten, weil der Augeninnendruck hat vor dem subretinalen Hyaluronat Injektion reduziert.

Mehrere Faktoren können die Wirkung von RD auf der Netzhautablösung zu beeinflussen, einschließlich subretinaler Blutung, und die Höhe und Persistenz von RD ^16-21. Photorezeptor Zelltod mit zunehmender Höhe RD ^{16, 17} und Photorezeptorzellschädigung kann wegen der verringerten Diffusion von Sauerstoff und essentiellen Nährstoffen aus der Choriokapillaris mit höheren RD Vergleich zu flachen RD umfangreicher sein. Subretinalen Blutung ist auch giftig für Photorezeptorzellen ^18-21, mögliche Mechanismen dieser Toxizität in der Netzhautablösung sind Hypoxie und metabolische Störungen durch subretinalen Blutung als Diffusionsbarriere und die direkte Neurotoxizität von Blutkomponenten (wie zB Eisen) induziert. Linsenverletzung, von der berichtet wurde, um eine Schutzwirkung auf reti habennal Ganglienzellen ^23, kann auch Auswirkungen auf Photorezeptorzelltodes nach Induktion der RD. Darüber hinaus, wenn der Eintrag Wunde ist nicht versiegelt, Hyaluronsäure kann mit Auge Manipulationen während Enukleation auslaufen. Dies kann zu fehlerhaften Klassifizierung eines RD so flach führen, was wiederum Auswirkungen auf die Interpretation der Ergebnisse.

Wir modifizierten die transskleralen Verfahren für subretinale Injektion von Hyaluronsäure, um die Reproduzierbarkeit RD erhöhen und die Rate der subretinalen Blutung. Der kritische Schritt in diesem Protokoll ist die Schaffung einer selbstdicht skleralen Einschnitt unter Verwendung einer 30 G-Nadel, die eine Leckage von Natriumhyaluronat nach dem Einspritzen verhindert. Im Gegensatz zu bisherigen Verfahren wird dieses Protokoll ohne Beobachtung des Augenhintergrundes durchgeführt, mehr Aufmerksamkeit auf die sklerale Wunde bezahlt. Aufbringen von Klebstoff verhindert auch das Natriumhyaluronat Austreten des Auges. Nach unserer Erfahrung ist die Rate der subretinalen Blutung mit diesem Protokoll wals deutlich geringer als bei anderen Protokollen. Wenn choroidalen Blutungen während der Skleraeinschnitt Schritt auftritt, wird es das Auge durch das sklerale Wunde zu verlassen, da dieser Schritt vor der Verringerung des Augeninnendrucks durchgeführt. Wenn choroidalen Blutung nach der Reduktion des Augeninnendrucks und Ablösung der Netzhaut neuro auftreten, wird das Blut in den subretinalen Raum zu sezieren. Wir fanden, dass dies geschieht in etwa 5% der Fälle im Gegensatz zu 10-20% mit den anderen Techniken. Diese Tiere sollten von der Analyse ausgeschlossen werden.

Diese Technik kann auch für die subretinale Injektion von Vektor-vermittelten Gentransfer verwendet werden, um Ziel-Photorezeptor oder RPE-Zellen ^{24, 25} werden. Da die typischen Fahrzeug (PBS, Kochsalzlösung) für diese Injektionen deutlich weniger viskos als Natriumhyaluronat werden Standard-Techniken, die von mehr Lecks geplagt. Die hier beschriebene Technik, durch Reduzierung dieses Risikos macht Vektor Transferexperimente mehr reproduzierbar undzuverlässig.