コンピュータ支援多電極パッチクランプシステム
Summary
多電極パッチクランプ記録は、複雑なタスクを構成する。ここでは、実験的な手順の多くを自動化することによって、それがパフォーマンスと録音の数の質的向上につながるプロセスを加速することが可能であるか、を示します。
Abstract
パッチクランプ技術は、個々のニューロンまたはそれらの細胞内区画からの電気的活動を記録するための最もよく確立された方法今日。それにもかかわらず、安定した記録を実現し、さらには個々の細胞から、かなりの複雑さの時間のかかる手順のままである。効率的な情報の表示に関連して多くのステップの自動化が大幅に高い信頼性で録音のより多くを実行する際にし、短い時間で実験研究を支援することができます。大規模な記録を達成するために、我々は、最も効率的なアプローチは、プロセスを完全に自動化することなく、効率的に実験者の経験と視覚的なフィードバックを取り入れながら実験工程を簡素化し、ヒューマンエラーの可能性を低減することはないと結論付けた。念頭に置いてこれらの目標によって私達は、commercを単一のインターフェースでの多電極パッチクランプ実験のために必要なすべてのコントロールを集中コンピュータ支援システムを開発コンピュータの画面上での実験に関連する情報や指導の手がかりを表示しながら、ially利用可能なワイヤレスゲームパッド。ここでは、私たちは、記録設定を達成するために必要な時間を短縮し、実質的に正常に同時に多数のニューロンを記録する機会を増加させ、システムの異なる構成要素を記載している。
Introduction
マイクロメートルの精度で複数のサイトを記録し、刺激する能力は、実験的にニューロン系のより良い理解を達成するために極めて有用である。多くの技術がこの目的のために開発されてきたが、いずれも閾値下の活性および個々のシナプス後電位を研究するための必須のパッチクランプ技術によって達成さsubmillivolt分解能を、許可しない。ここでは、同時に記録し、神経の接続性の研究のために十分な精度で個々の細胞の大多数を刺激することを目的とした十二極コンピュータ支援パッチクランプシステムの開発を覆う。多くの他の用途は、このようなシステムのために考えられるが、ニューロンのグループ内の可能な接続の数は、問題のニューロンの数の二乗に比例して成長することを考えるとシナプス接続の研究に特によく適している。したがって、三つの電極を備えたシステムは、テストを可能にしながら、最大6つの接続が発生すると、ほとんどの場合、12ニューロンを記録し、単一の1を記録するには、最大132の接続が発生することをテストして、頻繁にします（ 図1）1ダース以上を観測することができます。接続の数十の観察は、同時に小規模ネットワークの構成を分析し、そうでなければ1をプローブすることができないネットワーク構造の統計的特性を推測することができる。また、数々の細胞の正確な刺激はまたシナプス後細胞2の募集の定量化を可能にする。
Protocol
Representative Results
Discussion
即時の質問は、通常我々が説明した手順の成功率に関する生じる。高い成功率のための準備が不可欠です。ピペットは、記録された細胞の人間のために適切である先端開口部を持っている必要があります。詰まっピペットを避けるために、細胞内液をろ過することも重要です。非常にきれいで、新鮮に引っ張っピペットは別の要件である。二項分布は、これらの問題は、最終的な収量にどの?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、パッチクランプ手順の自動化のための改善に有益なアドバイスをギラッドシルバーバーグ、ミケーレピニャテッリ、トーマス·K·バーガー、ルカGambazzi、およびソニア·ガルシアに感謝したいと思います。我々は、ソフトウェア実装と、貴重なアドバイスと支援をRajnishランジャンに感謝します。この作品は、EUのシナプスプロジェクトで、一部は人間のフロンティア·サイエンス·プログラムによって部分的に資金を供給された。
Materials
| Microscope | Olympus | BX51WI | 40X Immersion Objective |
| Manipulators | Luigs & Neumann | SM-5 | Serial protocol used |
| Amplifiers | Axon Instruments | MultiClamp 700B | SDK used |
| Camera | Till Photonics | VS 55 | BNC analog output |
| Framegrabber | Data Translation | DT3120 | SDK used |
| Oscilloscopes | Tektronix | TDS 2014 | Serial communication |
| Data acquisition | InstruTECH | ITC 1600 | |
| Data acquisition | National Instruments | PCI-6221 | Library used (.dll) |
| Pressure valve | SMC | SMC070C-6BG-32 | |
| Pressure sensor | Honeywell | 24PCDFA6G | |
| Membrane pump | Schego | Optimal |
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