Décollement de la rétine modèle chez les rongeurs par injection sous-rétinienne de hyaluronate de sodium

Plusieurs méthodes pour établir un modèle de RD dans les yeux de rongeurs ont été signalés ^{3-15, 22.} La plupart d'entre eux utilisent l'injection sous-rétinienne d'hyaluronate de sodium, car c'est une matière visqueuse utilisée au cours de la chirurgie intra-oculaire chez l'homme, et elle n'est pas associée à une quelconque toxicité oculaire connu ^1-15. Le hyaluronate de sodium, au lieu de la solution saline normale ou une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), augmente la durée de la RD.

Les méthodes d'injection sous-rétinienne de hyaluronate de sodium utilisent l'une des deux approches: une approche de transvitreal ^3-6 ou une approche de transsclérale ^7-15. Les deux méthodes sont effectuées avec l'observation du fond d'oeil. Dans l'approche de transvitreal, d'un injecteur sous-rétinien est introduit dans la cavité vitréenne, un rétinotomie est créé dans la rétine périphérique, et le hyaluronate de sodium est injecté dans l'espace sous-rétinien. Dans ce procédé, deux déchirures rétiniennes sont publiés, ce qui augmente le risque de rétinel hémorragie qui pourrait aller dans l'espace sous-rétinien. En outre, il existe un risque de blessure de l'objectif lorsque le rétinotomie est créé. Il existe plusieurs méthodes pour l'approche modifiés de transsclérale. Dans la plupart de ces méthodes ^12.7, après réduction de la pression intra-oculaire avec une perforation de la chambre antérieure, une aiguille 30 G raccordée à une seringue remplie de l'hyaluronate de sodium est directement introduit dans l'espace sous-rétinien à travers la conjonctive, la sclère, la choroïde, et RPE. Le hyaluronate de sodium est ensuite injectée dans l'espace sous-rétinien. Le risque de déchirure de la rétine et le cristallin des blessures en utilisant cette méthode de transsclérale est inférieur à celui utilisant l'approche transvitreal. Cependant, le trou pratiqué dans la sclérotique par une aiguille de 30 G est grand, en particulier pour les yeux de souris, et le hyaluronate de sodium injecté dans l'espace sous-rétinien coule facilement hors de l'oeil à travers la plaie sclérale. Cela conduit à une RD inférieure, et moins persistant plus de mort des cellules photoréceptrices variable. En outre, si le saignement se produit dans la choroïdel'étape de perforation sclérale, l'hémorragie se propage dans l'espace sous-rétinien parce que la pression intraoculaire a été réduite avant l'injection sous-rétinienne d'hyaluronate.

Plusieurs facteurs peuvent influencer l'effet de RD sur le décollement de la rétine, y compris les sous-rétinien hémorragie et la hauteur et la persistance de la RD ^16-21. décès augmente de cellules photoréceptrices avec l'augmentation de la hauteur de la RD ^{16, 17,} et les dommages des cellules photoréceptrices peuvent être plus étendues en raison de la réduction de la diffusion de l'oxygène et des nutriments essentiels de la choriocapillaire avec RD plus élevé par rapport aux RD faible. Hémorragie sous-rétinienne est également toxique pour les cellules photoréceptrices ^18-21; mécanismes possibles de cette toxicité dans le décollement de la rétine comprennent une hypoxie et une perturbation métabolique par l'hémorragie sous-rétinienne comme une barrière de diffusion, et la neurotoxicité induite directement par des composants sanguins (tels que le fer). blessure de Lens, qui a été signalé à avoir un effet protecteur sur reticellules ganglionnaires internes ^23, peuvent également affecter mort des cellules photoréceptrices après l'induction de RD. En outre, si le site de la plaie d'entrée n'est pas scellée, l'hyaluronate de sodium est susceptible de s'échapper par la manipulation de l'oeil pendant l'énucléation. Cela peut conduire à la classification erronée d'un RD comme peu profondes, qui peuvent à leur tour affecter l'interprétation des résultats.

Nous avons modifié la méthode de transsclérale pour injection sous-rétinienne de hyaluronate de sodium pour augmenter la reproductibilité des diététistes et de réduire le taux d'hémorragie sous-rétinienne. L'étape critique de ce protocole est de créer une incision sclérale auto-étanche à l'aide d'une aiguille G 30, qui empêche la fuite de l'hyaluronate de sodium après l'injection. Contrairement aux méthodes précédentes, ce protocole est effectuée sans observation du fond si une plus grande attention est accordée à la plaie sclérale. Application de la colle empêche également le hyaluronate de sodium de fuir hors de l'œil. Dans notre expérience, le taux d'hémorragie sous-rétinienne avec ce protocole wcomme significativement inférieure à celle d'autres protocoles. Si le saignement de la choroïde se produit pendant l'étape d'incision sclérale, il va quitter l'oeil à travers la plaie sclérale car cette étape est réalisée avant la réduction de la pression intraoculaire. Si un saignement se produit choroïdienne après réduction de la pression et de détachement de la rétine neurosensorielle oculaire, le sang va disséquer dans l'espace sous-rétinien. Nous avons trouvé que cela se produise chez environ 5% des cas en revanche pour environ 10-20% avec les autres techniques. Ces animaux doivent être exclus de l'analyse.

Cette technique peut également être utilisée pour une injection sous-rétinienne d'un transfert de gène à médiation par vecteur pour cibler des cellules photoréceptrices ou RPE ^{24, 25.} Étant donné que le véhicule typique (PBS, solution saline) pour ces injections est nettement moins visqueux que le hyaluronate de sodium, des techniques standard sont infestés par plus de fuites. La technique décrite ici, en réduisant ce risque, effectue des expériences de transfert de vecteur plus reproductible etfiable.