Прогрессивная отношением Отвечая на приемлемой высоким содержанием жиров и высоким содержанием сахара питания в мыши

* Наиболее важные шаги. 1. Оборудование и программное обеспечение Обучение и тестирование проводится в мышь оперантного камеры оснащены двумя ультра-легкий, выдвижной рычаги 1 расположены по обе стороны от пищи сосуд (см. Таблицу 1). Световой раздражитель находится выше каждый рычаг и есть дом светом в верхней части клетки. Дозатор пеллет находится за пределами камеры. Каждая камера размещается внутри звукового ослабления кабина с вентиляционными вентилятора. Камеры подключены к ПК с программным обеспечением MedPC IV с помощью "Smart Control" интерфейс кабинета. Примечание: При сверхлегкие рычаги не доступны, рекомендуется носом тыкают быть использован в качестве ответа на оперантное мыши исследований. Однако, как варианты мы предлагаем выбор из сверхлегких рычаги, как более надежные меры мотивации, учитывая, что нос совать ответов может бэлектронной вызвано поисковых нюхать. MedPC программ, используемых для запуска оперантного задачи записаны в Medstate обозначение код, который пользователь может узнать с помощью руководство по программированию при условии. Программирование обеспечивает гибкость для пользователя, чтобы изменить существующий код или создать уникальные экспериментальные параметры. Некоторые коды могут быть получены бесплатно от Med Associates "Medstate обозначения репозитория" http://www.mednr.com . Дополнительные коды можно приобрести Med Associates. 2. Acclimation мыши и продовольствия ограничения По прибытии мышей группы размещаются по крайней мере 10 дней, чтобы акклиматизироваться к обратному 12 ч свет / темнота цикл и обеспечивается вволю доступ к стандартным кормом и водой. В нашем случае мы используем взрослых мышей C57BL / 6 приобрести Charles River (Санкт-постоянная, QC). Все манипуляции мышью и поведенческие эксперименты проводятся в темное время цикла. Все пропроцедур, связанных с использованием животных были одобрены Комитетом по уходу животных CRCHUM. Мыши в дальнейшем однократно размещалась и пищевых ограничений (70% от их ежедневного рациона питания), пока они не достигают 90-95% свободного кормления массы тела для того, чтобы облегчить приобретение рычаг-пресс отвечать. Мыши были предоставлены их суточной нормы пищи в клетке дома после окончания сессии. Дойдя до 5-10% потери веса, ежедневная пища выделено регулируется для стабилизации веса нижней части тела в течение оставшегося периода обучения. Как только мыши достигли приобретение критериев (см. ниже), все они помещены обратно на питание график без ограничений. Мыши вернуть утраченные массы тела в 3-4 дней. Мыши обрабатываются в испытательной камере в течение 3 дней до первой тренировки. За день до начала тренировок 10-15 с высоким содержанием жиров и высоким содержанием сахара (HFHS) гранулы помещают в клетку домой, чтобы предотвратить возможное влияние пищи на неофобией оперантного performanсе. Мы используем 20 мг HFHS, пыли, гранул точность питания (14 мг также доступны), содержащий 48,9% ккал в виде жира (Bio Serv, Frenchtown, NJ). 3. Оперантное обучение Мыши изначально обучены нажимать на рычаг на фиксированный коэффициент (FR) -1 укрепление график которой одним нажатием рычага вызывает поставки шарик пищи для сосуда. Только один рычаг обозначен как "активный" (запуск доставки продовольствия вознаграждение) и выделение правого и левого рычага уравновешен между мышами. Важно добавить, по крайней мере 5 секунд тайм-аута (ТО) с графиком FR1 (FR1/TO-5), в ходе которого дополнительный рычаг, нажатие не приведет к доставке пищи гранул. Это период дает время для мыши потребляют пищу гранулы, однако больше времени выходы могут быть использованы, если экспериментатор считает это необходимым для их мышиной модели. Каждая сессия FR обучение длится 1 час, когда 50 гранулы были доставлены. * Приобретение критериям: </ STRONG> Критерии, используемые для определения приобретения пищевых поддерживается оперантного ответ включает в себя: (1), минимальное количество активных ответных мер и награды получил, (2) мера