Sperimentale trasporto pneumococcica umana offre un modello naturale di trasporto e un possibile modello per l'uso nello sviluppo dei vaccini. Questa tecnica è utile ancora complessa e comporta un rischio clinico introducendo un agente patogeno in un essere umano. Abbiamo sviluppato un protocollo dettagliato.
Sperimentale trasporto pneumococcica umano (EHPC) è scientificamente importante perché il trasporto nasofaringeo di Streptococcus pneumoniae è sia la fonte principale di trasmissione e la condizione di malattia invasiva. Un modello di trasporto permetterà accurata determinazione dei correlati immunologici della protezione, l'effetto immunizzante di trasporto e l'effetto della pressione host sul patogeno nella nicchia nasofaringeo. Inoltre, i metodi di rilevamento di trasporto utile per studi epidemiologici, compresi gli studi di vaccini, può essere paragonato.
Puntare
Il nostro obiettivo è sviluppare una piattaforma EHPC che è un metodo sicuro e utile riproducibile che potrebbe essere utilizzato per sotto-selezionare nuovi vaccini contro lo pneumococco candidati con la prevenzione di trasporto come un surrogato di immunità indotta dal vaccino. Essa si adopererà per la sperimentazione di vaccini e le descrizioni dei meccanismi alla base EHPC e protezione del vaccino da Carriage 1. Attuali vaccini coniugati contro lo pneumococco proteggere i bambini dalle malattie invasive, anche se i nuovi vaccini sono urgentemente necessari come l'attuale vaccino non conferisce una protezione ottimale contro i non-batteriemica polmonite e non vi è stata evidenza di sostituzione sierotipo con sierotipi non contenuti nel vaccino 2-4.
Metodo
Abbiamo inoculare con S. pneumoniae sospesi in 100 pl di soluzione salina. La sicurezza è un fattore importante nello sviluppo del modello EHPC ed è realizzato attraverso lo screening volontario intensivo e monitoraggio. Un comitato di sicurezza composto da medici e scienziati che sono indipendenti dallo studio fornisce un feedback obiettivo su base settimanale.
L'inoculo batterico è standardizzato e richiede che i prodotti animali vengono inoculati in volontari (a base vegetale media e saline). Le dosi necessarie per la colonizzazione (10 4 -10 5) sono molto più bassi than quelli utilizzati in modelli animali (10 7) 5. Rilevamento di trasporto pneumococco è arricchita da un volume elevato (idealmente> 10 ml) lavaggio nasale muco che è relativamente libera. Questo protocollo si occuperà delle parti più importanti del protocollo, a sua volta. Questi sono (a) selezione dei volontari, (b) la preparazione dell'inoculo pneumococco, (c) inoculazione, (d) il follow-up e (e) individuazione trasporto.
Risultati
Il nostro attuale protocollo è stato sicuro in più di 100 volontari in un range di dosi utilizzando due diversi sierotipi batterici 6. Uno studio dose-ranging con S. pneumoniae 6B e 23F è attualmente in corso per determinare la dose ottimale inoculazione per il 50% il trasporto. Un tasso previsto del 50% di trasporto permetterà al modello EHPC di avere alta sensibilità per l'efficacia del vaccino con numeri di studio di piccole dimensioni.
La piattaforma EHPC ha una serie di potenziali utilizzi, compreso l'uso come modello vaccino mucosale e come surrogato di protezione per testare vaccini nuova proteina. Il metodo dipende da una tecnica di inoculazione coerente e di alta qualità NW.
La riproducibilità può essere un problema con l'inoculo. A causa della natura variabile delle aliquote congelate batteriche, può essere difficile da replicare la dose desiderata. Un dimezzamento o raddoppio della dose desiderata viene considerato nel raggio d'azione. È fondamentale che la quantificazione batterica essere fatto immediatamente prima e dopo l'inoculazione, per determinare con precisione la quantificazione dei batteri da CFU conteggio. Per questo motivo può essere utile se appuntamenti volontari verificarsi simultaneamente in modo che solo un inoculo occorre elaborare e la placcatura quantificazione, prima e dopo l'inoculazione avviene non più di 30 min a parte.
Il metodo richiede la coope NWrazione del volontario e non sarebbe un metodo ideale nei bambini. Se la resa è inferiore a 5 ml, la procedura può essere ripetuta utilizzando fino a un extra 20 ml. Indossare protesi può ridurre la resa NW. Se il volontario ha un bloccata / naso congestionato e la soluzione salina sta per scadere anteriormente dopo l'inserimento, soffiare il naso, inserire la siringa un po 'più indietro, e inclinare la testa indietro di più se necessario.
Il NO è una tecnica che migliora con la pratica. Certo volume di solito essere perso così l'obiettivo è per un ritorno di almeno 10 ml. Se il volontario può gustare salina durante il NW quindi la connessione tra il rinofaringe e dell'orofaringe posteriore non è stato adeguatamente chiusa dalla lingua del volontario. Se il volontario ingoia la maggior parte della soluzione salina, spiegare di nuovo la procedura, sottolineando la spinta della lingua contro il palato. Ripetere la procedura per aumentare il volume restituito.
Se il NW contiene un substantial quantità di muco, è consigliabile rimuoverla prima della centrifugazione. Vortex il campione in modo da allentare tutto ciò che potrebbe essere legato al muco e quindi rimuovere il maggior numero di pezzi di grandi dimensioni il più possibile durante la rimozione come soluzione salina meno possibile.
Un precedente studio EHPC negli Stati Uniti è stato completato in modo sicuro e non ha avuto eventi avversi 11. Per garantirne la sicurezza permanente della piattaforma EHPC, abbiamo messo a punto un protocollo di emergenza che si basa intorno a 24 ore l'accesso al gruppo di ricerca. I volontari sono date informazioni di contatto, consentendo loro l'accesso al gruppo di ricerca 24 ore al giorno. Tutte le cure mediche necessarie sono fornite in la Royal Liverpool University Hospital. Come ulteriore misura di protezione, un comitato di sicurezza composto da medici e scienziati al di fuori del gruppo di ricerca riceve un rapporto settimanale di sicurezza. Il rapporto contiene la dose batterica ogni volontario ha ricevuto e se alcuni sintomi o malattia sono stati segnalati. Questo rapporto consente la sicurezza del secolostudio e di essere criticato dall'esterno senza pregiudizi. Il comitato di sicurezza sono disponibili anche 24 ore al giorno nel caso improbabile di emergenza.
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato finanziato dalla Bill e Melinda Gates Foundation (premio Grand Challenge esplorazione a SBG), il National Institutes for Health Research (NIHR), Centro di ricerca biomedica in Malattie microbiche, e il Comprehensive Research Network NIHR locale. Riconosciamo il NWDA per il supporto infrastrutturale. Ringraziamo il Prof. J. N Weiser, University of Pennsylvania e il Prof. P Hermans, Università di Nijmegen per i pneumococchi isolati. Grazie al Comitato per la sicurezza EHPC per il loro sostegno e consulenza, a tutti i nostri volontari per la loro partecipazione e per Mathieu Bangert per scattare le foto.
Name | Company | Cat# |
Glycerol | Fisher | G/0650/08 |
0.9% Sodium Chloride | B. Braun | 3627667 |
Skim milk powder | Fluka | 70166 |
Tryptone soya broth | Becton Dickinson | 211768 |
Glucose | BDH | 284504S |
Columbia Agar with chocolated horse blood | Oxoid | PB0124 |
Pneumotest-latex kit | Statens Serum Institut | 51823 |