Preparação de fatias parassagital de Investigação de dorso-ventral Organização do Rodent córtex medial entorrinal
Summary
Nós descrevemos processos de preparação e de gravação electrofisiológico de fatias do cérebro que mantêm o eixo dorso-ventral do córtex entorrinal medial (MEC). Devido codificação neural da localização seguinte uma organização dorsal-ventral dentro do MEC, estes procedimentos facilitar a investigação dos mecanismos celulares importantes para navegação e de memória.
Abstract
Computação no cérebro depende de neurônios que respondem adequadamente às suas entradas sinápticas. Neurônios diferem em seu complemento e distribuição de canais de membrana de íons que determinam como eles respondem a entradas sinápticas. No entanto, a relação entre estas propriedades celulares e função neuronal em comportando animais não é bem compreendida. Uma abordagem para este problema é investigar topograficamente organizadas circuitos neurais em que a posição de mapas individuais neurônios para codificar informações de que ou os cálculos que realizam 1. Experimentos utilizando esta abordagem sugere princípios para ajuste das respostas sinápticas subjacentes codificação da informação em circuitos sensoriais e cognitivos 2,3.
A organização topográfica das representações espaciais ao longo do eixo dorso-ventral medial do córtex entorrinal (MEC) oferece uma oportunidade para estabelecer relações entre os mecanismos celulares e cálculos important para a cognição espacial. Neurônios na camada II do MEC roedor codificar localização utilizando-grade como disparar campos 4-6. Para os neurónios encontrados nas posições dorsal no MEC a distância entre os campos de queima individuais que formam uma grelha é da ordem de 30 cm, enquanto que para os neurónios em posições progressivamente mais ventrais esta distância aumenta para mais de 1 m. Vários estudos têm revelado propriedades celulares de neurónios na camada II do MEC que, tal como o espaçamento entre os campos de grade de queima, também diferem de acordo com a sua posição dorsal-ventral, sugerindo que estas propriedades celulares são importantes para a computação espacial 2,7-10.
Aqui descrevemos procedimentos de preparação e gravação eletrofisiológico de fatias do cérebro que mantêm a extensão dorso-ventral da investigação MEC permitindo a organização topográfica das propriedades biofísicas e anatômico de neurônios do MEC. A posição dorsal-ventral de n identificadoeurons relativos aos marcos anatômicos é difícil estabelecer com precisão com os protocolos que utilizam fatias horizontais do MEC 7,8,11,12, como é difícil estabelecer pontos de referência para a localização dorso-ventral exato da fatia. Os procedimentos aqui descritos permitem uma medição precisa e consistente com a localização de células registados ao longo do eixo dorso-ventral do MEC, bem como a visualização de gradientes moleculares 2,10. Os procedimentos foram desenvolvidos para utilização com ratos adultos (> 28 dias) e foram empregues com sucesso com ratos até 1,5 anos de idade. Com os ajustes que poderiam ser usados com ratos mais jovens ou outras espécies de roedores. Um sistema padronizado de preparação e medição ajudará investigação sistemática das propriedades celulares e microcircuito desta área.
Protocol
Discussion
Para facilitar a investigação das propriedades de circuito MEC que seguem uma organização dorsal-ventral temos descrito aqui em detalhe um procedimento para a produção de uma preparação fatia parasagital que preserva a extensão dorso-ventral do MEC.
As etapas críticas
Remover o cérebro do animal. Tome cuidado especial para evitar a exercer pressão sobre o cérebro. Isto é mais importante do que a remoção rápida do cérebro.
<p cl…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Estamos agradecer o seguinte para o seu apoio: Scholarship Commonwealth Comissão Reino Unido financiamento (HP), EPSRC (HP), BBSRC (NMF) e da União Europeia Acções Marie Curie (MFN).
Materials
| Cutting ACSF(mM) | Standard ACSF(mM) | Internal solution (mM) | CASNumber | Supplier Catalogue Number | |
| NaCl | 86 | 124 | 7647-14-5 | Sigma S9888 | |
| NaH2PO4 | 1.2 | 1.2 | 13472-35-0 | Sigma 71505 | |
| KCl | 2.5 | 2.5 | 10 | 7447-40-7 | Sigma P3911 |
| NaHCO3 | 25 | 25 | 144-55-8 | Fischer S/4240 | |
| Glucose | 25 | 20 | 50-99-7 | Sigma G5767 | |
| Sucrose | 75 | 57-50-1 | Sigma S5016 | ||
| CaCl2 | 0.5 | 2 | 10043-52-4 | VWR 190464K | |
| MgCl2 | 7 | 1 | 2 | 7786-30-3 | Sigma 63020 |
| K Gluconate | 130 | 299-27-4 | Sigma G4500 | ||
| HEPES | 10 | 7365-45-9 | Sigma H3375 | ||
| EGTA | 0.1 | 67-42-5 | Sigma E4378 | ||
| Na2ATP | 2 | 34369-07-8 | Sigma A7699 | ||
| Na2GTP | 0.3 | 36051-31-7 | Sigma G8877 | ||
| NaPhospho-Creatine | 10 | 19333-65-4 | Sigma P7936 | ||
| Biocytin (optional) | 2.7 | 576-19-2 | Sigma B4261 |
Table 1. Cutting ACSF, standard ACSF and K-Gluconate internal solution recipes.
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