Netvliesloslating Model in Knaagdieren door Subretinal Injectie van natriumhyaluronaat

Verschillende methoden voor het vaststellen van een RD-model in knaagdier ogen zijn gemeld ^{3-15, 22.} De meeste maken gebruik subretinale injectie van natriumhyaluronaat omdat het een viskeus materiaal gewoonlijk gebruikt tijdens intraoculaire chirurgie in mensen, en het is niet geassocieerd met enige bekende oculaire toxiciteit ^1-15. Natriumhyaluronaat dan normale zoutoplossing of fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), verhoogt de duur van de RD.

De methoden voor het subretinal injectie van natriumhyaluronaat een van twee benaderingen: een transvitreal aanpak ^3-6 of een transscleral aanpak ^7-15. Beide methoden worden uitgevoerd met observatie van de fundus. In de transvitreal benadering wordt een subretinale injectie ingebracht in het glasvocht holte, een retinotomy gemaakt in de perifere retina, en natriumhyaluronaat wordt geïnjecteerd in de subretinale ruimte. In deze werkwijze worden twee netvliesscheuren gemaakt, waardoor de kans toeneemt netvliesl bloedingen die kunnen gaan in de subretinale ruimte. Daarnaast bestaat het risico van de lens veroorzaakt, wanneer het retinotomy wordt gecreëerd. Er zijn verschillende methoden voor de gemodificeerde transscleral aanpak. In de meeste van deze werkwijzen ^7-12, na het verminderen van de intraoculaire druk met een voorste kamer punctie, een 30 G naald verbonden met een injectiespuit gevuld met natriumhyaluronaat wordt rechtstreeks via de conjunctiva, sclera, choroidea en RPE in de subretinale ruimte ingevoegd. De natriumhyaluronaat wordt vervolgens geïnjecteerd in de subretinale ruimte. Het risico van retinale scheur en schade lens met deze transscleral methode is minder dan met de transvitreal benadering. De opening in de sclera door een 30 G naald groot, vooral voor muizen ogen en de natriumhyaluronaat geïnjecteerd in de subretinale ruimte gemakkelijk lekt uit het oog door de sclerale wond. Dit leidt tot een lagere, minder persistent RD en variabele fotoreceptorcellen celdood. Bovendien, als choroïdale bloeden optreedt inde sclerale perforatie stap zal de bloeding verspreiden in de subretinale ruimte omdat de intraoculaire druk is verlaagd vóór de subretinale hyaluronaat injectie.

Verschillende factoren kunnen het effect van RD invloed op de vrijstaande netvlies, met inbegrip van zowel subretinal bloeding en de hoogte en de persistentie van RD ^16-21. Fotoreceptorcellen celdood toeneemt met toenemende hoogte van RD ^{16, 17} en lichtgevoelige celschade kan uitgebreider vanwege verminderde diffusie van zuurstof en essentiële voedingsstoffen uit de choriocapillaris met hogere RD vergelijking met ondiepe RD. Subretinale bloeding is ook giftig voor fotoreceptorcellen ^18-21; mogelijke mechanismen van deze toxiciteit in de vrijstaande netvlies onder hypoxie en metabole verstoring door subretinal bloeding als een diffusie barrière, en directe neurotoxiciteit veroorzaakt door bloed (zoals ijzer). Lens schade, die is vermeld dat een beschermend effect op reti hebbennal ganglioncellen ^23, kunnen ook van invloed fotoreceptorcel dood na inductie van RD. Bovendien, als de inzending wond niet wordt afgesloten, natriumhyaluronaat buiten kan komen met oog manipulatie tijdens enucleatie. Dit kan leiden tot onjuiste kwalificatie van een RD zo triviaal, die op hun beurt invloed op de interpretatie van de resultaten.

We pasten de transscleral werkwijze voor subretinale injectie van natriumhyaluronaat om de reproduceerbaarheid van RDs verhogen en de snelheid van subretinale bloeding. De kritische stap van dit protocol is het creëren van een zelfdichtende sclerale incisie met behulp van een 30 G naald, die lekkage van natriumhyaluronaat voorkomt na injectie. In tegenstelling tot eerdere methoden, wordt dit protocol uitgevoerd zonder waarneming van de fundus, zodat er meer aandacht wordt besteed aan de sclerale wond. Toepassing lijm voorkomt ook het natriumhyaluronaat lekken uit het oog. In onze ervaring, de snelheid van subretinale bloeding met dit protocol wals aanzienlijk lager dan die bij andere protocollen. Indien tijdens de sclerale incisie stap choroïdale bloeden optreedt, zal het oog verlaten door de sclera wond omdat deze stap wordt uitgevoerd voor het verminderen van de intraoculaire druk. Als choroidale bloeden optreedt na verlaging van de intra-oculaire druk en loslating van het netvlies neurosensorische, zal bloed ontleden in de subretinale ruimte. We vonden dat dit gebeurt in ongeveer 5% van de gevallen in tegenstelling tot ongeveer 10-20% met de andere technieken. Deze dieren moeten van de analyse worden uitgesloten.

Deze techniek kan ook worden gebruikt voor subretinale injectie van vector gemedieerde genoverdracht fotoreceptorcellen en RPE doelcellen ^{24, 25.} Omdat de typische voertuig (PBS zoutoplossing) voor deze injecties aanzienlijk dunner dan natriumhyaluronaat worden standaardtechnieken geplaagd door meer lekken. De hierin beschreven techniek, door deze risico's te beperken, maakt vector overdracht experimenten beter reproduceerbaar enbetrouwbaar.