Kronik Yetişkin doğmuş Koku Nöronlar Seçici Viral İletimi In vivo Optogenetic Uyarım
Summary
Koku ampul Yetişkin doğumlu nöronlar optogenetically Channelrhodopsin2-implant minyatür rostral göçmen akışı ve kronik photostimulation lentiviral enjeksiyon ifade LED kullanılarak kontrol edilebilir.
Abstract
Yerel internöronlar 1-3 yetişkin kemirgenler koku ampul sürekli yeniden üretilir. Bu süreçte, nöral kök hücreler lateral ventrikül duvarları boyunca birkaç milimetre koku ampul içine ulaşmak ve birleştirmek için rostral göçmen akışı (RMS) için göç neuroblasts doğuran, yetişkin nöron denir. Farklı adımlar ve koku alma devreleri önceden var olan yetişkin doğan nöron entegrasyon etkisini incelemek için, nöronların bu özel nüfus aktivitesini seçici etiket ve işlemek için gereklidir. Optogenetic teknolojilerinin en son gelişme, tam çevre nöronlar 4,5 etkilemeden nöronların bu özel kohort aktive etmek için ışık kullanma fırsatı sunuyor . Burada koku ampul ulaşmadan RMS neuroblasts zamansal olarak sınırlı bir kohort viral ifade Channelrhodopsin2 prosedürleri bir dizi (ChR2)-YFP mevcut ve ne yetişkin doğumlu olmakurons. Buna ek olarak, kronik ChR2-ifade nöronlar in vivo uyarılması için LED minyatür bir implant ve kalibre etmek için nasıl göstermektedir.
Protocol
Discussion
Optogenetic araçları son zamanlarda koku sistemi yetişkin doğan nöronlar da dahil olmak üzere seçici nöronal nüfus üzerinde kontrolü sıkılaştırdı. Burada yetişkin doğumlu nöronlar belirli bir nüfus ChR2 YFP ifade lentiviral vektör stereotaksik enjeksiyon nasıl gerçekleştirileceği açıklanmaktadır. Enjeksiyon sonrası dönemde dikkatli bir şekilde izleyerek, bir kohort görece homojen bir yaş ile yetişkin doğumlu nöronların aktivitesini analiz etmek ve işlemek için edebiliyoruz.
<p …Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, hayat sigortası şirketi "Novalis-Taitbout" Ecole des Nörobilim de Paris (AKP), Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-NEUR-004", "ERA-NET NÖRON" çerçevesinde tarafından desteklenen FP7 programı, Avrupa Komisyonu tarafından "Vakfı pour la Recherche medicale" Letten Vakfı ve Pasteur Vakfı.
Materials
| Material | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 |
| Xylazine | Bayer Health Care | Rompum 0.2% |
| Pipette Puller | Sutter | P-97 |
| Glass Capillaries (3.5″) | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
| Nanoject II Microinjector | Drummond Scientific | 3-000-204 |
| High speed surgical drill | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 |
| LED CMS blue 4.6 W | OSRAM | LBW5SN |
| Female electrical connector (2.54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z |
| Current controller for LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 |
| Pulse generator | AMPI | Master-8 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM100 |
| Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 454 |
| Polycarboxylate cement (first layer cement) | Septodont | Selfast (#0068Q) |
| Methacrylate cement (second layer cement) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad – Liquid (#339292) Unifast Trad – Powder (#339114) |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl |
References
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ. J. Neurosci. 28, 11089-11102 (2008).
- Mouret, A. Learning and survival of newly generated neurons: when time matters. J. Neurosci. 28, 11511-11516 (2008).
- Bardy, C. How, when, and where new inhibitory neurons release neurotransmitters in the adult olfactory bulb. J. Neurosci. 30, 17023-17034 (2010).
- Haubensak, W. Genetic dissection of an amygdala microcircuit that gates conditioned fear. Nature. 468, 270-276 (2010).
- Zhang, F. Multimodal fast optical interrogation of neural circuitry. Nature. 446, 633-639 (2007).
- Wang, X., McManus, M. Lentivirus Production. J. Vis. Exp. (32), e1499-e1499 (2009).
- Cardin, J. A. Targeted optogenetic stimulation and recording of neurons in vivo using cell-type-specific expression of Channelrhodopsin-2. Nature protocols. 5, 247-254 (2010).
- Huber, D. Sparse optical microstimulation in barrel cortex drives learned behaviour in freely moving mice. Nature. 451, 61-64 (2010).
- Arenkiel, B. R. In vivo light-induced activation of neural circuitry in transgenic mice expressing channelrhodopsin-2. Neuron. 54, 205-218 .
- Albeanu, D. F. LED arrays as cost effective and efficient light sources for widefield microscopy. PLoS ONE. 3, 2146-2146 (2008).
- Slotnick, B., Bodyak, N. Odor Discrimination and Odor Quality Perception in Rats with Disruption of Connections between the Olfactory Epithelium and Olfactory Bulbs. J. Neurosci. 22, 4205-4216 (2002).
- Gradinaru, V. Molecular and cellular approaches for diversifying and extending optogenetics. Cell. 141, 154-165 (2010).
- Valley, M., Wagner, S., Gallarda, B. W., Lledo, P. Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons. J. Vis. Exp. (57), e3379-e3379 (2011).
