Используя люциферазы и в естественных систем визуализации (ИВИС) в качестве нового средства выявления заболевания до появления клинических конечных точках события происходят. ИВИС позволили нам визуализировать в реальном времени вторжения вирусов энцефалита в течение нескольких дней, обеспечивая более точное заболевание моделью для будущих исследований. Это также позволило нам выявить потенциальные защитные свойства противовирусных препаратов и вакцин быстрее, чем в настоящее время применяются животных моделях. Возможность использования отдельных животных в течение нескольких моментов времени обеспечивает уменьшить животное требований, затрат и общей заболеваемости на животных использовались обеспечения более гуманного и более научными средствами болезни исследовании.
Современные достижения в области технологий визуализации способствовать дальнейшему развитию и совершенствованию на пути вирусных исследований выполнена. Первоначально предложенный Расселом и Burch в 3Rs Юма (замена, восстановление, уточнение), использование животных моделей в научных исследованиях находится под постоянным давлением для выявления новых методологий для уменьшения использования животных при одновременном повышении научной точностью и скоростью. Одна из основных задач для директора Юма, однако, в том, как обеспечить исследования являются статистически точным при одновременном снижении животных заболеваемости и общего числа. Исследования Эффективность вакцины в настоящее время требуют большого количества животных для того, чтобы считать статистически значимым и часто приводит к высокой заболеваемости и смертности конечные точки для определения иммунной защиты. Мы использовали в естественных систем визуализации (ИВИС) в сочетании с ферментом светлячков биолюминесцентного постепенно отслеживать вторжения в центральной нервной системе (ЦНС) по ENCEphalitic вируса в мышиной модели. Как правило, болезнь протекает относительно медленно, однако репликация вируса происходит быстро, особенно в ЦНС, и может привести к часто летальный исход. После интраназального заражения мышей с TC83-Luc, ослабленный венесуэльского конского энцефалита штамма вируса изменены, чтобы выражает гена люциферазы, мы находимся в состоянии представить себе репликации вируса в мозг по крайней мере за три дня до развития клинических симптомов заболевания. Используя CNS вторжением в качестве ключевой энцефалита конечной точкой развития болезни мы в состоянии быстро определить терапевтическую вакцину и защиты от TC83-Люк инфекции до появления клинических симптомов. С технологией ИВИС мы можем продемонстрировать быстрое и точное тестирование препарата терапии и вакцин при одновременном сокращении численности животных и заболеваемости.
Хотя этот протокол охватывает аспекты изображений для прижизненного анализа, важно признать биолюминесцентного вектор как ключевой фактор для будущих исследований. Наши использования TC83, ослабленный штамм вакцины VEEV, в качестве вектора для экспрессии люциферазы гарантирует, чт…
The authors have nothing to disclose.
Институт Поступательное наук UTMB-NIH грант 1UL1RR029876-01 и Алиша Пратер за ее помощь в редактировании видео для этой рукописи.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
D-Luciferin | |||
Isoflurane | |||
Xenogen IVIS System (Spectrum) | Caliper Life Sciences | ||
XGI-8-gas Anesthesia System | Caliper Life Sciences | ||
XIC-3 Containment Box | Caliper Life Sciences | ||
LivingImage 4.0 Software | Caliper Life Sciences | ||
Telemetry/identification chips | Bio Medic Data Systems | IPTT-300 | Animal ID and Temperature |
BD Integra 1ml TB syringe with 26 g x 3/8” needle | Fisher Scientific | 305279 | |
Vet Bond tissue adhesive | Fisher Scientific | NC9259532 | |
Vetropolycin Ophthalmic Ointment | Webster Veterinary Products | 78444656 | |
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline 1X | Invitrogen | 14190-144 | |
BMDS Chip Reader | Bio Medic Data Systems | DAS-7007S | |
DAS-HOST Software | Bio Medic Data Systems | Used to download probe information |