موازية لوحة الدائرة التدفق المستمر وحلبة لتقييم تدفق الخلايا الاصلية تحت تدفق رقائقي غشائي إجهاد القص
Summary
نحن تصف طريقة لخلايا ملتصقة تخضع لتدفق الصفحي إجهاد القص في دائرة التدفق المستمر العقيمة. التصاق الخلايا "، ويمكن من خلال دراسة مورفولوجية غرفة شفافة ، والعينات التي تم الحصول عليها من الدوائر لتحليل المستقلب والخلايا التي تحصد بعد التعرض لتجارب القص في المستقبل أو الثقافة.
Abstract
الهدف العام لهذا الأسلوب هو لوصف تقنية لموضوع الخلايا تمسكا ظروف التدفق الصفحي وتقييم استجابتها للالقص السوائل القابلة للقياس الكمي كذلك تشدد 1.
لدينا تصميم غرفة تدفق وتدفق الدائرة (الشكل 1) يحتوي على منطقة العرض الشفافة التي يمكن اختبار خلية التصاق والتصوير من مورفولوجية الخلية مباشرة قبل تدفق (الشكل رقم 11A ، B) ، في نقاط زمنية مختلفة خلال التدفق (الشكل رقم 11C) وبعد تدفق (الشكل 11D). وتتجلى هذه التجارب مع دم الحبل السري الإنسان المستمدة من الخلايا الاصلية البطانية (EPCs) والخنازير EPCs 2،3.
هذا الأسلوب ينطبق أيضا على غيرها من أنواع الخلايا الملتصقة ، مثل خلايا العضلات الملساء (SMCs) أو الليفية.
يتم تعقيمها بسهولة الغرفة وجميع أجزاء الدائرة مع التعقيم بالبخار. على النقيض من غيرهاالغرف ، يمكن استرداد مثل غرف ميكروفلويديك ، فإن أعدادا كبيرة من الخلايا (> 1000000 اعتمادا على حجم الخلية) بعد التجربة تدفق تحت ظروف معقمة للثقافة الخلية أو تجارب أخرى ، مثل الحمض النووي الريبي أو استخراج ، أو المناعية (الشكل 11E) ، أو المجهر الإلكتروني 5. يمكن تعديل إجهاد القص من خلال تغيير معدل تدفق سائل الإرواء ، واللزوجة السوائل ، أو ارتفاع وعرض القناة. يمكن لهذا الأخير خفض حجم السائل أو احتياجات الخلية مع ضمان الحفاظ على تدفق ذات بعد واحد. ليس من الضروري لقياس ارتفاع الغرفة بين التجارب ، منذ ذروة الغرفة لا تعتمد على استخدام حشوات ، مما يزيد كثيرا من سهولة تجارب متعددة. وعلاوة على ذلك ، وتصميم الدوائر تمكن بسهولة جمع عينات سائل الإرواء و / أو التحليل الكمي للالأيضات يفرز من قبل خلايا السائل تحت التعرض للإجهاد القص ، مثل أكسيد النيتريك (الشكل 12) 6 </suع>.
Protocol
Discussion
حلبة لدينا تدفق وتدفق الغرفة تسمح لنا موضوع الخلايا الملتصقة ، EPCs على سبيل المثال ، إلى تعريف اجهادات القص السوائل. منذ أعلى وأسفل حجرة ويمكن تقييم شفافة والتصاق الخلايا وإما التشكل في الوقت الحقيقي ، من خلال الغرفة نفسها ، أو بعد تجربة التدفق والتفكيك للغرفة التدفق. عند هذه النقطة ، يمكن حصاد الخلايا تحت ظروف معقمة ، وإما إعادة مطلي ، أو تستخدم لجمع عينات من الحمض النووي الريبي أو ، الخ ، لمزيد من التحليل.
من أجل تحقيق التدفق الصفحي ، يجب أن يكون تصميم الغرفة بحيث يكون استيفاء عدة شروط.
