フローの状況下で好中球移住研究におけるヒト臍帯静脈内皮細胞とそれらの使用の分離

好中球は白血球の中で最も豊富なタイプです。彼らは、自然免疫系¹の本質的な部分を形成しています。急性炎症時に、好中球は、損傷部位に移行する最初の炎症性細胞である。第二に、微小血管の構造変化と血漿タンパク質のエスケープを血流から;損傷部位への好中球の動員は、血流を増加させる血管の最初に、拡張を含む段階的なプロセスである全体の好中球の第三の、ローリング、接着と輪廻内皮細胞、傷害^2,3のサイトでは好中球と4番目の蓄積。 in vivoおよび in vitro の方法での広い配列は、これらのプロセスの⁴の研究を可能にするために進化してきました。このメソッドは、ヒト内皮細胞間の好中球の移住に焦点を当てています。

好中球遊出に関与する分子プロセスを調べるための一つの一般的な方法は、人間のnを利用する初代ヒト臍帯静脈内皮細胞^（HUVEC）5との相互作用eutrophils。好中球の分離は、他の場所で視覚的に^6に記載されています、従ってこの記事では、HUVECの単離のための方法が表示されます。一度分離し、コンフルエンスまで増殖、内皮細胞接着と活性化分子のアップレギュレーションで得られた活性化されています。例えば、増加したE-セレクチンとIL-8発現⁷のTNF-αの結果のようなサイトカインと血管内皮細胞の活性化。 E-セレクチン媒介する好中球およびIL-8を媒介する活性化と好中球の強固な接着のキャプチャとローリング。接着好中球は転生した後。輪廻はparacellularly起こる（血管内皮細胞の接合部を介して）またはtranscellularly（内皮細胞自体を介して）することができます。ほとんどの場合、これらの相互作用は、血管系^7,8に見られるフローの状況下で発生します。

平行平板流室は広く使用されているシステムであり、そのマイルマイク流体力学的せん断は、 生体内に存在し、in vitroで ^9,10 のフロー条件の下で好中球動員の研究を可能に強調しています。いくつかの企業は、平行平板フローチャンバーを生成し、それぞれに長所と短所があります。蛍光イメージングが必要な場合は、ガラスや光学的に類似したポリマーは、使用する必要があります。内皮細胞は、ガラス上でうまく育たない。

ここでは、位相コントラスト用に匹敵する光学特性をヒト内皮細胞の急速な付着と成長をサポートしているポリマーで作られた低容量ibidiチャネルスライドを用いて好中球遊出のDICと蛍光イメージングを簡単かつ迅速な方法を提示するガラス。この方法では、内皮細胞を増殖させたとibidiのμslideで刺激した。好中球は、フロー条件下で導入され、輪廻を評価した。接合部の蛍光イメージングは​​、対傍細胞の範囲のリアルタイム測定を可能にし経輪廻。