Preparazione del tessuto corneale dei donatori per Keratoplasty Endothelial

1. Setup: una tecnica asettica 11 Accendere cappa a flusso laminare (LFH). Accendere l'unità di controllo Azoto. Assicurarsi che il tubo sia collegato tra l'unità di console e il serbatoio di azoto. Girare a gas. Regolazione del gas deve essere impostata a 50-60 PSI su serbatoio regolatore. Pressione turbina su unità dovrebbe leggere da 3,3 a 3,4 bar. Premere il pulsante di prova. Pressione atmosferica leggerà nei 700 e pompe 1 e 2 dovrebbe essere inferiore a 200. L'unità emette un segnale acustico quando il test è completo. Maschera di Don con la protezione degli occhi, ove applicabile, e cap. Lavare le mani e indossano guanti non sterili. Posizionare kit sterili involucri all'interno LFH e aperto per stabilire campo sterile. Collocare una tazza sterile medicina e una vaschetta di plastica sterile con garza sterile accanto al campo stabilito sterile. Versare l'alcool isopropilico sterile nella coppa medicina. Pulire la sonda pachimetria con tampone imbevuto di alcol / pad e sonda posto, punta verso il basso, nella coppa medicina. La punta della sonda deve immergere in alcol isopropilico per 10 minuti. Dopo che la sonda pachimetria è in ammollo per 10 minuti, sciacquare la sonda con acqua sterile da siringa preriempita per rimuovere l'alcol e la sonda posto nella bacinella di plastica. Usando una tecnica asettica, aprire e rilasciare gli elementi sterili (lama, guanti sterili, e corneali camere di visualizzazione) sul campo sterile se non è già parte del pre-made pack. Ottenere tessuto corneale in mezzo di conservazione e posto all'interno LFH (Figura 2). Aprire flaconcino (s) e smaltire il coperchio (s) in un contenitore adeguato a rischio biologico. Gettare i guanti non sterili. Munirsi di guanti sterili. Posizionare preconfezionata bacinella di plastica al lato del campo in cui si trova pachimetro. Collegare linea di infusione rubinetto e posto fine spike della linea di infusione esterna della cappa garantire la linea in modo tale da impedire la linea esterna della cappa dal rientrando nel cappuccio e toccando il campo sterile. Eseguire il trasferimento del tessuto corneale. Delicatamente versare il tessuto e mezzo, in un SIngle movimento, dal flacone esistente in una camera sterile visualizzazione. Essere sicuri di mantenere il lato endoteliale up. Mettere il coperchio sulla camera. Tenere camere contenenti tessuti e dei media sul campo sterile. Estrarre la fiala (s) da LFH. Rimuovere e gettare i guanti sterili. Spike soluzione salina bilanciata (BSS) bottiglia con linea di infusione. Hang bottiglia di sterili BSS circa quattro metri dalla superficie di lavoro. Aprire due paia di guanti sterili e camice sterile con un asciugamano. Eseguire sei minuti scrub chirurgico ed asciugarsi le mani. Indossare camice sterile, allora entrambe le paia di guanti sterili. Aprire le scatole di strumenti e posizionare il contenuto in campo sterile. Dispensare 10-20 cc di soluzione BSS in metallo bacino o di coppa medicina. Riempire la pipetta sterile con soluzione BSS. Collegate rubinetto e la linea di infusione alla porta di infusione della camera anteriore e lavare con BSS modo che una piccola quantità è visibile sulla parte superiore del pistone. Posizione della Camera artificiale LFH iltop di garza. Pistone inferiore ruotando la ghiera di serraggio innesto in senso antiorario. 2. Procedura Utilizzando pinze, afferrare delicatamente cornea da parte di RIM sclerale. Aperto rubinetto per lavare con sistema BSS mentre accuratamente centraggio cornea sulla sommità del pistone con il lato endoteliale basso. Se le bolle sono visibili sotto la cornea, infondendo continuare con BSS e spostando leggermente la cornea per rimuoverli. Interrompere infusione una volta bolle d'aria vengono rimossi. Assicurarsi che la cornea sia centrato sul pistone (Figura 3a). Posizione coperchio della camera anteriore, anello di bloccaggio di base in modo che le linguette della copertura in forma negli spazi aperti sulla base. Bloccare coprire nella base, ruotando in senso orario di copertura 15 °. Sollevare il pistone e serrare completamente (Figura 3b). Con un dito guantato sterile, toccare top della cornea per