プログレッシブ比マウスの嗜好性は高脂肪·高砂糖食の応答

*ほとんどの重要なステップ。 1。機器とソフトウェアトレーニングとテストは、（ 表1参照）、食品容器の両側に位置する2つの超軽量、引き込みレバー1を搭載したマウスのオペラントチャンバーで行われる。刺激光は各レバーの上にあり、ケージの上部にある家の光があります。ペレットディスペンサは、チャンバの外側に位置しています。各チャンバは、換気扇の音が減衰キュービクル内に収納されています。チェンバースは、 "スマート·コントロール"インターフェイスを経由して内閣MedPC IVソフトウェアを搭載したPCのコンピュータに接続されています。 注：超軽量レバーが利用できない場合、それが鼻突く、マウス研究のためのオペラント応答として使用することをお勧めします。ただし、利用可能な両方のオプションで我々は、鼻突く応答ができるB与えられた動機の方が信頼性の尺度としての超軽量レバーの選択を示唆しているeは、探索スニッフィングによって引き起こされる。 オペラントのタスクを実行するために使用されるMedPCプログラムは、ユーザーが提供するプログラミングマニュアルの助けを借りて学ぶことができますMedstate表記のコードで書かれています。プログラミングは、既存のコードを変更したり、ユニークな実験パラメータを生成するユーザのための柔軟性を提供します。特定のコードは、地中海アソシエイツ"Medstate表記リポジトリ"から無料で入手できますhttp://www.mednr.com 。追加のコードは、地中海Associatesから購入することができます。 2。マウスの馴化と食事制限到着マウスがある時には逆に12時間の明/暗サイクルに慣れるために、少なくとも10日間グループに収容し、標準餌と水を自由に摂取へのアクセスを備えている。我々の場合には、チャールズ·リバー（セント定数、QC）から購入した大人のC57BL / 6マウスを使用しています。すべてのマウス操作や行動実験は明暗サイクルの間に実行されています。すべてのプロ動物の使用を含むceduresはCRCHUMアニマル·ケア委員会によって承認された。 彼らはレバーを押して応答するの買収を容易にするために、90から95パーセントの自由摂食、体重に到達するまで、マウスは、その後単独で、収容されていると食べ物が制限さ（日常の食物摂取量の70％）。マウスは、セッションの終了後、ホームケージ内の食品の日常クォータを提供されていました。 5〜10％の重量損失に達すると、割り当てられた毎日の食事は、訓練期間の残りのためのより低い体重を安定させるために調整されます。一度マウス（下記参照）彼らは不断給餌スケジュールに戻され、取得基準を達成している。マウスは約3-4日で失われた体重を取り戻す。 マウスは、最初のトレーニングセッションに先立って3日間連続して試験室で処理されます。 10-15（HFHS）高脂肪、高糖ペレットはオペラントperformanで食品新しいもの嫌いの潜在的な影響を防ぐために、ホームケージに配置されているトレーニングの開始前に日CE。我々は、20 mgのHFHS、（バイオServの、フレンチ、NJ）脂肪として48.9％キロカロリーを含む埃、精密食品ペレットを（も可能14 mg）を使用しています。 3。オペラントトレーニングマウスは、最初に単一のレバーを押してコンセントに食料ペレットの配信を引き出すことにより固定比率（FR）-1強化スケジュールでレバーを押すように訓練されています。唯一のレバーが "アクティブ"として指定されている（食品の報酬の配信をトリガ）および右と左レバーの割り当ては、マウスの間で相殺されています。追加のレバー押しは食べ物ペレットの配信にはなりませんその間、それは、FR1スケジュール（FR1/TO-5）に少なくとも5秒のタイムアウト（TO）を追加することが重要です。これまでの期間は、実験者はそれが彼らのマウスモデルのために必要であると感じる場合は、食品ペレットを消費するためにマウスのための時間は、しかしより長いタイムアウトを使用することができます。各FRのトレーニングセッションは1時間以上が50ペレットが配信されています続きます。 *習得条件：</ strong>の応答食品維持オペラントの買収を決定するために使用される基準が含まれています：（1）アクティブな応答と報酬の最小数を獲得し、（2）アクティブおよび非アクティブレバーの間に差別の測定、（3）の間でセッションパフォーマンスの安定性。