ניתוח Morphometric סעיפים רשתית
Summary
סרט זה מדגים שלושה סוגים של ניתוחים morphometric של הרשתית, אשר כוללים מדידת עובי השכבה הפנימית גרעינית, לכימות את מספר התאים הגנגליון ברשתית (RGCs) ומדידה של גדלים של RGCs. הטכניקה יכולה להציע פלטפורמה פשוטה אך מדעי ניתוחים morphometric.
Abstract
ניתוחים Morphometric סעיפים רשתית שימשו לבדיקת מחלות רשתית. לדוגמאות, תאים עצביים אבדו באופן משמעותי את שכבת התאים ברשתית גנגליון (RGCL) במודלים של עכברים עם N-methyl-D-aspartate (NMDA) הנגרמת excitotoxicity 1, פגיעה ברשתית איסכמיה reperfusion 2 ו 3 גלאוקומה. צמצום שכבת plexiform INL ופנימיים (IPL) עובי התהפכו עם טיפול citicoline בעיניים של חולדות נתון excitotoxicity חומצה בתיווך kainic גלוטמט 4. שינוי של צפיפות RGC וגדלים סומה נצפו עם טיפולים תרופתיים שונים בעיניים עם לחץ תוך עיני גבוה 3,5,6. לכן, לאחר שיטות אובייקטיביות של ניתוח ברשתית morphometries עשוי להיות בעל חשיבות רבה בהערכת מחלות רשתית ואת האפקטיביות של אסטרטגיות טיפוליות.
מבנה הרשתית היא מרובת שכבות סוגים שונים של נוירונים exiרחוב ברשתית. הפרמטרים morphometric של הרשתית כגון מספר תאים, גודל התא ועובי השכבות השונות הם מורכבים יותר מאשר מערכת תרבית תאים. מוקדם יותר, פרמטרים אלה ניתן לאתר באמצעות הדמיה אחרות תוכנה מסחרית. הערכים הם בדרך כלל בעל ערך יחסית, ושינוי הערך המדויק ייתכן שיהיה צורך בחישוב מדויק יותר. כמו כן, מעקב של גודל התא ומורפולוגיה לא יכול להיות מדויק ורגיש מספיק לניתוח סטטיסטי, במיוחד במודל גלאוקומה כרונית. המדידות בשימוש בפרוטוקול זה בתנאי דרך מדויקת יותר וקלה. אורך מוחלט של הקו ואת גודל התא ניתן לדווח ישירות קל להעתיק את הקבצים האחרים. לדוגמה, אנו לייחס את השוליים של גרעינים ביותר פנימית וחיצונית של INL ויצרו קו ואז באמצעות התוכנה לצייר זווית של 90 מעלות כדי למדוד את עובי. אמנם ללא עזרה של תוכנות, קו אלכסוני אולי ואת המשתנה של עובי הרשתית רשאילא יהיה הדיר בקרב צופים בודדים. בנוסף, מספר וצפיפות RGCs ניתן לכמת. פרוטוקול זה בהצלחה מקטין משונות quantitating התכונות של הרשתית, מעלה את הרגישות באיתור שינויים מינימליים.
סרט זה יהיה להדגים שלושה סוגים של ניתוחים morphometric של חלקים ברשתית. הם כוללים מדידת עובי INL, לכמת את מספר RGCs ומדידה של גדלים של RGCs בערך מוחלט. שלושת הניתוחים מבוצעים עם החוקר סטריאו (MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc). הטכניקה יכולה להציע פלטפורמה פשוטה אך מדעי ניתוחים morphometric.
Protocol
Discussion
1. כיצד לקבל מדידה מדויקת יותר עובי?
ניתן להגדיל את התמונה על ידי לחיצה על "קרב" על והשאיר לחץ בחלון העקיבה. הגבול INL ניתן לראות בבירור. אם קצה של הקו לא על הגבול החיצוני של INL, אנו יכולים להתאים את קו תחת מצב עריכה. לאחר בחירת קו הנ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
העבודה על המחקר עין במעבדה זו נתמכת על ידי הקרן האמריקאית לבריאות עוזר, אזליה (1972) קרן צמיתה, קרן HKU פרוייקט קטן (20097176185).
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
References
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)–Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).
- Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase. Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).
- Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats. Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).
- Hernandez, M., Urcola, J. H. Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments. Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