garantire che vi sia una pressione sufficiente per eseguire la procedura. Controllare pachimetria ponendo la sonda sulla superficie of cornea per ottenere lettura di spessore (Figura 4). La deviazione standard deve essere inferiore a 10. In caso contrario, riprendere la misura. Con la mano guantata sterile che non è stato utilizzato per eseguire la pachimetria, passare il tubo turbina a mano che eseguito pachimetria e avvitare il tubo turbina nell'unità di controllo. Far assistere record di lettura tecnico pachimetria. Rimuovere i guanti contaminati. Utilizzando sterile pennarello, tracciare una linea di 4 millimetri dal limbus verso il centro della cornea (o non segnare se il chirurgo preferisce non di marcatura). Utilizzare pipetta per posizionare cinque gocce di BSS sopra della cornea. Salvo indicazioni specifiche fornite dal chirurgo, la testa di taglio 300 um verranno utilizzati se il pre-taglio misurazione pachimetria è inferiore a 600 um. Se più di 600 um, la testa di taglio 350 um verrà utilizzato. Con filettatura rivolta verso di voi e il numero rivolto verso l'alto, caricare lama nel lato destro della testa microcheratomo, ha prima estremità, evitando il contatto with la lama. Tenendo testa a ogni lato, testa della vite sulla turbina. Stringere la camera artificiale con le dita. Avvitare sul tubo turbina a turbina. Testare l'oscillazione lama premendo il pedale vuoto una volta, sommergendo la testa di taglio in acqua sterile e l'impulso di turbina per 5 secondi. Stringere pistone. Microcheratomo posto sulla base con supporto di montaggio e la posizione a cinque ore. Premere e tenere premuto il pedale della turbina ad oscillare lama (figura 5a). Utilizzo di indice e pollice, premuto a metà strada microcheratomo tra la base e la sommità della turbina. Ruotare il polso per fare un liscio, persino tagliare e in tutta la cornea. Turbine di rilascio del pedale e sollevare microcheratomo di getto unità. Premere pedale vuoto per spegnere vuoto (figura 5b). Indossare un guanto sterile e ricontrollare la lettura pachimetria corneale dopo il tappo viene rimosso mettendo sonda sulla superficie della cornea per ottenere la seconda lettura dello spessore di essereconsapevoli del fatto che il tessuto è molto sottile e facilmente danneggiabili. Rimuovere guanti contaminati. Avere assistenza tecnico in seconda lettura pachimetria record. Utilizzando sterile pennarello, inserire un segno di se richiesto dal chirurgo, il mid-periferica bordo del letto stromale residua nella camera artificiale. Mettete qualche goccia di sterile BSS sul letto stromale residua. Rimuovere il tappo anteriore della cornea microcheratomo (Figura 6) e sostituirlo sulla cornea prima di rimuovere dalla cornea artificiale camera anteriore. Cap dovrebbe essere centrata sulla cornea periferica utilizzando la marcatura di allineare correttamente il tappo, se applicabile. Usa lancia tampone per riposizionare delicatamente il tappo sulla cornea. Usa lancia fresca per assorbire eventuali BSS sotto tappo anteriore. Apri rubinetto, girare camera upside-down ed inferiore del pistone abbastanza lento per evitare la deformazione della cornea. Sblocca base e consentire la pressione dal flusso BSS per spingere la coppa artificiale camera dalla base. Con una pinza, tirare delicatamente unot il bordo corneale alle 9, 12 e ore 3 posizioni per allentare dalla tazza. Una volta sciolto, usare una pinza nella posizione delle ore 12 per rimuovere cornea. Posizionare la cornea nella camera di visualizzazione, il lato endoteliale (Figura 7). Mettere il coperchio sulla camera di visione. Rimuovere guanto sterile. Stringere la visualizzazione coperchio della camera. Eseguire una valutazione post-cut lampada a fessura e la microscopia speculare dei risultati cornea e record. Luogo camera (s) nella apposita sezione del frigorifero. Pacchetto per il trasporto di chirurgo (Figura 8). 