أولا ، يجب أن يكون التدفق الصفحي ، والتي يمكن التحقق منها عن طريق حساب في عدد رينولدز (ري) ، والتي هي نسبة القوى العاملة بالقصور الذاتي لقوى اللزوجة. (إذا تسود قوى اللزوجة ، وإعادة صغيرة والتدفق الصفحي أو "مكتمل النمو" — عادة ل2300 <رع.اذا وجدت قوات بالقصور الذاتي تسود ، وتدفق يصبح أكثر وأكثر عشوائية حتى يتم المضطرب ، كما هو الحال بالنسبة ل 4000> رع.) ويمكننا حساب الدولة وفقا للمعادلة 3 8 ،
حيث ρ هي كثافة السائل ، Q هي معدل التدفق ، μ هي اللزوجة ، ث ، ح والعرض والارتفاع للغرفة ، على التوالي ، ودال ح هو القطر الهيدروليكي ، محددة وفقا لمعادلة 4 8 ،
عدد رينولدز الغرف لدينا تدفق الثلاثة ، مع ارتفاعات تتراوح بين 166-267 ميكرون ، ومجموعة 13،9-34،6 في معدلات تدفق جalculated للحصول على إجهاد القص من 15 dynes / سم 2. في معدلات التدفق المحسوب لإجهاد القص من 100 dynes / سم 2 ، وتراوح عدد رينولدز الغرف 90،4-234. كل هذه الأرقام رينولدز هي أقل بكثير من 2300 وتلبية لمعيار تدفق الصفحي.
الثانية ، للحقل السرعة وإجهاد القص لتكون مستقلة عن المسافة على طول قناة تدفق (أي تطويره بالكامل) ، والمسافة من مدخل السائل إلى الشريحة يجب أن تكون أطول من طول المدخل ، L ه. ويمكن استيفاء هذا عن طريق حساب طول المدخل ، وفقا لمعادلة 5 9.
للحصول على القيم المذكورة أعلاه ، وطول المدخل نطاقات 0،01-0،25 سم.
الثالثة ، من أجل ضمان سرعة وإجهاد القص في الاتجاه الجانبي لا تختلفبشكل كبير من القيمة لتدفق قناة واحدة الأبعاد (Δ فتاه / 2L) ، يجب أن نسبة ح / ث تكون أقل بكثير من 1. لإجهاد متوسط جدار القص في ظل ظروف تدفق ثنائي الأبعاد لتكون 95 ٪ من الجدار تحت إجهاد القص أحادية البعد التدفق ، ويجب ح / ث مساوية إلى 0.10 ، وبالنسبة للإجهاد القص الجدار تحت ظروف تدفق ثنائي الأبعاد إلى أن 97.5 ٪ من إجهاد القص الجدار تحت أحد الأبعاد التدفق ، يجب ح / ث مساوية 0.05. مع أبعاد الغرفة المصممة لدينا تدفق 1.7 سم في العرض و 166-267 ميكرون في الطول ، ويتم استيفاء هذه المعايير.
فإن الضغط تختلف فقط في اتجاه تدفق إذا لم تكن هناك تدرجات الضغط الجانبي عند المدخل. ويمكن تقييم ذلك باستخدام الأصباغ أو جزيئات في مسار التدفق. مزيد من التجارب لتدفق مستمر ، يتم إدراج يستمتع نبضة في الدائرة التدفق. ويستمتع نبض تحيط بها أكثر من النبضتسبب atility بواسطة المضخة الدوارة في الدائرة ، ويتيح لنا الاقتراب من افتراض وجود تدفق مستمر. من المذكرة ، يجب أن يستمتع نبض المستخدمة تكون متوافقة مع المضخة والأنابيب المستخدمة في الدوائر ، بحيث يمكن القضاء على نحو فعال في تدفق نبضات الإخراج للترددات محددة من المضخة الدوارة. في مظاهرة لدينا L / S Masterflex نبض يستمتع يحقق التدفق الصفحي عند استخدامها على خط التصريف مع أي سلسلة Masterflex مضخة L / S (0-600 اللفات في الدقيقة) وأنا / P أنابيب 26. لتدفق نابض ، يمكن استخدام مضخة للبرمجة لتوليد الموجات المختلفة.
