生体内ビデオ顕微鏡による組織内好中球腔内クロールを追跡、経内皮移動と走

血流から炎症組織への循環白血球の動員は、炎症の^1,2の重要かつ複雑なプロセスです。炎症組織のpostcapillary細静脈では、細静脈壁の内腔表面に最初にテザーとロールを白血球。内皮に​​白血球の逮捕を圧延し、細静脈の表面のケモカインまたは他の化学誘引物質に応答して、強固な接着を受ける。多くの接着白血球が接着の初期のサイトから内皮の接合部の血管外漏出のサイトに移転、プロセスが³クロール腔内と呼ばれる。クロールに続いて、白血球は内皮上を移動（移住）と誘引物質のソース（走化性^）4に向かって血管外組織に移行する。生体顕微鏡は、 生体内で白血球-内皮細胞の相互作用を可視化し、白血球動員^2,5の細胞および分子メカニズムを明らかにするための強力なツールです。このレポートでは、我々は、好中球走化性因子の勾配に応答してマウス精巣挙筋の好中球動員の詳細なプロセスを視覚化し、決定するために明生体顕微鏡を用いての包括的な説明を提供しています。好中球動員、好中球走化MIP – 2（CXCL2、CXCケモカイン）またはWKYMVm（TRP -リジン-チロシン- VAL – D – Metは、合成アナログを含むアガロースゲルの小片（〜1 mmの³サイズ）を誘導する細菌ペプチドの）観測postcapillary細静脈に隣接した筋肉組織に配置されます。時間経過したビデオの撮影とコンピューターソフトImageJのと、好中球内皮上腔クロール、好中球内皮遊走や組織におけるマイグレーションと走化性を可視化し、追跡されます。このプロトコルは、管腔内クロール速度、移住の時、剥離の時間、移動速度、組織における走化性の速度と走化性指数などの多くの好中球動員のパラメータの信頼性と定量分析が可能になります。我々は、このプロトコルを使用して、これらの好中球動員のパラメータが安定的に決定され、単一の細胞移動が便利にin vivoで追跡することができることを示している。