Dissection hôte-virus interaction dans la réplication lytique d'un virus de l'herpès modèle

En réponse à une infection virale, une foule se développe diverses réactions défensives, telles que l'activation de l'immunité innée voies de signalisation qui conduisent à la production de cytokines ^1,2 antiviral. Afin de coloniser l'hôte, les virus sont obligatoire pour échapper réponses de l'hôte antiviraux et de manipuler des voies de signalisation. Démêler l'interaction hôte-virus fera la lumière sur le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques contre l'infection virale.

ΓHV68 murin est étroitement liée à oncogène humain sarcome de Kaposi associé au virus de l'herpès et Epsten-Barr ^3,4. γHV68 infection chez les souris de laboratoire fournit un modèle animal docile petite pour examiner toute la durée de réponse de l'hôte et l'infection virale in vivo, qui ne sont pas disponibles pour les herpèsvirus humains. Dans ce protocole, nous vous présentons un panel de méthodes de caractérisation phénotypique et dissection moléculaire des composants de l'hôte de signalisation dans γHV68 replic lytiquetion à la fois in vivo et ex vivo. La disponibilité de souches de souris génétiquement modifiées permet l'interrogation des rôles des voies de signalisation hôtes pendant γHV68 infection aiguë in vivo. En outre, des fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) isolés à partir de ces souches de souris déficientes peut en outre être utilisé pour décortiquer les rôles de ces molécules in vivo au cours de γHV68 réplication lytique ex.

En utilisant des tests de biologie moléculaire et virologiques, nous pouvons identifier le mécanisme moléculaire de interactions hôte-virus et d'identifier l'hôte et des gènes viraux essentiels à la réplication virale lytique. Enfin, un chromosome artificiel bactérien (BAC) système facilite l'introduction de mutations dans le facteur viral (s) spécifiquement interrompre l'interaction hôte-virus. ΓHV68 recombinant portant ces mutations peuvent être utilisés pour récapituler les phénotypes de γHV68 réplication lytique dans les MEF déficientes en clé d'hôte de signalisation composants.Ce protocole offre une excellente stratégie pour interroger interaction hôte-pathogène à de multiples niveaux d'intervention in vivo et ex vivo.

Récemment, nous avons découvert que γHV68 usurpe une voie de signalisation immunitaire inné pour promouvoir la réplication virale lytique ^5. Plus précisément, γHV68 infection de novo active la kinase IKKβ immunitaire et IKKβ activée phosphoryle le facteur de transcription virale maître, de réplication et de transactivateur (RTA), afin de promouvoir virale activation de la transcription. Ce faisant, γHV68 efficacement son activation transcriptionnelle couples d'accueillir l'activation immunitaire innée, ce qui facilite la transcription virale et la réplication lytique. Cette étude fournit un excellent exemple de ce que peut être appliqué à d'autres virus d'interroger les interactions hôte-virus.