侵害受容性行動の変化を測定するためにオペラント口腔顔面疼痛評価デバイス（OPAD）の使用

ここOPADの使用（Stoelting株式会社ウッドデール、イリノイ州）は、カプサイシンを用いた実験例のための一般的な用語で説明されています。オペレータは、多くのオプションと疼痛モデルしかしで数多くの実験をプログラムする自由を持っています。例えば、鎮痛剤の投与は、侵害対策6,3,4,5,7を減らし、慢性狭窄損傷の農産物や炎症のような他の疼痛モデルは3,9侵害受容行動を増加させた。これらのモデルは、以下のプロトコルに容易に適合可能である。 すべての実験では、maleSprague-Dawleyラット（250〜300グラム、チャールズリバー、ローリー、NC）を用いた。これらは通常、12時間の明/暗サイクル（上の午前6時 – 午後6時点灯）と℃の温度と31％湿度が管理された部屋22にペアで収容され、絶食時を除いて、食品や水への無料アクセスを持っていた。行動のセッションは、光の位相の間に行われた。これらの施設はAAALAC認定だったし、すべての手続きが承認されたBフロリダIACUCのy大学。 1.Trainingとベースセッションフードファーストげっ歯各OPADセッション前の夜（例：15 + / – この実験のために1時間）。 げっ歯類は、最初の非嫌悪温度（例：33-37°C）での一貫性のある行動が観察されるまで訓練を受ける必要があります。一般に、約6セッション（二週間のために週に三回）はそれぞれ、セッションごと600-1,000程度または2,000倍をなめるようにマウスやラットを訓練するのに十分である。 2。プリテスト準備とカプサイシン治療毛のないげっ歯類は最高ですこれが不可能な場合は、すべてのオペラント手順については、げっ歯類は1-2日正確をテストする前に削除（頬だけではなく鼻毛パッド毛/これは齧歯類のナビゲーションに影響を持っているとして、ウィスカー）は顔の毛を持っている必要があります行動の記録。 頬毛温度絶縁体として機能し、暑さと寒さが少なく侵害になります。髪を削除するには、ラットを麻酔2-4分待ってから、脱毛クリームを適用し、バリカンで頬毛を剃る、眼軟膏を追加し、その後水で洗い流してください。完全な方法論のためにニューバート会長ら 3を参照してください。 試験の日に、動物を麻酔（例：1から2.5パーセントイソフルラン吸入）と乾燥からそれらを防ぐためにし、目になってから任意の局所薬物療法を維持するために、両方の目にopthalamic獣医軟膏を配置。 滅菌綿棒を用いて露光頬に両側カプサイシンクリーム（0.1％）を適用します。 5分待ちます。ぬるま湯（約40℃）に浸したガーゼパッドでクリームを拭き取ってください。アルコール綿棒で頬を拭き取り、30分のタイマーを設定します。 ケージに戻す前に、麻酔から回復する齧歯類に十分な時間を確保してください。それがケージの寝具の誤嚥を防ぐために、胸骨の姿勢で頭を上げることができるまで待ちます。 3。プロトコルおよび実験用OPADシステムのプログラミングキー革新Ofの行動試験にOPADシステムは口腔顔面ソフトウェアは、ユーザがプログラムすることができますし、新しい実験を作成ANY-迷路（Stoelting株式会社ウッドデール、イリノイ州）駆動システムです。 簡単な実験をプログラムする方法の一般的な例を以下に示しますが、カプサイシン以外の温度ランピングプロトコルおよび疼痛モデルのためのより多くのオプションが用意されていています。 実験は、任意の時点で設計して保存することができる。 OPADsおよびオープンソフトウェアをオンにします。周囲の騒音のために制御するためにホワイトノイズをオンにします。 "ファイル"の下に新しい実験を選択します。小見出しの下の "議定書"という名前のプロトコルをして盲目にするかどうかを選択します。 下の "OPADケージ"は "新OPADケージ"を選択し、 "接続されたすべてのOPADケージを追加します。" "出力"を選択し、 "温度コントローラ"の下に、次に "熱素子"。開始温度（例えば、中性33-37°C）を調整します。 必要に応じて、下のランピング温度を調整し、 "OPAD温度サイクル。"ニュートラルから温度を変更するためにここで風邪作る調整をホットに。 "1"の場合は、= 45、 "ランプデュレーション" = 30秒 "（℃）に温度を設定"、および= 3分 "の値のまま"。 "2"、33、30秒、3分間。 "3"、7、60秒、3分間。 "4"、33、60秒、3分間。 "時間は、次の期間後："のボックスをチェックして、3分を選択します。 "フィールド"の下では、被験者は約余分なメモを追加。例えば、 "新規フィールド"を選択することにより、動物ID用の領域を作成し、名前を変更する "動物ID。"次に、 "動物"、 "テキスト"を選択し、 "動物のIDとして、このフィールドを使用します。" "ステージ"の下、OPADは自動的に "第一段階"を設定しますテスト期間の期間を設定し、必要に応じて段階名前を付けます。