強制振動法を用いたマウスにおける呼吸器系の力学の評価

以下に説明する手順は、アニマルケア（CCAC）カナダ評議会のガイドラインに沿ってマギル大学動物実験委員会によって承認された。 1。準備手順ソリューション： メサコリン：50 mg / mlので原液を準備し、5をテストする濃度に基づいて段階希釈（1:1）を行う。溶液は5噴霧前に室温に到達させる。 麻酔薬：さまざまなレジメンはマウスの種々の株（ 表1）の文献に報告されている注 ：レジメン1は、本プロトコルの下で使用されていました。 機器：現在のプロトコルはflexiWare 7ソフトウェアでサポートされている2つflexiVent世代のどちらにも適用されます。 研究の定義＆プランニング 、 実験Sessio：ソフトウェアの機能は、3つのモジュールの下にグループ化されnおよびレビュー＆レポーティング 。 システムの電源をオン（flexiVent FXのみ）および/ ​​またはソフトウェアを起動します。 最初の実験セッションまたはそれ以前に、いつでも勉強構造を事前に定義するために研究の定義＆プランニングモジュールを開きます。 新しい研究でボタンを作成して、スタディを作成プロトコルの概要を説明し、検討するための実験グループと対象者を定義するには、ウィザードの指示に従ってクリックしてください。 実験セッションモジュールを開いて勉強し、テンプレートを選択するための起動シーケンスに従って実験·セッションを開始します。 測定部位の対象を割り当て、その重量を確認。 オペレーティングソフトウェアに記載されている手順に従うことにより、システムのキャリブレーションを続行します。あなたは、キャリブレーションのためにY-チューブに使用するカニューレ（ステップ1.3.3）を取り付けるために、1つの時点でプロンプトが表示されます。 重要なステップ。Repea取得した校正値が許容範囲外にある場合tは1.2.6のステップ。 （flexiVent FXや校正値のモジュール固有の許容範囲についてflexiWare 7のユーザマニュアルを参照してください）。 キャンセルは、実験を開始する準備ができていない限り換気およびデータの記録を開始するように要求されます。これらは、後の時点で開始することができる。 被験者： 麻酔薬の適切な用量（ 表1）を用いて被写体を麻酔。 被写体が麻酔の手術レベルに達していることを確認します。被験者は、つま先のピンチに全く反応を示すべきではありませんし、その呼吸が規則的こじつけではないでなければなりません。 気管切開を行い、気管カニューレを挿入。 その背中に動物を配置し、熱の源（ 例えば 、温度制御された加熱毛布やマウスから約45センチ過度の加熱を避けるために、位置60ワット電球とランプ）を提供します。 クリーン番目アルコールを含む電子スロート面積を、皮膚切開を作り、そっと顎下腺、それをカバーする筋層を分離することにより気管を公開します。 優しくマイクロ鉗子のペアを使用して気管を持ち上げ、その下に縫合糸を渡す。 それを区画することなく、気管に小さな切開をする喉頭最寄りの軟骨の二つのリング間で切断。 切開に以前に較正されたカニューレを挿入し、気管の内側に軽く約5リングの長さを、それを進める注 ：本実験は、1.2センチメートル長い金属18ゲージカニューレを用いて行った。 重要なステップは縫合糸を使用して所定の位置にカニューレを固定します。添付ファイルは、カニューレの周りに気密シールを形成すべきである。 2。人工呼吸器人工呼吸器に近い動物を持参してください。 事前定義されたを選択することにより、機械的な換気を開始換気ドッキングウィンドウ内またはカスタマイズされた換気プロファイル。 Y-チューブを経由して人工呼吸器に動物を接続します。 重要なステップは人工呼吸器に動物の位置を合わせ、気管カニューレが可能カニューレ閉塞または気管ねじれを避けるために、人工呼吸器と同じレベルであることを確認します。 重要なステップは 、カニューレを挿入し、添付ファイルを確認するために摂動名をダブルクリックすることで、 ディープインフレ摂動を実行します。漏れの不在下では、システムは、過度の体積変位（ 図1）を使用せずに3秒かけて30 CMH 2 Oの圧力を保持することができるべきである。