Плазменные литографии поверхности паттернов для создания сотовых сетей

1. Создание формы используются для структурирования Концептуальное проектирование моделей. Модели создаются, которые служат для формирования сотовых сетей, контролирующих клеточное контакт, изолировать клетки, имитирующие природные структуры, или иным образом руководство клеточной адгезии и расстановки кадров. Системы автоматизированного проектирования CAD или основанные создание шаблона и создание фотошаблонов. Желаемую модель выполнена в САПР, таких как AutoCAD, и затем отправляется за пределы компании по производству фотошаблонов. Фотолитографии для создания мастер узор. Стекло слайды по образцу или с тонкими положительными сопротивляться или толстой отрицательное сопротивление в зависимости от размера структуры создаются. Стекло слайдов, используемых для их преимущества быть низкой стоимости, сильнее, чем кремниевые пластины, а не производить столько пыли, когда нарушена. Кроме того, другим удобным структур, таких как дифракционные решетки могут быть использованы как мастер модель. Слайд узорной прилагается к стопку слайдов, которые не были узорные. Все действия выполняются внутри чистым капотом потоком для минимизации пыли. Создание мастер форм. Контейнер фольгу чуть больше, чем стопку слайдов создается провести 30 г полидиметилсилоксана (PDMS), который затем облили photolithographically узорной поверхности для создания начальной формы. PDMS дегазируют и отверждение в течение одного-двух дней. После отверждения PDMS является снимают мастера узора и формы формы для следующего шага. 6 г 2 части эпоксидной (Devcon # 14310 (6 г) смешивают в течение 1 минуты, а затем выливают в мастер формы, дегазации и позволили, чтобы вылечить. Дегазация эпоксидной должно быть сделано быстро (<8 мин) с использованием многих пузыря нарушение циклов и используя только тонкий слой, прежде чем она эпоксидной множеств и пузыря удаление становится невозможным, чтобы удалить пузырьки. 6 г использованы производит тонкий слой, который облегчает быстрое удаление пузыря. Через час, 2 части эпоксидной будет частично вылечить и более эпоксидной могут быть добавлены на вершине без дегазации производить толще структура, которая проще для ручки в последующих действиях. Эпоксидной затем дают лекарство от одного до двух дней. После отверждения эпоксидных удаляется из формы мастера PDMS и лентой оборачивается вокруг эпоксидной формы для формирования контейнера. Рабочая форма будет создано путем заливки PDMS на эпоксидной плесени, дегазации PDMS, и лечения в течение одного-двух дней. После отверждения, рабочие пресс-формы снимают из эпоксидной смолы и хранится для поддержания чистоты. 2. Структурирование поверхности пресс-форм для ячейки руководством Малый слоев рабочего формы вырезаются и помещали на чашки Петри полистирола. Расположение этих форм разделы помечены. Штатив формируется из небольших участков и взвешенные обеспечения конформных контакта между рабочим формы и поверхности чашки Петри. Хорошо размещения можно наблюдать, глядя на дно тарелки. Сборка помещается в камере плазмы. Плазменная обработка инициируется и продолжали при 150 Па при 29,6 Вт (макс. мощность) в течение 10 минут с использованием воздуха плазмы. После обработки плазмы, формы и веса обвинения снимаются. Чашки Петри помещают под ультрафиолетовым светом в течение 10 минут стерилизации внутри шкафа биобезопасности и хранятся там до засеяно клетками. 3. Посев поверхности с ячейками SH-SY5Y CRL-2266 нейробластомы человека или иные клетки культивируют с использованием стандартных протоколов для типа клеток. Слиянии SH-SY5Y CRL-2266 Человеческие клетки нейробластомы оценить визуально перед посевом на поверхность узорные. Стандартное разделение ячейки осуществляется для отделения клеток от поверхности их чашке Петри. Клетки, как только свободное плавание, высевают на поверхность блюдо узорной Петри после того, разбавляют до достижения желаемого слияния при размещении на поверхности узорные. Ячейки могут поселиться и приложить к поверхности. Блюдо узорной Петри инкубировали в течение нескольких часов до нескольких дней, пока клетки собираются на образец создан плазмы. При культивировании клеток нейробластомы, ретиноевая кислота (10 мкМ) добавляется ежедневно для того, чтобы побудить клетки к дифференцировке в нейрон-подобного состояния. Добавление ретиноевой кислоты происходит в темноте. Ретиноевая кислота добавляется ежедневно в течение нескольких дней, после чего дифференциация будет наблюдать. Медиа менять каждые 3-4 дней. 4. Наблюдение и анализ Периодические изображения живых клеток или видео принимаются для того, чтобы наблюдать поведение клеток с течением времени. Для изображения в реальном времени, клетки располагаются в верхнем столике микроскопа инкубатор который держит клетки при 37 ° С, влажность 100%, и 5% СО 2. Клетки могут быть также фиксировали и окрашивали для наблюдения под флуоресценции <lя> изображения или видео из клеток, которые были захвачены в плен ввозятся на системе анализа изображений и измерения проводятся в том числе темпы роста, размер ячейки, скорость миграции, дифференциации, выравнивание, расположение определенных белков, и других. 5. Представитель Результаты: Типичный результат реализации технике литографии плазмы является формирование структуры клеток, которые напоминают некоторые произвольные или природную структуру. Это видно на рисунке 1а-б, где линии и сети нейронов, которые были созданы. Другие типы клеток могут быть использованы так же как показано на рисунке 1c-й, который показывает, пупочной вены человека эндотелиальных клеток (HUVEC) и C2C12 скелетные мышечные клетки формирования сетки. Материалы, такие как поли-L-лизин может быть с рисунком, рис 1e для облегчения вложения определенных типов клеток и для других целей. В случае нейронов показал, что было создано в сети клеток, которые имеют связи между ними. Это повторяет то, что происходит естественно в мозг, где нейроны имеют дискретные связи между соседними клетками, который влияет на работу головного мозга. С созданием такой структуры в лаборатории, числа, положения, частоты и других факторов связи могут быть систематически контролируется. Результатом этих arraignments можно оценить визуально и дополнительных ресурсов, таких как химическая или электрическая стимуляция может быть реализовано, чтобы исследовать поведение сети. Отрицательный результат был бы заросших или неполную картину или загрязненные образцы. Неполной или заросшие модель будет результатом посева субстрат либо слишком мало или слишком много клеток, который не будет поставлять модель с идеальным количеством клеток. Кроме того, если модель не рассчитана правильно (например, линий слишком узкое) клетки не смогут подключаться и успешно развиваться на нем. В случае загрязнения образца, надлежащим чистоты не было бы поддерживать во время одного из шагов, хотя это бывает редко, когда после надлежащего протокола культуре клеток связано с тем, что плазма структурирование также стерилизует подложки. Рисунок 1. Структурирование клеток и белка.