Snelle Point-of-Care test van Enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed
Summary
Demonstratie van een snelle kwantitatieve analyse van de remming van bloedstolling door de laag moleculair gewicht heparine, enoxaparine. De bijdrage van enoxaparine wordt beoordeeld door het verwijderen van de invloed door digestie met heparinase. Een vollediger beschrijving van de assay wordt beschreven in onze gepubliceerde papier.<sup> 1</sup> De test moet nog klinische bevestiging.
Abstract
Er is behoefte aan een klinische test om de mate waarin een patiënt bloed effectief wordt geanticoaguleerd de laag moleculair gewicht heparine (LMWH), enoxaparine bepalen. Er zijn ook dringend klinische situaties waarin het belangrijk als deze snel kunnen worden bepaald. Deze test is ontworpen om dit te bereiken. We alleen getest menselijke bloedmonsters die werden gespiked met bekende concentraties enoxaparine. Het essentiële kenmerk van de onderhavige assay is het kwantificeren van de werkzaamheid van enoxaparine in bloed van een patiënt monster degraderen inactiviteit compleet met heparinase. Twee bloedmonsters werden bij Vacutainer buizen (Becton-Dickenson, Franklin Lakes, NJ) die zijn verrijkt met enoxaparine; een monster werd geknipt met heparinase gedurende 5 min bij 37 ° C en het andere monster van de patiënt weergegeven basislijn anticoagulanteerd status. Het percentage kortere stollingstijd in de heparinase-behandelde monster, in vergelijking met de baseline staat, leverde de anticoagulerende bijdrage van enoxaparine. We gebruikten de draagbare batterijen Hemochron 801 Inrichting voor het meten van stollingstijden (International Corp Technidyne, Edison, NJ). De inrichting heeft 2 thermostaat (37 ° C) assay waterputten. We de assays uitgevoerd in twee soorten assay cartridges die bij de fabrikant van het instrument. Een cartridge werd gemodificeerd om de gevoeligheid te verhogen. We verwijderden het kaolien de FTK-ACT cartridge door uitgebreid spoelen met gedestilleerd water, waardoor alleen het glas van de buis, en misschien de detectie magneet als activatoren. We noemden dit ons minimaal geactiveerd assay (MAA). Het gebruik van een minimaal geactiveerde assay is bestudeerd door ons en anderen. 2-4 De tweede patroon dat werd onderzocht was geactiveerde partiële tromboplastinetijd (aPTT) assay (A104). Dit werd gebruikt als geleverd door de fabrikant. De thermostaat putten van het instrument were zowel voor de heparinase spijsvertering en stollingstesten. De test kan worden uitgevoerd binnen 10 minuten. De MAA test ingrijpende wijzigingen in de stollingstijd toonde na heparinase vertering van enoxaparine over een typisch klinisch concentratiebereik. Bij 0,2 anti-Xa IE enoxaparine per ml bloed monster, heparinase spijsvertering veroorzaakt een daling van gemiddeld 9,8% (20,4 sec) in stollingstijd; bij 1,0 IE per ml enoxaparine was er een daling van 41,4% (148,8 sec). Dit rapport presenteert alleen de experimentele toepassing van de test; zijn waarde in een klinische setting moet nog worden vastgesteld.
Protocol
Representative Results
Discussion
Deze test van enoxaparine werkzaamheid kan dienen als een belangrijke optie voor de relatieve veiligheid van het uitvoeren van een invasieve procedure die een verzorger risico op bloedingen of de ontwikkeling van een hematoom is vast te stellen. Dit zou met name belangrijk wanneer een epidurale injectie wordt overwogen. De meerderheid van de richtlijnen bevelen een wachttijd van 12 uur tussen injectie van enoxaparine en inleiding van een invasieve procedure 5 Nierinsufficiëntie, obesitas en zwangerschap kunnen de dosering eisen van enoxaparine beïnvloeden 6,7 Omdat de test kan worden voltooid binnen een 10.. – min periode, kan het ook gebruikt worden in een kliniek of arts het kantoor, waar het zou informatie over de geschiktheid van antistolling bij patiënten die op een risico van ontwikkeling van veneuze trombo-embolie te bieden. Onmiddellijke aanpassing van de dosering kan worden ingesteld, als dat nodig is.
De enoxaparine concentratie in plasma kan worden gemeten door een chromogene eenssay van de mate van remming van de stollingsfactor Xa. Echter, dit alleen geeft de concentratie, die niet specifiek zijn anticoagulans werkzaamheid, die op grote schaal varieert tussen de individuele patiënten. 6 tot 8
Onze studies werden uitgevoerd alleen met enoxaparine. Het kan echter worden verwacht dat de assay kan worden toegepast op elk LMWH dat wordt afgebroken door heparinase I. Deze reeds bekend is het geval voor dalteparine, nadroparine en tinzaparin zijn. 9-11 We hebben de test met betrekking tot de kenmerken van de Hemochron stollingstijd instrument. Het instrument is relatief goedkoop, ook, de wegwerp bloedafnamebuisjes, heparinase ampul, en test patronen te voltooien een analyse voor een patiënt is ongeveer 15 dollar. Zo zou men kunnen verwachten dat geschikt om anticoagulant status controleren in verschillende klinische instellingen.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De onderzoeken werden uitgevoerd uitsluitend met steun van afdelings-en institutionele middelen. De coagulatie apparatuur (Hemochron 801) werd geleend zonder de verplichting van de fabrikant. De test cartridges werden gekocht bij hun retail kosten. De inleidende figuur in de video werd gewijzigd van Sanderink, et al.. 12 De tweede figuur in de video (heparinase spijsvertering tijdsverloop) werd overgenomen met toestemming van Inchiosa et al. 1.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hepzyme | Siemens | B4240 | heparinase I |
| “MAA” cartridge | Technidyne | FTK-ACT | modified by kaolin removal |
| aPTT cartridge | Technidyne | A104 |
References
- Inchiosa, M. A. J. r., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood. J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).
- Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro. Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).
- Pothula, S., Inchiosa, M. A., Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays. Anesth Analg. 96, SCA39 (2010).
- Inchiosa, M., Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin. Anesth Analg. 102, SCA10 (2010).
- Gogarten, W. The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia. Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).
- Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose. Drug Saf. 28, 333-349 (2005).
- Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients. Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).
- El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures. J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).
- Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase. Thromb Res. 44, 599-610 (1986).
- Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).
- Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling. Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).
- Sanderink, G. -. J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -. L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment. Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).
