Trapianto di fegato nei ratti è un modello sperimentale indispensabile per la ricerca biomedica. Qui vi presentiamo le nostre procedure chirurgiche per il trapianto ortotopico di fegato di ratto con la ricostruzione arteriosa epatica con un trapianto parziale del 50%.
Trapianto di fegato (OLT) nei ratti utilizzando un innesto totale o parziale, è indispensabile un modello sperimentale per la ricerca trapianto, come ad esempio gli studi sulla conservazione del trapianto e ischemia-riperfusione 1,2 lesioni, risposte immunologiche 3,4, 5,6 emodinamica, e di piccole dimensioni per la sindrome di 7. La OLT ratto è tra i modelli animali più difficili in chirurgia sperimentale e microchirurgia richiede competenze avanzate che richiedono molto tempo per imparare. Di conseguenza, l'uso di questo modello è stato limitato. Dal momento che l'affidabilità e la riproducibilità dei risultati sono componenti chiave degli esperimenti in cui si utilizzano tali modelli animali complessi, è fondamentale per i chirurghi che sono coinvolti nel OLT ratto per essere addestrato nelle procedure ben standardizzate e sofisticata per questo modello.
Mentre varie tecniche e modifiche di OLT nei ratti sono stati riportati 8 Poiché il primo modello è stato descried da Lee et al. 9 nel 1973, l'eliminazione della arteria epatica ricostruzione 10 e l'introduzione della tecnica anastomosi bracciale da Kamada et al. 11 erano un avanzamento importante in questo modello, perché semplificato le procedure di ricostruzione in grande misura . Nel modello da Kamada et al., Il rearterialization epatica è stato eliminato. Dal momento che i ratti possono sopravvivere in assenza di flusso in arteria epatica dopo trapianto di fegato, vi è stata polemica considerevole rispetto al valore di arterialization epatica. Tuttavia, la superiorità del modello fisiologico arterializzato è stato sempre più riconosciuto, soprattutto in termini di preservazione del sistema biliare 8,12 e dell'integrità fegato 8,13,14.
In questo articolo, vi presentiamo dettagliate procedure chirurgiche per un modello murino di OLT con ricostruzione arteriosa epatica con un innesto parziale del 50% dopo resezione epatica ex vivozione. Le procedure di ricostruzione per ciascuna nave e il dotto biliare vengono eseguite con i seguenti metodi: un 7-0 sutura in polipropilene continuo per la sovra-e sottoepatica vena cava; una tecnica bracciale per la vena porta, e una tecnica di stent per l'arteria epatica e il dotto biliare.
Il primo modello di OLT ratto è stato riportato da Lee et al. Nel 1973 9, in cui tutte le navi comprese dell'arteria epatica sono stati ricostruiti da un cucita a mano e il metodo shunt porto extracorporeo è stato utilizzato. Questo modello era tecnicamente complicato e difficile da eseguire. Il modello successivo è stato uno senza ricostruzione arteriosa epatica e lo shunt extracorporea, sviluppato dagli autori stessi 10 nel 1975. Successivamente, nel 1979, Kamada et al. Ha introdotto la tecnica di anastomosi bracciale per il modello senza rearterialization epatica 11. Con queste modifiche, OLT nei ratti è stato semplificato con un tempo anepatica abbreviato in operazioni destinatario ed è stato ampiamente utilizzato come modello sperimentale accettato.
Tuttavia, non vi è stata da allora notevoli controversie sul significato di arterialization epatica nel ratto OLT 8 perché il arterialization è stato un compito impegnativo, ma did non influenzano la sopravvivenza dopo il trapianto. Numerosi studi su arterialization epatica utilizzando varie tecniche di ricostruzione sono stati riportati 8, ad esempio un segmento aortico-to-aorta anastomosi 3,9,17, una tecnica di anastomosi bracciale 18,19,20, una tecnica telescopica 5, una tecnica stent 13, 16, e una tecnica di anastomosi manicotto 12,21-23. Mentre la tecnica di OLT ratto non è ancora standardizzata oggi, il modello arterializzato è stata sempre favorita in termini di superiorità fisiologica 8,12,13,14. Tra le tecniche sopra menzionate, una tecnica stent che era semplice e veloce per eseguire stata riportata da Lehmann et al. 16 del 2005. Lo studio ha mostrato ottimi risultati: no rate occlusione è stata osservata in arteria epatica ricostruito a 8 ore, 24 ore, e 6 mesi dopo la riperfusione. Abbiamo quindi adottato questa tecnica per arterialization epatica.
Abbiamo Performa cucito a mano anastomosi per la ricostruzione del SHVC e IHVC. Questo metodo fornisce il sito anastomosi con una condizione ottimale fisiologica, che porta alla ridotta incidenza di trombosi 8, ed è la migliore simulazione microchirurgia e formazione per i chirurghi. Inoltre, l'anastomosi può essere possibile anche con ceppi vaso brevi. Concernente l'anastomosi di IHVC, questo metodo non richiede una lunga IHVC sul lato dell'innesto rispetto alla tecnica anastomosi bracciale. Pertanto, quando la vena renale donatore è sezionato per rendere il IHVC innesto lungo, questo metodo è applicabile al trapianto di un piccolo innesto che necessita di un IHVC lungo, come un innesto 30% che consiste di lobi laterali destra e caudato con intraepatico breve vena cava senza SHVC 2.