لتدفق نابض ، يمكن استخدام مضخة للبرمجة لتوليد الموجات المختلفة.
ويمكن بسهولة علاوة على ذلك ، تم تصميم هذه الدائرة أن عينات من سائل الإرواء سيتم جمعها في نقطة زمنية مختلفة دون المخاطرة تلوث الخلايا أو متوسطة التدفق. في مثالنا ، وتركيز NO 2 — كان يقاس مع لمعان كيميائيan شركة Ionics / سيفرز محلل أوكسيد النتريك (NOA 280 ، آلات سيفرز ، بولدر ، كولورادو) كما هو موضح سابقا 10. كان اختزال المستخدمة لتحليل النتريت يوديد البوتاسيوم في حامض الخليك (حامض الخليك 14.5 م و 0.05 م KI) ، والذي لديه القدرة على تحويل النتريت خفض إلى NO لكنها غير كافية للحد من أي ارتفاع أكاسيد النيتروجين مثل النترات وبالتالي نسبيا محددة للنتريت. تم احتساب النتريت إجمالي الكمية التي أنتجها بوصفها نتاجا لتركيز المنتجة وإجمالي حجم الدائرة لحين تعديل حجم بينما خسر أخذ عينات 6.
الخطوات التالية هي الحاسمة للتنفيذ الناجح من التجارب التدفق :
- فمن المستحسن تجنب تشكيل فقاعة خلال تدفق إنشاء ، منذ فقاعات لديها القدرة على تمزيق الخلايا من سطحها. ويمكن تجنب ذلك عن طريق أخذ الحذر عند وضع الجزء العلوي من الغرفة التدفق على الجزء السفلي ، والذي هو أفضلالذي أنجزه كل من حفظ موازية لبعضها البعض وخفض أعلى على الجزء السفلي في اقتراح واحد من دون تعديلات. في القيام بذلك ، وفقاعات الهواء الصغيرة التي قد تكون موجودة و / أو طافية في قناة التدفق ، سيتم تحويلها في حبائل فقاعة على حد سواء من السكن الألومنيوم.
- فمن المهم لضمان تدفق أنابيب في الخزان تصل الى قاع الخزان. خلاف ذلك ، قد يكون امتص الهواء في الأنبوب الذي يؤدي إلى الغرفة من الخزان إذا كان مستوى سائل الإرواء يقع أقل قليلا في نهاية الأنبوب.
- يجب على الباحث أن يكون على دراية اتجاه تدفق المضخة بحيث لا يتم تشغيل المضخة عن طريق الخطأ في الاتجاه المعاكس عند بدء التدفق ، والتي من شأنها أن تؤدي إلى الوقوع في دائرة الهواء والغرفة.
- لتجنب تشكيل رغوة (بسبب التشويه والتحريف الوارد في بروتينات مصل) ، فإننا ننصح خفض الأنبوب الذي يؤدي إلى الغرفة من الخزان إلى حوالي بوصة واحدة فوق perfusaالشركة المصرية للاتصالات على مستوى داخل الخزان. ومع ذلك ، تنزيهه عن تدفق المستوى المتوسط يسمح لك للتحقق من تدفق إلى الخزان أثناء التجربة.
- عندما الشد أجزاء الغرفة معا ، فمن المهم أن نتشبث السكن بيد واحدة بينما تعمل على مفك كهربائي مع يدك الأخرى. علما أن تترجم على اقتراح من مفك كهربائي في عزم الدوران الذي لديه القدرة على 'قذف الغرفة حول" بمجرد تشديد المسمار.
- لتجنب أي ضغط من موجات يتشكل في الدائرة ورفع قبالة خلايا سطحها ، وضمان أن جميع الصمامات مفتوحة قبل بدء التدفق.
- وخاصة بالنسبة للدراسات التدفق على المدى الطويل (> 48 ساعة) ونحن نوصي باستخدام أنابيب أصعب وأكثر مرونة ليتم إدراجه في رأس المضخة لمنع كسر الأنابيب.