マウスアクティブ対アクティブでないレバーのために≥3:1の差別を展示し、3つの連続したセッションで、セッションごと≥20の報酬を得ることは、取得基準10を達成するために考えられている。我々は、C57BL6マウスの大半（〜75％）は研修の約7〜10日、買収基準を達成するために必要なことを観察した。この時点で買収の基準に達していないマウスは、追加の5〜7日のためにさらなる訓練を受ける。余分な第五研修日までには進展がない場合我々はテスト（例〜5％）からマウスを除外します。それは障害オペラント買収は、特定の薬理学的および遺伝的介入の結果かもしれないので、文書化されるべきであることに留意することが重要です。</ LI> ≥20ペレットを得るための3つの連続した​​セッションに続いて、スケジュールは5つのアクティブなレバーを押すとは、食品ペレットの配信をトリガーするFR5/TO-5秒に増加されています。 FR5スケジュ​​ールの訓練は3日間続きます。 *マウスは、補強の進行比（PR）スケジュールで訓練を受けています。 PRのテスト中に応答比のスケジュールは以下の式を（最も近い整数に丸め）を使用して、リチャードソンとロバーツ（1996）11％として計算することができます。 = [5、E（R * 0.2）] – 5 Rは、食品がすでに獲得した報酬プラス1の数（すなわち、次の補強）に等しいです。 1、2、4、6、9、12、15、20、25、32、40、50、62、77、95のように：このように、食品の報酬を得るために必要な応答の数の順序に従ってください。完了し、最終的な比率は、ブレークポイントです。 PRセッションは1時間の最大値を持続します。セッションの終了の任意の10分の期間の結果でレバーを押しに失敗しました。性能報酬の数は少なくとも3日間連続して≤10％で1時間のセッションの逸脱で稼いだ時に補強のPRスケジュールの性能が安定したと見なされます。 4。プログレッシブ比のテストと検証 PRタスクの応答食品維持オペラントを検証するためには、食品の報酬を調節することが知られている、次の操作を応答するブレークポイントを評価することができます。遂行するため、比較的簡単にテストするには、食糧のためのマウスの動機状態を向上させ、それによってブレークポイントを増加させる食品の剥奪である。安定した、ベースラインパフォーマンスが達成されるまで、マウスは、最初の不断給餌期間中のPRタスクでテストする必要があります。最後の "ベースライン"の日食品の翌日は、ホームケージから削除され、マウスは、24時間高速の開始後にPRタスクでテストされています。 また、レプチン食欲抑制ホルモンの末梢投与がブレークポイントに逆効果を持っているかどうかを調べしきい値。 （AFパーロー、ナショナルホルモンおよびペプチドプログラム、NIDDK）レプチンは、滅菌したPBSに溶解した。 PRテストは一日にPBSのIP注入後、その後レプチン（5 mg / kg）を次の日の注射後に実施した。レプチンは、PRのテストに1時間前に注入した。ブレークポイントは、対応のあるt-検定（グラフパッドプリズム）を使用して比較した。 5。代表的な結果補強のPRスケジュールに基づいて応答ブレークポイントを調節する食品の欠乏の能力をテストするとき、我々は図1に示すように大幅にブレークポイントを増やすことを期待しています。この実験では絶食の24時間期間は、それによって食料の欠乏は、食品の報酬効果を増大させることを示唆している自由摂食のベースラインの状態で得られたものと比較して、ブレークポイントで〜3.6倍の増加を生じた。 tに食欲抑制ホルモンのコントラストが、末梢投与レプチン（5 mg / kgで、IP）1時間前estingは、 図2に示すように応答してブレークポイントを減らすようにしてください。 図1。断食は、食品の報酬効果を向上させます。 24時間は、高速大幅マウス（n = 4）の補強の進行比（PR）のスケジュールでブレークポイントを増加した。平均値±SEM、* P <0.05。 図2。レプチンは、マウスの食品の報酬を減少させます。末梢レプチン投与（5 mg / kg）をマウス（n = 4）でPRブレークポイントの応答しきい値を減少させた。平均値±SEM、* P <0.05。