Méthodes expérimentales pour tester les effets du peptide neurotrophique, ADNF-9, contre l'apoptose induite par l'alcool pendant la grossesse dans C57BL / 6

L'objectif des méthodes expérimentales décrites ici est d'évaluer les effets neuroprotecteurs de peptides trophiques dans un modèle d'exposition d'alcoolisation fœtale en utilisant plusieurs techniques concernant la reproduction, l'alimentation, microdissecting, et la détection de la mort cellulaire. Le travail de notre laboratoire a impliqué une diète liquide mélangé avec de l'alcool comme un modèle de consommation d'alcool modérée, ce qui pourrait être similaire à un paradigme à la consommation humaine en termes de la quantité d'alcool consommée ^1-5. Nous et d'autres avons identifié trois peptides dérivés qui sont neuroprotecteur contre les effets délétères de l'exposition d'alcoolisme foetal. Les études portant sur l'exposition à l'alcool pendant les stades embryonnaires utilisant des modèles animaux peuvent conduire à l'identification des mécanismes potentiels de neuroprotection et de permettre le développement de procédures d'intervention. Cela peut fournir suffisamment d'informations sur les effets neuroprotecteurs et l'atténuation des effets délétères de l'exposition à l'alcool pendant la grossesse.

Prévention possible des effets de l'exposition prénatale à l'alcool peut impliquer le traitement des souris gravides avec des peptides qui ont été montrés pour être impliqués dans la neuroprotection in vitro et in vivo ^{6,7 1,2,4,8,9.} Parmi ces peptides, SALLRSIPA, connu sous le nom ADNF-9 ou SAL, est dérivé d'activité dépendant de facteur neurotrophique (ADNF) ^7,10. Un autre peptide avec la séquence NAPVSIPQ peptide, appelé PAN, dérivé de la protéine neuroprotectrice dépendant de l'activité (ADNP) ^6,11, a démontré un effet protecteur puissant contre le stress oxydatif associé à l'exposition à l'alcool ^12,13. En outre, nous avons récemment identifié un nouveau peptide synthétisé, colivelin qui semble jouer un rôle clé neuroprotecteur dans le alcoolisation fœtale modèle d'exposition ^2. Colivelin est composé de ADNF-9 et AGA (C8R) HNG17 (PAGASRLLLLTGEIDLP). L'importance de l'utilisation de ces peptides, c'est qu'ils ont la capacité detraverser la barrière sang-cerveau pour prévenir les effets de l'apoptose induite par l'alcool et les déficits de croissance du cerveau.

Les méthodes expérimentales ont utilisé des souris C57BL / 6 pour tester les effets neuroprotecteurs contre l'apoptose induite par l'alcool. Nous avons adopté une fenêtre de 2 heures au lieu de reproduction pendant la nuit afin d'estimer avec précision le jour embryonnaire 0 (E0), car il peut être révélée par la détection d'un bouchon de sperme et un frottis vaginal ^1-5. Nous avons utilisé une diète liquide avec des tubes d'alimentation, car cela est considéré comme libre accès au lieu de la livraison de l'alcool par voie gavage, ce qui peut induire un stress à des souris gravides. D'autre part, microdissection peut être difficile en raison de la douceur du tissu du cerveau du fœtus, ce qui peut être rencontrée en disséquant le cerveau du fœtus aux stades embryonnaires. Ici, nous montrons techniques visualisées pour faire face à tous les défis impliquant microdissection. En outre, depuis le sectionnement du cerveau du fœtus peut aussi être difficile, nous avons adoptéune technique qui consiste à intégrer le cerveau du fœtus en gélatine à l'aide pelable intégration des moules. Nous avons réussi à réduire le cerveau du fœtus dans les sections flottantes à 50 um d'épaisseur. Cela nous permet d'étudier des modifications de protéines contenu dans les sections du cerveau du fœtus, y compris l'identification de la mort cellulaire.