Utilisation de la souris BLT humanisé comme une tumeur de cellules souches Gene Therapy modèle basé sur

De petits modèles animaux tels que des souris ont été largement utilisées pour étudier les maladies humaines et à développer de nouvelles interventions thérapeutiques. Malgré la richesse des informations obtenues à partir de ces études, les caractéristiques uniques de l'immunité de la souris ainsi que la spécificité d'espèce des maladies virales comme le virus de l'immunodéficience humaine (VIH) a conduit au développement de modèles murins humanisés. Les modèles précédents impliquaient l'utilisation de C. B 17 scid / scid souris et la transplantation de l'homme thymus foetal et le foie du fœtus appelés ton / liv (SCID-hu) ^{1, 2} ou le transfert adoptif de l'homme leucocytes du sang périphérique (SCID-huPBL ) ^3. Les deux modèles ont été principalement utilisés pour l'étude de l'infection par le VIH.

L'une des principales limites de ces deux modèles est le manque de reconstitution stable de cellules immunitaires humaines dans la périphérie pour en faire un modèle plus physiologiquement pertinente pour étudier la maladie du VIH. À cette fin, le bourdonnement BLTmodèle de souris anized a été développé. BLT est synonyme de moelle osseuse / foie / thymus. Dans ce modèle, de 6 à 8 semaine vieux NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SZJ (NSG) des souris immunodéprimées recevoir l'implant ton / liv comme dans le modèle de souris SCID-hu ne doit être suivie d'une deuxième transplantation de cellules souches hématopoïétiques humaines ^4. L'avantage de ce système est la reconstitution complète du système immunitaire humain dans la périphérie. Ce modèle a été utilisé pour étudier l'infection à VIH et la latence ^5-8.

Nous avons généré une version modifiée de ce modèle dans lequel nous utilisons génétiquement modifiés cellules souches hématopoïétiques humaines (HHSC) pour construire l'implant ton / liv suivie d'une injection autologue de transduction HHSC ^{7, 9.} Cette approche se traduit par la génération de lignées génétiquement modifiées. Plus important encore, nous avons adapté ce système pour étudier le potentiel de générer des cellules fonctionnelles T cytotoxiques (CTL) exprimant un mélanome récepteur des cellules T spécifiques. En utilisant ce modèle, nous avons pu évaluer la fonctionnalité de notre CTL transgénique en utilisant en direct par émission de positrons (TEP) pour déterminer la régression tumorale (9).

L'objectif de ce protocole est de décrire le processus de génération de ces souris transgéniques et d'évaluer l'efficacité in vivo utilisant l'imagerie TEP en direct. Comme une note, car nous utilisons des tissus humains et les vecteurs lentiviraux, nos installations sont conformes aux directives du NIH pour la CDC de biosécurité de niveau 2 (BSL2) avec des précautions particulières (BSL2 +). En outre, les souris NSG sont gravement immunodéprimés par conséquent, leur logement et de maintenance doivent être conformes aux normes les plus élevées de santé ( http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html ).