- فمن الممكن أن أنابيب "يهاجر" داخل الرأس بسبب ضخ لسوء تعديلها الأسنان رئيس المضخة. لذلك نقترح إيلاء اهتمام وثيق لكيفية الحوضجي هو المضمون في الرأس ووضع العلامات لكل مضخة نهاية الأنبوب بالقلم بمناسبة بحيث يمكنك بسهولة إذا لاحظ هو 'سحبت في" الأنبوب أو فكها أثناء التجربة.
- دائما الاختيار بعناية كل موصل واحد من الدائرة والغرفة قبل بدء نضح من أجل منع تسرب سائل الإرواء خلال تجربة بسبب اتصال خاطئ. هذا هو المهم وخاصة بالنسبة للموصلات تدفق وتدفق dampeners نبض!
- تذكر للحد من التعرض للضوء إذا كنت تستخدم تسميات الفلورسنت.
وإمكانية تحديد غرفة تدفق لدينا هو أن يتم إصلاح ارتفاع من طول القناة تشكيله في الألومنيوم. ومع ذلك ، وهذا له ميزة عدم الحاجة لإثبات وضبط ارتفاع القناة قبل كل تجربة وبالتالي يبسط الحسابات إجهاد القص من خلال تعديل مجرد تدفق المضخة إلى القيمة المطلوبة. اعتمادا على أهداف البحث الخاصة بك ، قد يكون من المرغوب فيهزيادة إجهاد القص دون زيادة سرعة المضخة. في هذه الحالة نوصي زيادة اللزوجة وسائل الإرواء ، وعلى سبيل المثال إضافة إلى 11 ديكستران المتوسط.
وإمكانية تحديد الدائرة هو تدفق كمية كبيرة من الوسيلة المستخدمة ، والتي يمكن أن يكون مشكلة عند محاولة تحديد تركيزات صغيرة جدا من الأيضات الخلية. وإن لم يكن هو موضح هنا ، فمن الممكن لإجراء تخفيض كبير في حجم الدائرة باستخدام أصغر الخزان ويستمتع النبض وانخفاض طول الأنبوب وقطر.
بالإضافة إلى ذلك ، هناك العديد من النظم الأخرى المتاحة تجاريا التي يمكن استخدامها لتطبيق إجهاد القص السائل إلى خلايا في الثقافة. ميكروفلويديك النظم القائمة ، مثل نظام BioFlux من الجريان ، وتمكين تحليلات متزامنة من الخلايا في مختلف قنوات تدفق ميكروفلويديك محملة الحل في لوحات جيدا بوصفها مدخلات الانتاج والخزانات لهذه القنوات 12،13،14. ومع ذلك ، هذه وغيرها من الدقيقةfluidic نظم غير متوافقة مع شرائح المجهر القياسية وعدم السماح لاسترداد عدد كبير من الخلايا بما فيه الكفاية لمزيد من التجارب ، مثل RT – PCR أو البقعة الغربية. كذلك ، فهي أقل استعمالا ، والتكلفة لا تقل عن 40000 $ وربما تصل إلى ما مجموعه أكثر من $ 100،000 ، اعتمادا على المعدات الملحقة.
وقد نظامان macrofluidic المتاحة من المؤسسة الدولية Flexcell ، واللحظية Flexcell ونظم FlexFlow ، استخدمت بنجاح في دراسة الخلايا البطانية 15،16،17 ، خلايا الحلقة 18 و 19 الليفية تحت ظروف تدفق السوائل. وقد استخدم نظام ثالث ، المتوفرة عبر GlycoTech ، لدراسة التصاق الخلايا السرطانية والالتصاق 20 الكريات البيض من 21 إلى monolayers البطانية.
نظام اللحظية يسمح بتشغيل العديد من الشرائح في ظل ظروف إجهاد القص نفسه في آن واحد ، لكنه يفتقر الى نافذة عرض و– خلافا لديناتصميم — لا يسمح في الوقت الحقيقي التصور من الخلايا تحت التدفق.
