フローサイトメトリーによる胸腺正と負の選択の検討

健康な免疫システムは、自己抗原に対する寛容を維持しながら、T細胞は外来抗原に反応している必要があります。 T細胞受容体（TCR）αおよびβ遺伝子座のランダム再配置は、自己と外国の両方に、抗原特異性の広大な多様性を有するT細胞レパートリーを生成します。胸腺での開発時にレパートリーの選択は、安全で有用なT細胞を生成するために重要です。胸腺選択の欠陥は、自己免疫疾患および免疫不全疾患^1-4の発展に貢献しています。

T細胞の前駆細胞は、CD4またはCD8コレセプターを発現していないダブルネガティブ（DN）の胸腺細胞として胸腺を入力します。 αβTCRと両方共受容体の発現は、ダブルポジティブ（DP）の段階で発生します。胸腺細胞によって提示された自己ペプチド – MHCとαβTCR（pMHC複合）との相互作用は、DP胸腺細胞の運命を決定する。高親和性相互作用負の選択と消去又はにつながる自己反応性胸腺細胞のる。 CD4または自己MHCによって提示された⁵外来抗原を認識することができるCD8シングルポジティブ（SP）はT細胞の正の選択と開発における低親和性の相互作用の結果。

ポジティブセレクションは、成熟T細胞の生成を観察することによって、ポリクローナル（野生型）TCRレパートリーを持つマウスで検討することができます。しかし、彼らは小さな抗原特異的集団の削除を伴う負の選択の研究のために理想的ではありません。多くのモデル系は、負の選択を検討するが、生理学的事象^6を再現する能力に変化させるために使用されてきた。外来抗原の投与が胸腺細胞^7-9の非特異的欠失につながることができますたとえば、胸腺細胞のin vitroで刺激すると 、親密に選定に関与している胸腺環境を欠いている。現在、 生体ネガティブセレクションで勉強するための最良のツールはtransgを表現するマウスである自己抗原内因用enic TCRの特定。しかし、多くの古典的なTCRトランスジェニックモデルは時期尚早の負の選択で、その結果、DNの段階でトランスジェニックTCRα鎖の早期の発現によって特徴付けられる。私たちの研究室では^、10野生型マウスで発生する負の選択がSP遷移にDPの中に発生することができ、トランスジェニックHYTCRαが条件付きでDPステージで表現されたHYの^CD4モデルを開発しました。

ここでは、HYの^CD4マウスモデルにおける胸腺の正と負の選択を検討するために、フローサイトメトリーベースのプロトコルを記述します。 HYの^CD4マウスにおける負の選択は非常に生理的であるが、これらの方法は、他のTCRトランスジェニックモデルに適用することができます。我々はまた、遺伝子操作されたマウスに適用ポリクローナルレパートリーに正の選択を分析するための一般的な戦略を提示します。