3. Risultati rappresentativi La corretta dissezione microcheratomo meccanico dei risultati cornea del donatore liscia, uniforme tessuto lamellare della cornea del donatore. Questo è dimostrato da una tomografia di coerenza ottica (OCT) immagine della cornea in sezione trasversale (Figura 9). La finale del tessuto corneale posteriore deve essere di spessore adeguato, come misurato dalla pachymetry. Negli ultimi 6 mesi presso la Banca Eye Michigan, la media di pre-elaborazione spessore corneale era 558 micron, e post-elaborazione spessore del tessuto corneale posteriore era 158 micron. Ottantasette per cento del microcheratomo-sezionato tessuto del donatore misurata tra 100-200 micron, 10,9%, misurato> 200 micron, e 2,1%, misurato <100 micron. Il tessuto corneale posteriore deve mantenere alta densità delle cellule endoteliali (ECD) per fornire un miglioramento della funzione endoteliale al ricevente il trapianto. Microscopia speculare viene utilizzato per misurare ECD. Negli ultimi 6 mesi, tutto il tessuto corneale considerato ammissibile cheratoplastica endoteliale dal Michigan Eye Bank ha avuto un ECD di> 2200 cellule / mm 2. Il novantanove per cento del tessuto pretagliato DSAEK avuto un post-processing ECD> 2400 cellule / mm 2, e il 19% ha avuto un ECD> 3000 cellule / mm 2. Il cambiamento medio in pre-al post-processing ECD è stato trascurabile al 1,2% (p = 0,0003, abbinato a due code t-test).Le complicanze che possono verificarsi durante la procedura comprendono la perdita di pressione, dissezione asimmetrica, e il rientro del tessuto significativa (con conseguente perdita di cellule endoteliale corneale). Dissezione improprio può anche provocare la perforazione del tessuto. Figura 1. Schema generale di preparazione dei tessuti della cornea per Endothelial Keratoplasty figure 1a a 1e sono cross-section rappresentazioni della preparazione cornea del donatore. Figure 1F 1i sono cross-section rappresentazioni della cornea del ricevente il trapianto durante l'intervento chirurgico DSAEK. La cornea del donatore viene montato su una camera anteriore artificiale e sezionato con la testa microcheratomo. Dopo la dissezione dei tessuti, i due lamelle sono separati, ma la lamella anteriore (cap) è posizionato sul letto è rimasto corneale per il trasporto al chirurgo. Nelsala operatoria, il chirurgo utilizza un trapano per tagliare il tessuto corneale centrale verticalmente attraverso lamella anteriore che posteriore. Dopo il taglio trapano, la cornea periferica viene rimosso dal campo. La lamella posteriore viene delicatamente rimosso dalla lamella anteriore con una spatola. Il donatore lamella posteriore (tessuto DSAEK) sostituisce la parte malata della cornea ricevente (1i). Il paziente ha una cornea malata posteriore da rimuovere. La cornea malata posteriore è segnato con uno strumento intraoculare (reverse Sinsky gancio) in un cerchio di grande diametro. Dopo aver segnato la cornea malata, la membrana posteriore corneale viene rimosso. Il donatore lamella posteriore (tessuto DSAEK) si trova nell'occhio del destinatario. Figura 2. Tessuto corneale in Media. Tessuto corneale è in mezzo di conservazione dopo harvesting dal donatore. Figura 3. Tessuto corneale in camera anteriore artificiale. Tessuto corneale viene montato sul artificiale anteriore anello di base prima di bloccaggio camera o la dissezione dei tessuti. Tessuto corneale è montato su artificiale camera anteriore con anello di bloccaggio base di sigillato sui tessuti. Figura 4. Spessore del tessuto corneale Controllare. Lo spessore corneale viene controllata mediante pachimetria sonda ecografica sulla superficie della cornea. Figura 5. Dissection tessuto corneale. Lama microcheratomo viene posizionato sulla base, con supporto di montaggio e la posizione alle cinque. Microcheratomoviene fatto passare attraverso cornea per rendere la dissezione lamellare. Figura 6. Cap anteriore della cornea dopo la dissezione. La calotta cornea anteriore è libero dopo la dissezione microcheratomo è completa. Figura 7. Dissected cornea in Visualizzazione Sezione. Dopo dissezione è completato, la cornea viene restituito alla camera di osservazione per il trasporto. Figura 8. Cornea in Packaging per il trasporto. La cornea nella camera di osservazione viene poi accuratamente imballati per il trasporto al chirurgo. Figura 9. Aspetto ottobre della cornea. L'ottobre delfinale cornea sezionato (in sezione) mostra che la cornea è divisa in due metà. L'interfaccia è più intensamente riflettente rispetto al tessuto circostante, come indicato dalla freccia.