真菌病原体の食作用の生細胞ビデオ顕微鏡

ここでは、Cの代表的な結果を示す6時間ライブセルビデオ顕微鏡実験中のマウスマクロファージ細胞株J774.1によるカンジダの取り込み。 図1は、Cの食作用を示す、代表的な生細胞ビデオ顕微鏡ムービーですネズミJ774.1マクロファージによるカンジダ 。ライブセルビデオ顕微鏡は、C.の内在化を可能にカンジダカンジダ外部を染色する必要がなく、可視化する。しかし、これらの実験中、C.カンジダは、マクロファージファゴソームの酸性化の間に急冷されるpH感受性色素FITC（緑）を使用して染色し、 カンジダが （ 図1）は、内在化されたことの確認を容易にしました。摂取した後の更なる援助の可視化へカンジダ、マクロファージは赤色蛍光色素LysoTracker赤DND-99、シミ酸性コンパートメントおよびファゴソーム成熟の非特異的マーカーとして機能を用いて染色した。図2は、ライブセルビデオ顕微鏡実験から静止画像であり、Cの数の変化を示してカンジダは、個々 の J774.1マクロファージによって摂取した。この実験では、J774.1マクロファージの82％が少なくとも1℃を巻き込ん6時間貪食アッセイの終了時アルビカンス細胞。 図3は 、内在化Cの数のマクロファージ当たりアルビカンス細胞が報告されている。 Cの平均数マクロファージあたり取り上げアルビカンスは 3.4であるが、興味深いことにマクロファージが16真菌細胞まで取り込むことができます。 図4は Cを貪食マクロファージを示す代表的なライブセルビデオ顕微鏡実験から静止画像の連続ですアルビカンス細胞 、マクロファージ、最終的にマクロファージ溶解による菌糸の成長図4は、ビデオ顕微鏡では、標的細胞の貪食、次のイベントの分析を可能にする、 すなわちデータが気に生成することができる示しC.によるマクロファージのlling摂取された標的細胞の数や形態形成に関連してカンジダ菌糸方法、およびマクロファージの殺害は、リアルタイムで調べることができるファゴソーム成熟に関する。 図1℃の貪食作用を示すライブセルビデオ顕微鏡映画ネズミJ774.1マクロファージによるカンジダ 。マクロファージは、赤色蛍光色素LysoTracker赤DND-99、 および C を用いて染色されているカンジダは、FITC（緑色）を用いて染色されています。マクロファージおよびC.カンジダは 、2独立培地を完全COで37℃で6時間の期間の間共培養した。画像は6時間1分間隔で撮影した。マクロファージはCで細胞間の接触を確立見ることができます次に Cの取り込みが続いているアルビカンス、マクロファージのファゴソームにカンジダ 。矢印は Cを指すJ774.1マクロファージによる貪食前にカンジダ 。このビデオでは、またFITC蛍光がquencであることを示していますCのHED以下呑食カンジダ 。スケールバーは、10μmである。 ムービーを見るにはここをクリック 。 個々のマクロファージに飲み込まC.albicans数の図2代表的なライブセルビデオ顕微鏡静止画像表示バリエーション。マクロファージ（ステンド使用LysoTracker赤DND-99）は、FITC で染色されたと共培養したカンジダ·アルビカンス （緑）。 Cの数にばらつきがあるカンジダは （矢印の隣にある数字は、C. albicansの数が飲み込ま示します）のみ込ま、およびC でalbicansの形態（ すなわち酵母の詩菌糸）。スケールバーは20μm。 図3℃の数を示すグラフalbicansは 6時間貪食アッセイの終了時にマウスマクロファージJ774.1あたり摂取。データは、2つの独立した実験を表しています。 100マクロファージの合計は600個のマクロファージの合計を与えて、それぞれの実験からの3つのフィールドから数えた。 図4：代表的なライブセルビデオ顕微鏡マクロファージを示す実験（M）とCからの一連のイメージ認識（A、B）との間に事前アルビカンス （C）、および取り込み（C、D）の最中や後に。C. albicansの菌糸はマクロファージ溶解（G）になる可能性がマクロファージ（E、F）、内に成長を続けている。他のマクロファージは破裂してリリースされたCを摂取しようとする部位に補充されるカンジダ·アルビカンス （H）。マクロファージは、赤色蛍光色素を用いて染色LysoTracアールケール赤DND-99、 および C カンジダは、FITC（緑色）を用いて染色されています。 FITCの染色が C以下のクエンチされることに注意してくださいJ774.1マクロファージ（C）によりカンジダ取り込み。スケールバーは、10μmである。