نظام FlexFlow لها نافذة عرض ، ولكن يتطلب المجهر تستقيم ، والتي قد لا تكون المجهر القياسية المستخدمة في معظم المختبرات. كذلك ، فإن النظام يتطلب FlexFlow زلة غطاء الخلية المغلفة لتكون معكوسة عند وضعه في غرفة التدفق. هذا التصور يمنع من الخلايا الفلورسنت على سطح معتم ، مثل التيتانيوم والزجاج المطلي ، والتي تثبت أننا في دراستنا. أخيرا ، ينزلق تغطية الحاجة المتخصصة التي سيتم شراؤها خصيصا لنظام FlexFlow ، الذي هو في نطاق سعري متعدد ألف دولار ، على غرار نظام Flexcell اللحظية.
GlycoTech عروض دائرية ومستطيلة غرف تدفق موازية لوحة ، والتي هي أقل تكلفة بكثير ، ولكن المصنوعة من الاكريليك الزهر التي لا يمكن تعقيمها بسهولة الجذعية مثل غرفة لدينا. من الملاحظة ، وغرف تدفق الأخرى التي تم وصفها لتكون autoclavableيبدو غير عملي لأنها تتطلب العدسات المجهرية الخاصة 22،23. ويستخدم نظام GlycoTech جوانات المطاط والسيليكون لوحات يتوسطون بين العلوي والسفلي ، والتي سوف تغير في سمك مع الاستخدام المتكرر ، وبالتالي تغيير ارتفاع الغرفة مع مرور الوقت (الشركة المصنعة توصي بشراء جديدة يستخدم بعد كل عشرة). غرفة الألومنيوم مع المدمج في طوقية يسمح للمعارضة كاملة من لوحات العلوية والسفلية ويضمن الارتفاع المستمر بين غرفة التجارب. أخيرا ، ومضخات الفراغ التي تكون ضرورية لتحقيق ختم مانعة للتسرب في العديد من التصاميم غرفة التدفق ، بما في ذلك غرف GlycoTech ، والتي ليست ضرورية في التصميم لدينا.
في حين لم تظهر هنا ، يمكن الاحتفاظ غرفة التدفق تحت المجهر خلال التجربة تدفق بأكمله في الوقت الحقيقي التصوير من التصاق الخلية و / أو السلوك. إذا كان هذا هو المطلوب ، ونحن نوصي باستخدام مصابيح الحرارة أو وسادة ساخنة تحت غرفة للحفاظ على درجة حرارة سائل الإرواء في 37 درجة مئوية. فروهناك ، يمكن الاستعاضة عن المضخة الدوارة مع مضخة الحقن ، إذا كان المطلوب لا 'تدوير' إما من الخلايا أو الأيضات الفحص أو المخدرات أو وكلاء 24.
فمن الممكن أيضا أن تدفق الخلايا المسماة الخلايا بشكل مختلف خلال ملتصقة ، مثل الصفائح الدموية الفلورسنت أكثر من طبقة من EPCs متموجة (باستخدام مقايسة الصفائح الدموية التي وصفها Achneck آخرون 6،25) لتقييم خلية الى خلية التفاعل تحت إجهاد القص السوائل. قاعتنا تدفق يجمع بين ميزات أخرى ثمينة من تدفق الغرف المتاحة ، مثل منفذ سائل الإرواء أخذ العينات ونافذة عرض ويحتوي على ميزة هامة من التوافق مع المجهر an إما مقلوب أو في وضع مستقيم. فمن autoclavable بالكامل ويسمح للتجارب متكررة في ارتفاع مستمر وغرفة من دون الحاجة للمضخات الفراغ لتحقيق ختم مانعة للتسرب.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر جو أوين في الصك الطبية الحيوية وصناعة الآلات لجهوده الدؤوبة في تصنيع وتجميع أجزاء الغرفة ، وتدفق ماودسلي مات من ايكا مايكروسيستمز للمساعدة في تقنيات الخلايا الصورة من خلال غرف التدفق. نحن مدينون لكيفن كولينز من خدمات الإرواء ديوك ، والدكتور ستيف والاس في قسم الهندسة الطبية الحيوية للحصول على اقتراحات مفيدة حول تصميم الدوائر التدفق. نود أيضا أن نشكر المؤسسة الوطنية للعلوم بحوث زمالة دراسات عليا لدعم برنامج الكسندرا Jantzen والمعاهد الوطنية للصحة في لدعمهم من خلال المنح "بطانة EPC ذاتي لتحسين الدورة الدموية للتوافق مع الحياة مساعدة الأجهزة" RC1HL099863 – 01.