これらはカニューレ閉塞または紛失している可能性がありますとして記録容積と圧力トレースはまた、オフセットなしの兆候や変形をスムーズにする必要があります。 必要に応じて、心拍数、体温監視用バイタルサイン変換器を接続します。データ記録はeithe開始することができスクリプトを経由して、手動または自動でR。 3。肺機能測定測定またはコマンド（ 例えばネブライザー活性化、イベントマーカー）高度に制御し、再現実験のプロセス（ 図2）のために事前定義されたか、またはカスタマイズされたスクリプトを使用して自動化することができます。パラメータの数を生じさせる摂動の六ファミリーはベースラインで被検体の呼吸器系の仕組みを説明するために使用され、指定されたチャレンジ（ 表2）に続くことができる。 重要なステップ 。計測を開始する準備ができたら、閉じた肺領域を募集し、肺容量の履歴を標準化するディープインフレを実行します。 重要なステップ 。試験測定（ 例えばのPV-PまたはPVを-V）を実行して、自発吸気努力の不在を確認してください。 選択されたデータセットビュー内の圧力信号トレースを観察します。段階的なPV曲線と、圧力プラトーはよくない下向きのたわみを使用して定義されるべきである。圧力の下向きのスイングは、動物（ 図3）からの吸気努力を示すことになる。 そのタイトルをダブルクリックすることで選択したスクリプトを開始します。本研究で使用されるスクリプトは、一般的な測定のために含まれて： 三重のベースライン測定値のシーケンス。 吸入メサコリンに対する気道反応性の評価のための噴霧器の活性化注 ：システムによってメッセージが表示されたら、食塩水またはネブライザーにメサコリンの溶液を約100μlのをロードします。噴霧が開始し、自動的に停止します。 ネブライザーの活性化後、約3分の期間に密接に間隔測定（毎10〜15秒）のシーケンス。 プロンプトは別の課題を実行し、測定のシーケンスを繰り返す注：Bで綿棒でネブライザーマウント内部乾燥etweenの課題は、吸気ラインの建物アップから水滴や結露を防ぐことができます。 実験の最後に、換気を停止し、件名を切り離す。 オペレーティングソフトウェアの次の対象者に切り替え、その重量を確認。 重要なステップは、洗い流して乾燥した噴霧器、アダプタ、Y-チューブ、および被験者間カニューレ。 3.6手順1.2.6を繰り返します。 一日の終わりには、実験的なセッションを閉じます。すすぎ、乾燥噴霧器、アダプタ、Y-チューブ、及びカニューレを、製造業者の指示に従って実験室を離れる前に、システム呼気バルブをきれいにすることを忘れないでください。 4。データ解析ソフトウェアは自動的に計算し、摂動に関連付けられているパラメータが表示されます。また、データに数学的モデルの適合を反映し決定係数（COD）を提供します。 INSUと各データセットソフトウェアによって除外としてfficient CODはラベルが付いています。実験的なセッションの見直し、データの再解析およびエクスポートのシナリオの作成 ​​は、ソフトウェアのレビュー＆レポーティングモジュールで行われます。 レビュー＆レポートのモジュールを開き、輸出シナリオを作成し、唯一の十分なCODを持つデータセットを含むように世話をして。 必要なパラメータ、圧力またはフローボリューム曲線、生のデータセット信号またはスプレッドシート·アプリケーションの対象情報（ 表3参照）としてエクスポートします。 時間の関数としてプロットし、各パラメータの平均ベースライン測定は、すべての測定（ 図4参照）。その後、曲線下面積を計算曲線の一般的なプロファイルを分析したり、統計分析を実行することもできます。 、メサコリン濃度の関数としての気道反応の結果を表現し、各被験者には、パラメータおよび実験条件を決定し、特定するには点（ 例えばピーク時）または各メタコリンチャレンジ後の特定の時間。各実験条件（ 表4、図5）のグループの平均およびレポートやプロットの結果を計算します。 正規化を適用する（ 例：％ベースライン）や統計分析を行う;また指定されたパラメータのベースライン値（ 図5C PC 200）の倍増を生産濃度を算出考えるかもしれません。