このランピングセッションのために、18分に設定します。 ステージ上の注意：ほとんどの実験のために、行動のセッションは10〜20分よりも長くは続かないはずです。その後、齧歯類が飽満感を得る。数日間の実験のために、追加のステージがデータ解析を簡単にするために日ごとに添加することができる。 </li> /顔の比率をなめるための "計算" "新しい計算"を選択し、それを名前を "L / F"の下。 "アクティベーション/コンタクト数：アクティベーション数リック"と言うように調整 "の下の領域の計算を入力してください"というラベルの付いたセクションで。 単純なデータ分析のための期間を作成するには、 "分析"を選択し、 "新期間"。書き込み0とするため：名前1 "33°C"をしてのチェックボックスを選択し、 "開始"の場合は "この期間は全てのステージでも同じです" "で終わる：" 3分を置く。 各期間は、上記の手順を繰り返す。名称： "ランプ33-45℃の" 3分：で始まる。 3.5分：で終了。 "45°C"、3.5分、6.5分。 "ランプ45から33°C"、6.5分、7分。 "33°C"、7分、10分。 "ランプ33-7°C"、10分、11分。 "7°C"、11分、14分。 "ランプ7-33°C"、14分、15分。 "33°C"、15分、18分。 プロトコルを保存して名前を付けます。注意：保存されたプロトコルは、新しい実験に再使用することができます。 4。アッセイを実行する部屋TEを準備OPADボトルmperature報酬の混合物と場所。水の2:1の比率：スクロースまたはサッカリンのソリューションを使用することもできるが、加糖練乳がうまく機能。 場所液状の排紙トレイ、プレキシグラスケージ、および金属の床には、OPADマシン上ですりおろす。ケージへの配線を接続します。 の上に置いて報酬ボトルが立って、注ぎ口齧歯類によって達することができるように調整します。最初に、ボトルは、次いで、より良い顔のコンタクトを生成するために引き抜かケージに戻ってさらに配置することができる。 OPADソフトウェアに実験をロードします。テストされる動物の数を追加します。小見出し "実験"の下に "タイトル"を追加してから、治療群を（カプサイシンおよびコントロール）を追加します。各群の動物数を追加します。 小見出し "テスト"の下に、 "動物の治療とデータ"を選択します。治療の文字（A、B、C等）や動物のIDを追加する。ボックスは、今では自分の画面上の指定された動物のIDを持っている必要があります。 OPADボックス上のボタンを押します。これは意志適切な温度にthermodesを調整します。ライトがオレンジ色になると、げっ歯類の内側に配置し、再度ボタンを押してください。カプサイシンクリームを拭き取った後に、この実験では、ラットを30分に開始されます。 緑色のライトが点灯します。ラットは、その頬はなく、鼻毛、なめることができるように地域でthermodesと接触をしなければならないので、ボトルはボックスからの距離を調整します。適切な調整は、連絡先の概説オレンジボックスの上に舐めるのための強固な赤いボックスになります。 報酬ボトルの適切な配置は、アッセイのために不可欠です。ボトルは、あまりにも多くのなめは1つだけ（代わりに固体箱のなめについて概説赤いボックスで示されている）として表示されるようにラットがどちら接触することなくなめれるか、または報酬ボトルにその鼻を触らに近い場合。 一度テストセッションはOPADの上にある音色と実験者に警告します。そのケージにげっ歯類を返します。別の齧歯類は、その後ボックスがインディカますテストする場合TEその動物のID。実験が完了するまで、必要に応じて繰り返します4.5から4.7を繰り返します。 5。 、分析グラフ、およびOPADソフトウェアを使用したデータの統計解析小見出し "結果"の下のテキスト、グラフ、または統計分析レポートをご覧にかどうかを選択します。 "グラフレポートの設定"ボックスに、調べている変数を選択します。例えば、 "計算結果"の下に "L / F"チェックボックスをオンにします。 "期間"と "x軸番組で"指定して、として "の異なるシリーズを表示する" "治療。" "レポートを表示"を選択します。保存、印刷、コピー、またはレポートを電子メールでは、この時点で行うことができます。必要に応じて特定のデータポイントは、グループ化ステップ下のボックスに除外することができる。 小見出しの下の "データ"は必要に応じてスプレッドシート形式での実験からの生データの調整可能リストです。注：全てのデータが保存され、後で操作し、分析することができる。 6。クリーンアップマシンの電源をシャットダウンして、ケージの配線を取り外します。格子、箱、ボトル、および液体トレイを洗って消毒。これらのコンポーネントは、手や食器洗浄機で洗浄することができる。