различия между активными и неактивными рычаги, и (3) между-сессии стабильность работы. Мыши выставке дискриминации ≥ 3:1 активной по сравнению с неактивными рычаг и получения ≥ 20 наград за одну сессию в течение трех последовательных сессиях рассматриваются достижения приобретение критериев 10. Мы заметили, что большинство (~ 75%) C57BL6 мышей потребует около 7-10 дней обучения для достижения приобретение критериям. Мыши, которые не доходят до приобретения критерии к этому времени пройти курс подготовки для дополнительных 5-7 дней. Мы исключаем мышей от тестирования (~ 5% случаев), когда нет прогресса, дополнительный 5-й день обучения. Важно помнить, что нарушение оперантного приобретение может быть результатом некоторых фармакологических и генетических вмешательств и поэтому должны быть документированы. </ LI> После трех последовательных сессиях получения ≥ 20 гранул, график увеличен до FR5/TO-5 секунд, в которых 5 активных прессы рычаг вызвать поставки пищевых гранул. Обучение по расписанию FR5 длится три дня. * Мышей затем стажировался в прогрессивном отношения (PR) график подкрепления. График ответ отношения во время тестирования PR может быть рассчитана в соответствии с Ричардсоном и Робертса (1996) 11 по следующей формуле (с округлением до ближайшего целого числа): = [5 е (R * 0,2)] – 5 где R равна количеству пищи награды уже заработал плюс 1 (то есть, следующий подкрепления). Таким образом, количество ответов необходимо, чтобы заработать награду пищи следить за тем: 1, 2, 4, 6, 9, 12, 15, 20, 25, 32, 40, 50, 62, 77, 95 и так далее. Окончательное соотношение завершено является останова. На заседании PR длится максимум 1 час. Невыполнение нажмите на рычаг в любой период 10 мин приводит к прекращению работы сессии. PerforОсвоив по расписанию PR арматуры считается стабильным, если число наград, полученных в 1 час отклоняется сессии ≤ 10% в течение 3 дней подряд. 4. Прогрессивная тестирование и проверка соотношения Для проверки пищевых поддерживается оперантного ответ в задаче PR, можно оценить останова ответа следующие манипуляции известно модулировать питание вознаграждение. Относительно простой тест, чтобы проводить это лишение пищи, которая увеличит мотивационные состояния мыши на продукты питания и тем самым увеличить останова. Мыши сначала должны быть испытаны в задачи PR в период кормления объявления без ограничений, пока стабильна, базовые характеристики достигаются. На следующий день после последнего "базового" день пищи удаляются из дома клетки мышей и затем протестирован в задачи PR 24 часов после начала поста. Мы также исследовали ли периферической администрации анорексией гормона лептина будет иметь противоположный эффект прерыванияпороги. Лептин (AF Parlow, Национальный гормонов и пептидов программы, NIDDK) растворяли в стерильном PBS. PR-тестирование было проведено после введения IP PBS в течение одного дня, а затем после инъекции лептина (5 мг / кг) на следующий день. Лептин был введен один час до тестирования PR. Прерывания сравнивали с помощью парного Т-теста (GraphPad Prism). 5. Представитель Результаты При тестировании способности лишение пищи, чтобы модулировать останова отвечать на график PR подкрепления, мы ожидаем значительного увеличения точек останова, как показано на рисунке 1. В этом эксперименте 24 ч период лишения пищи производится ~ 3,6-кратное увеличение точек останова по сравнению с результатами, полученными в свободном кормлении исходного состояния тем самым предполагая, что лишение пищи увеличивает полезный эффект пищи. В отличие от периферических администрации анорексией гормона лептина (5 мг / кг, IP) за один час до тИнтересный должно уменьшаться останова ответ, как показано на рисунке 2. Рисунок 1. Пост увеличивает полезный эффект пищи. 24 ч быстрой значительно увеличили точки останова на прогрессивные отношения (PR) график подкрепления у мышей (п = 4). Средняя ± стандартная ошибка; * р <0,05. Рисунок 2. Лептина уменьшается питание награды у мышей. Периферийные лептина (5 мг / кг) снизилась PR пороги останова ответ у мышей (п = 4). Средняя ± стандартная ошибка; * р <0,05.