視床下部マウス脳スライスのGFPタグニューロンにおけるイメージングカルシウム応答

脳内の情報の符号化、正確な分子手順並びに視床下部が残っているとしての脳領域の多機能の核内の特定のニューロンの活動に関わる中心的な問題の根底にあるメカニズムについての我々の知識の巨大な増加にもかかわらず。この問題は、様々な神経ホルモンのシグナル伝達カスケードの調節に関与する分子成分の識別を含む。細胞内Ca ^{2 +}の上昇は両方のシグナル伝達のレベルとシナプス部位で、神経細胞の感度を調節するのに重要な役割を果たしている。

新しいツールは、特定のプロモーターの制御下に緑色蛍光タンパク質（GFP）を発現させることにより、脳の神経細胞の無数のニューロンを特定するために浮上している。空間的にも時間的刺激によって誘発されるCa ^{2 +の} GFPタグニューロン、非緑色蛍光Ca ^{2 +}指示薬色素nの応答を監視するには使用するeeds。さらに、共焦点顕微鏡は、組織内の深さの異なる平面内のニューロンを可視化するとアウトフォーカスの蛍光を制限するために、その能力のために組織切片におけるイメージング個々のニューロンの好きな方法である。レシオメトリックのCa ^{2 +}指示薬FURA-2は、GFPタグニューロン¹と組み合わせて使用されています。しかし、染料は紫外線（UV）光によって励起される。レーザのコストおよびUV光の限られた光の浸透深さは、多くの研究室での使用を妨げた。また、GFP蛍光はFURA-2信号²と干渉する場合があります。したがって、私たちは赤い蛍光Ca ^{2 +}指示薬色素を使用することを決めた。 FURA-赤の巨大なストロークシフトは単一の励起波長を用いて、GFPとの組み合わせで赤色蛍光の多色分析を可能にします。我々はGFPタグ嗅覚ニューロン³と組み合わせてFURA-赤を使用して以前に良好な結果を得た。嗅覚組織切片のためのプロトコルは、電子を動作するように見えたquallyよく視床下部ニューロン^4インチのFura-赤基づくのCa ^{2 +}イメージングにも成功し、膵β細胞とHEK細胞に発現し^5,6 GFPタグ受容体GFPタグと組み合わせた。 FURA-赤の少し癖は、インジケータがカルシウム^7をバインド^した後650nmでの蛍光強度が減少することである。したがって、低Ca ^{2 +}濃度と休息ニューロンの蛍光は、比較的高い強度を有している。それは注意すべきで、そのほかの赤のCa ^{2 +}指示薬色素が存在しないか、現在開発されて、それはまた別のニューロンと脳領域におけるより良いまたは改善された結果を与えるかもしれない。