Materials
| Products / Reagents | Company | Product # |
| 10 ml Syringe | Cole Parmer Instrument Co. | 07940-12 |
| 1-Way Stopcoks | Cole Parmer Instrument Co. | 30600-00 |
| 30 ml Syringe | BD Medical | 309650 |
| 4 -Way Stopcocks | Cole Parmer Instrument Co. | 30600-04 |
| Aluminum Alloy | N/A | 6061 |
| Cell-Culture Dishes (4-well, rectangular) | Thermo Scientific; Nunc | 267061 |
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 |
| DMSO | Research Organics | 2162D |
| DPBS (-/-) | Invitrogen | 14190-144 |
| EGM-2 Singlequots | Lonza | CC-4176 |
| Female Luer Adaptor | Cole Parmer Instrument Co. | SI-45500-04 |
| Fibronectin | Sigma | F0895-2MG |
| Glass Bottle (250ml) with Cap | Cole Parmer Instrument Co. | 34594-24 |
| Hard Tubing | Cole Parmer Instrument Co. | 06508-16 |
| HBSS | Sigma | H8264-500ML |
| Histopaque | Sigma | H8889-500ML |
| Hoechst Stain Solution | Sigma | H6024 |
| Hyclone FBS | Thermo Scientific | SH30071.01 |
| L-glutamine | Lonza | 17-605E |
| Male Luer Adaptor | Cole Parmer Instrument Co. | EW-45505-04 |
| MCDB-131, 1X Medium | Cellgro | 15-100-CV |
| Barbed Polypropylene Fittings | Cole Parmer Instrument Co. | 06365-90 |
| O-Rings | N/A | AS568A |
| Pulse-Dampener | Cole Parmer Instrument Co. | 07596-20 |
| Pump-Drive (Masterflex L/S variable-speed economy drive) | Cole Parmer Instrument Co. | 7524-40 |
| Pump-Head (Masterflex Easy Load Pump Head) | Cole Parmer Instrument Co. | 07518-60 |
| Slide | Cole Parmer Instrument Co. | 48500-00 |
| Soft Tubing | Cole Parmer Instrument Co. | 96400-16 |
| Syringe filter | Cole Parmer Instrument Co. | 02915-12 |
| Sytox Orange Nucleic Acid Stain | Invitrogen | S-11368 |
| Trypsin EDTA | Lonza | CC-5012 |
| Trypsin Neutralizing Solution | Lonza | CC-5002 |
References
- Bhat, V. D., Truskey, G. A., Reichert, W. M. Fibronectin and avidin-biotin as a heterogeneous ligand system for enhanced endothelial cell adhesion. J. Biomed. Mater. Res. 41, 377-385 (1998).
- Broxmeyer, H. E. Cord blood stem and progenitor cells. Methods Enzymol. 419, 439-473 (2006).
- Achneck, H. E. . American Heart Association Scientific Sessions, Abstract Oral Sessions, Medical Aspects End Stage Heart Failure: Transplantation and Device Therapies. , (2010).
- Brown, M. A., Wallace, C. S., Angelos, M., Truskey, G. A. Characterization of umbilical cord blood-derived late outgrowth endothelial progenitor cells exposed to laminar shear stress. Tissue. Eng. Part. A. 15, 3575-3587 (2009).
