Ensaio de Point-of-Care rápida de eficácia anticoagulante enoxaparina em sangue total
Summary
Demonstração de um ensaio rápido quantitativa da inibição da coagulação do sangue pelo baixo peso molecular, heparina, enoxaparina. A contribuição de enoxaparina é avaliada através da remoção de sua influência através da digestão com heparinase. Uma descrição mais completa do ensaio está detalhado em nosso trabalho publicado.<sup> 1</sup> O ensaio ainda requer confirmação clínica.
Abstract
Existe a necessidade de um ensaio clínico para determinar a extensão em que o sangue de um paciente é eficazmente anticoagulados pelo baixo peso molecular, heparina (HBPM), enoxaparina. Existem também situações clínicas urgentes onde seria importante se este pudesse ser determinado rapidamente. O presente ensaio é projetado para fazer isso. Nós só ensaiadas amostras de sangue humano que foram fortificadas com concentrações conhecidas de enoxaparina. A característica essencial do presente ensaio é o de quantificar a eficácia da enoxaparina na amostra de sangue de um paciente por degradando-a à inactividade completa com heparinase. Duas amostras de sangue foram colhidas em tubos Vacutainer (Becton-Dickenson, Franklin Lakes, NJ), que foram adicionadas com a enoxaparina, uma amostra foi digerido com heparinase durante 5 min a 37 ° C, a amostra de outro estado representado basais do doente anticoagulado. O encurtamento do tempo de coagulação por cento na amostra tratada com heparinase, em comparação com o bEstado aseline, rendeu a contribuição de anticoagulante enoxaparina. Utilizou-se o portátil, bateria operado Hemochron aparelho 801 para a medição de tempos de coagulação (International Technidyne Corp, Edison, NJ). O aparelho tem duas controlados por termostato (37 ° C) poços para tubos de ensaio. Conduzimos ensaios em dois tipos de cartuchos de ensaio que estão disponíveis a partir do fabricante do instrumento. Um cartucho foi modificado para aumentar a sua sensibilidade. Removemos o caulino a partir do cartucho FTK-ACT por extensa lavagem com água destilada, deixando apenas a superfície do tubo de vidro, e, talvez, o íman de detecção, como activadores. Nós chamamos este ensaio nosso minimamente ativado (MAA). O uso de um ensaio minimamente activada tem sido estudada por nós e outros. 2-4 O segundo cartucho que foi estudado era um tempo de tromboplastina parcial activada (APTT) (A104). Este foi utilizado como fornecido pelo fabricante. Os poços regulados por termóstato do instrumento were utilizado tanto para a heparinase digestão e ensaios de coagulação. O ensaio pode ser concluída dentro de 10 min. O ensaio mostrou mudanças MAA robustos em tempo de coagulação, após digestão com heparinase da enoxaparina sobre uma gama de concentrações clínico típico. A 0,2 UI anti-Xa de enoxaparina por ml de amostra de sangue, a digestão heparinase causou uma diminuição média de 9,8% (20,4 s) no tempo de coagulação, com 1,0 UI por ml de enoxaparina houve uma redução de 41,4% (148,8 seg.) Este relatório apresenta apenas a aplicação experimental do ensaio, e seu valor em um ambiente clínico deve ainda ser estabelecida.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este ensaio de eficácia enoxaparina pode servir como uma alternativa importante para determinar a segurança relativa da realização de um procedimento invasivo que tem um risco inerente de hemorragia ou desenvolvimento de um hematoma. Isto seria de particular importância quando uma injecção epidural está a ser considerada. A maioria das diretrizes recomendam um período de espera de 12 horas entre a injecção de enoxaparina e início de um procedimento invasivo 5 Insuficiência renal, obesidade e gravidez podem influenciar os requisitos de administração de enoxaparina 6,7 Desde o ensaio pode ser concluído dentro de um 10.. – período min, poderia também ser utilizado numa clínica ou consultório médico, onde ele iria fornecer informação relativa ao nível de anticoagulação em pacientes que estão em risco de desenvolvimento de tromboembolismo venoso. Ajustes de dosagem imediata pode ser exercida, se necessário.
A concentração no plasma enoxaparina pode ser medido por um cromogénico umssay da extensão da inibição do factor de coagulação, Xa. No entanto, isso só produz a sua concentração não, especificamente a sua eficácia anti-coagulante, que varia amplamente entre os pacientes individuais. 6-8
Nossos estudos foram realizados apenas com enoxaparina. No entanto, pode prever-se que o ensaio pode ser aplicado a qualquer LMWH que é degradado por heparinase I. Isto já é conhecido por ser o caso para a dalteparina, nadroparina e tinzaparina. 9-11 Desenvolvemos o ensaio em relação às características de o instrumento Hemochron tempo de coagulação. O instrumento é relativamente barato, também, os tubos de sangue descartáveis coleta, ampola heparinase e cartuchos de ensaio para completar uma análise para um paciente é de aproximadamente 15 dólares. Assim, seria de esperar para ser adequado para monitorizar o estado anticoagulante em vários cenários clínicos.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
As investigações foram realizadas apenas com o apoio de recursos departamentais e institucionais. O aparelho de coagulação (Hemochron 801) foi emprestado, sem a obrigação do fabricante. Os cartuchos de ensaio foram comprados em seus custos de varejo. A figura introdutória em que o vídeo foi modificado a partir do Sanderink, et al. 12 A segunda figura no vídeo (heparinase curso de tempo de digestão) foi reproduzido com a permissão de Inchiosa et al. 1
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hepzyme | Siemens | B4240 | heparinase I |
| “MAA” cartridge | Technidyne | FTK-ACT | modified by kaolin removal |
| aPTT cartridge | Technidyne | A104 |
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