Per quanto riguarda le tecniche di resezione del fegato nei ratti, fino ad oggi diversi metodi sono stati segnalati, le due tecniche principali sono la classica tecnica della legatura di massae la nave orientato tecnica 24. Abbiamo eseguire la tecnica classica legatura per resezione epatica 50% 15, ma sotto un microscopio chirurgico per rendere la procedura più fine, e per evitare danni ai lobi rimanenti e strutture.
Abbiamo descritto i risultati rappresentativi dei ratti destinatario nel nostro modello, i topi sono sopravvissuti durante il periodo di 7 giorni di osservazione senza complicazioni apparenti. Il modello può essere modificato per scopi diversi esperimenti scegliendo le impostazioni diverse, come prolungato stoccaggio a freddo, prolungata ischemia calda che comprende donazione dopo morte cardiaca, e l'utilizzo di fegati piccole o innesti di modelli sperimentali di danno al fegato o malattie.
Nella nostra esperienza, ci sono tre fattori chiave delle procedure che possono influenzare la sopravvivenza dopo il trapianto, il parametro più affidabile per i risultati di OLT ratto: la quantità di perdita di sangue, il tempo di funzionamento, gli eappositamente bloccaggio tempo della vena porta e IHVC, e l'adeguatezza della ricostruzione di una nave, che potrebbe causare una stenosi, trombosi, o sanguinamento. In un periodo di formazione di questo modello, la maggior parte dei fallimenti potrebbe probabilmente essere correlato a tali fattori. In questo articolo video, vi presentiamo passo-passo le istruzioni per le procedure chirurgiche per il nostro modello di ratto di OLT parziale con ricostruzione arteriosa epatica. Mentre un modello di ratto di OLT è complicato e richiede competenze avanzate di microchirurgia, in questo articolo fornisce un sacco di informazioni pratiche, che dovrebbe servire come una buona guida per la formazione e l'apprendimento di questo modello. Apprendimento questo modello efficiente è particolarmente importante per abbreviare il periodo di apprendimento, riducendo il numero di animali e costi necessari per la pratica, e poi riprodurre risultati affidabili in esperimenti. Ciò è in linea con il concetto delle 3R (sostituzione, riduzione e perfezionamento) degli esperimenti sugli animali, che è stata postulata da Russel e Burch nel1959 25.
The authors have nothing to disclose.
Gli autori ringraziano Pascal Paschenda e Mareike Schulz per la loro assistenza tecnica.
Name | Company | Catalogue number | Comments |
Surgical microscope | Leica | M651 | |
Light source | Schott | KL1500LCD | |
Cotton swabs | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
Gauze swabs (5×5 cm) | Fuhrmann | 10002 | |
povidone-iodine solution | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
Oil-based clay | Debika corporation | 090148 | |
TachoSil | Takeda Pharmaceuticals International GmbH | EU/1/04/277/001-004 | Applied to resected liver surface |
Scalpel blade No. 11 | Pfm medical | 200130011 | Preparation of cuff and stents |
14-gauge catheter | B. Braun | 4268210S | Cuff for PV |
18-gauge catheter | B. Braun | 4268130S | Perfusion via PV |
24-gauge catheter | B. Braun | 4269071S | Stent for BD and HA |
4-0 silk suture | Resorba | H3F | Liver resection |
6-0 silk suture | Resorba | H1F | |
7-0 Prolene (polypropylene) suture | Ethicon | 8701H | SHVC and IHVC |
4-0 Vicryl suture | Ethicon | V304H | Abdominal closure |
5-ml syringe | Terumo | SS+T05ES1 | Back pillow |
Heating pad | Thermo | 190 x 260 mm | |
Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools Inc. | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 |
|
Cold water bath | Huber | 740.000X | Graft preservation |
Bipolar forceps | Söring | MBC-200 | |
Mosquito forceps | BONIMED | 451-476-03 | Two pairs used |
Adson micro forceps | Dimeda | 10.176.12 | |
Curved micro forceps | AESCULAP | FD281R | |
Straight micro forceps | Bonimed | 451-476-03 | |
Curved micro scissors | Medicon | 05.15.83 | |
Straight micro scissors | AESCULAP | FD12 | Fine incision |
Scissors | AESCULAP | BC211W | |
Micro needle holder | AESCULAP | FD241R | Reconstruction |
Mayor-Hegar Needle holder | Mizuho Ikakogyo | 06-798-00 | Abdominal closure |
DeBakey Bulldog clamp (straight) | ULRICH | CV3054 | |
DeBakey Bulldog clamp (curved) | CODMAN | 37-1062 | |
Satinsky clamp | Mizuhoika | 09-230-24 | |
Peripheral vascular clamp | Teleflex Medical | 353494 | Recipient SHVC |
Micro vessel clamp (disposable) | AROSurgical Instruments Corporation | TKM-1-60 g | PV, graft IHVC, and recipient HA |
Micro vessel clamp (metal) | Fine Science Tools Inc. | 18052-01 | Recipient IHVC |
Lactated Ringer solution | Fresenius Kabi | 6150917.00.00 | |
Normal saline solution | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | 31268.00.00 | Preservation solution |
Heparin-Natrium | Ratiopharm | 5394.02.00 | 500 IU before graft perfusion |
8.4% sodium bicarbonate | Fresenius Kabi | 4399.97.99 | 0.5 ml after reperfusion |
5% Glucose solution | B. Braun | 6714567.06.00 | 1.0 ml after reperfusion |
Cefuroxim sodium | Fresenius Kabi | 38985.01.00 | Antibiotic, 16 mg/kg |
Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Painkiller, 0.1 mg/kg |
Intensive Care Unit Cage | Brinsea Products Ltd. | Vetario S10 | Postoperative care |