- Achneck, H. E. Regenerating titanium ventricular assist device surfaces after gold/palladium coating for scanning electron microscopy. Microsc. Res. Tech. 73, 71-76 (2010).
- Achneck, H. E. The biocompatibility of titanium cardiovascular devices seeded with autologous blood-derived endothelial progenitor cells: EPC-seeded antithrombotic Ti Implants. Biomaterials. 32, 10-18 (2011).
- Rinker, K. D., Prabhakar, V., Truskey, G. A. Effect of contact time and force on monocyte adhesion to vascular endothelium. Biophys. J. 80, 1722-1732 (2001).
- Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F., Horton, M. J. Ch. 2. Transport Phenomena in Biological Systems. , (2004).
- Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F., Horton, M. J. Ch. 2. Transport Phenomena in Biological Systems. , (2009).
- Allen, J. D. Plasma nitrite response and arterial reactivity differentiate vascular health and performance. Nitric Oxide. 20, 231-237 (2009).
- Xiao, Y., Truskey, G. A. Effect of receptor-ligand affinity on the strength of endothelial cell adhesion. Biophys. J. 71, 2869-2884 (1996).
- Conant, C. G., Schwartz, M. A., Nevill, T., Ionescu-Zanetti, C. Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells. J. Vis. Exp. (32), e1644-e1644 (2009).
- Conant, C. G., Schwartz, M. A., Ionescu-Zanetti, C. W. e. l. l. plate-coupled microfluidic devices designed for facile image-based cell adhesion and transmigration assays. J. Biomol. Screen. 15, 102-106 (2010).
- Conant, C. G. Using well-plate microfluidic devices to conduct shear-based thrombosis assays. J. Lab. Autom. 16, 148-152 (2011).
- Metaxa, E. Nitric oxide-dependent stimulation of endothelial cell proliferation by sustained high flow. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 295, H736-H742 (2008).
- Radel, C., Carlile-Klusacek, M., Rizzo, V. Participation of caveolae in beta1 integrin-mediated mechanotransduction. Biochem. Biophys. Res. Commun. 358, 626-631 (2007).
- Wang, X. L., Fu, A., Spiro, C., Lee, H. C. Proteomic Analysis of Vascular Endothelial Cells-Effects of Laminar Shear Stress and High Glucose. J. Proteomics. Bioinform. 2, 445-445 (2009).
- Elfervig, M. K., Minchew, J. T., Francke, E., Tsuzaki, M., Banes, A. J. IL-1beta sensitizes intervertebral disc annulus cells to fluid-induced shear stress. J. Cell. Biochem. 82, 290-298 (2001).
- Archambault, J. M., Elfervig-Wall, M. K., Tsuzaki, M., Herzog, W., Banes, A. J. Rabbit tendon cells produce MMP-3 in response to fluid flow without significant calcium transients. J. Biomech. 35, 303-309 (2002).
- Patton, J. T., Menter, D. G., Benson, D. M., Nicolson, G. L., McIntire, L. V. Computerized analysis of tumor cells flowing in a parallel plate chamber to determine their adhesion stabilization lag time. Cell. Motil. Cytoskeleton. 26, 88-98 (1993).
- Wiese, G., Barthel, S. R., Dimitroff, C. J. Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium. J. Vis. Exp. (24), e1009-e1009 (2009).
- Kaper, H. J., Busscher, H. J., Norde, W. Characterization of poly(ethylene oxide) brushes on glass surfaces and adhesion of Staphylococcus epidermidis. J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 14, 313-324 (2003).
- Bakker, D. P., Plaats, A. v. a. n. d. e. r., Verkerke, G. J., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces. Appl. Environ. Microbiol. 69, 6280-6287 (2003).
- Angelos, M. G. Dynamic adhesion of umbilical cord blood endothelial progenitor cells under laminar shear stress. Biophys. J. 99, 3545-3554 (2010).
- Baker, G. R., Sullam, P. M., Levin, J. A simple, fluorescent method to internally label platelets suitable for physiological measurements. Am. J. Hematol. 56, 17-25 (1997).
