IGY التكنولوجيا : استخراج الأجسام المضادة من صفار البيض الدجاج بواسطة البولي ايثيلين جلايكول (PEG) الأمطار
Summary
يصف هذا البروتوكول في مجال استخراج وبخاصة من مجموع IGY من صفار البيض عن طريق الترسيب البولي ايثيلين جلايكول ، ويعطي معلومات عامة حول التكنولوجيا IGY.
Abstract
يمكن تحصين الدجاج عن طريق التلقيح ايم (العضلة الصدرية ، اليسار واليمين ، وحجم الحقن 0،5-1،0 مل) أو عن طريق التحصين البلازميد الجينات بندقية. تعتمد على استمناع للمستضد ، وارتفاع عيارات الأضداد (إلى 1:100،000 — 1:1،000،000) لا يمكن أن يتحقق إلا بعد واحد أو 3 — تعزيز التحصينات 4. عادة ، دجاجة تبيض باستمرار لحوالي 72 أسابيع ، بعد ذلك يقلل القدرة على زرع. يصف هذا البروتوكول استخراج IGY من مجموع صفار البيض عن طريق إجراء هطول الأمطار (PEG. Polson آخرون 1980). الأسلوب ينطوي على خطوتين مهمتين. أول واحد هو إزالة الدهون ، والثاني هو ترسب IGY الكامل من طاف من خطوة واحدة. ويمكن بعد غسيل الكلى ضد العازلة (PBS عادة) يتم تخزين IGY ، في استخراج -20 درجة مئوية لمدة أكثر من عام. نقاء من استخراج ما يقارب 80 ٪ ، ومجموع IGY في البيض يختلف 40-80 ملغ ، تعتمد على عمر الدجاجة زرع. محتوى IGY مجموع الزيادات مع عمر الدجاجة من حوالي 40 ملغ / البيض يصل إلى 80 مغ / البيض (PEG بشأن الأمطار). القدرة زرع دجاجة سنويا حوالي 325 بيضة. هذا يعني الحصاد الكلي المحتمل للIGY 20 غ من الكل / السنة على أساس المحتوى IGY يعني من 60 ملغ مجموع البيض IGY / (أنظر الجدول 1).
Protocol
Discussion
ويتأثر اختيار الطريقة المناسبة التي IGY تنقية نطاق تنقية (المختبرية أو الصناعية) ، وفعالية التكاليف ، والتكنولوجيا (معدات المختبرات) ، وتأثيرها على البيئة (إدارة النفايات). وتم استعراض مختلف أساليب الاستخراج IGY بالتفصيل Meulenaer دي & هيوغيبارت (2001 ، للمراجعة وانظر أيضا شايد وآخرون 2005). بصفة عامة ، يمكن تقسيم هذه الطرق إلى ثلاث مجموعات رئيسية هي :
- أساليب الأمطار : تشمل الأمونيوم كبريتات الصوديوم أو ، polyethyleneglycol (PEG) ، وحمض الكابريليك وcaragenean.
- الكروماتوغرافي : طرق التقارب اللوني ، ايون اللوني الصرف ، مسعور اللوني التفاعل اللوني thiophylic التفاعل ، وهلام اللوني الترشيح.
- الفائق.
ويمكن زيادة نقاء استعدادا IGY عن طريق مزيج من الأساليب ، على سبيل المثال ، يمكن الجمع بين الربط مع هطول الأمطار اللوني تقارب. في بعض الحالات ، اعتمادا على التطبيق النهائي ، واستخراج المياه من IGY غير كافية لتحقيق نتائج جيدة (اكيتا وناكاي 1993). ووفقا لخبرتنا ، عملت IGY عينة نحصل بواسطة الربط بين هطول الأمطار بشكل جيد جدا في الكثير من المقايسات المناعية المختلفة. عن طريق توحيد أسلوب الربط بين هطول الأمطار ومساعد تقني قادر على معالجة ما يقرب من 84 بيضة في الأسبوع ، وهو ما يعادل مبلغ IGY الإجمالي بين 4 و 7 غ في الأسبوع. عملية حسابية بسيطة : هو تحصين وضع الدجاجة مع المستضد. بعد زيادة التحصينات القليلة الدجاجة تنتج الأجسام المضادة المحددة (آب) مع من عيار 1:50،000 خلال فترة 30 يوما. 30 بيضة × 2 مل IGY استخراج (انظر البروتوكول والشكل 3) يناظر مجموع IGY 60 مل ، والذي بدوره يتوافق مع AB – تمييع 3000 لتر (قدرة دلو هو 10 لتر) ، وهذا يعني مع 3000 لتر يمكن حل آب تملأ 300 الدلاء. بذلك ، في ضوء مثل هذه الكمية الضخمة ، أب أنه لا توجد مشكلة لتخزين AB – تجمع ثابت من الجودة والنوعية. هذا الأسلوب يقلل من التباين تهمة / الكثير لاحظ ذلك في آب polyspecific.
على الرغم من الجانب الكمي ، IGY أب لها مزايا إضافية بالمقارنة مع مفتش الثدييات : لا تكمل تفعيل نظام الثدييات ، وليس عبر التفاعل مع حماة (الأجسام المضادة البشرية المضادة الماوس) ، والعوامل البشرية المفاصل أو مستضدات فئة الدم (نقص heteroagglutinins).
ميزة المعلقة IGY ، أب هي المسافة النشوء والتطور ما يسمى. المسافة النشوء والتطور هو السبب وراء الاختلافات ووصف كثير من الأحيان بين الخصوصيات آب من الثدييات والطيور ، حتى عندما تحصين مماثل. بالإضافة إلى الاختلافات بين الثدييات والطيور النظام المناعي أنفسهم ، والاختلافات في التنمية النشوء والتطور في هذه الفئات الحيوانية two يساهم في آب خصوصيات مختلفة. وذكرت العديد من الكتاب أن الدجاج غالبا ما تنتج عبس ضد بروتينات عالية phylogenetically الثدييات الحفظ أو الببتيدات أكثر كفاءة من القيام الأرانب (انظر شايد للمراجعة وآخرون (أ) 2005). ونتيجة لذلك ، يمكن للمستضد الحفظ تظل "ملثمون" للنظام المناعي الأرنب ، وتتسبب بالتالي سوى ضعف أو "صامتة" الاستجابة. وعلاوة على ذلك ، إذا تم تلقيح الدجاج والأرانب والثدييات مع المستضد نفسه ، كثيرا ما تستجيب الدجاج مع خصوصية – آب نادرا ما يمكن أن يتحقق في الأرانب. أيضا جانب من جوانب رفاه الحيوان مهمة منذ آب جراحية غير قابلة للاستخراج من صفار البيض. بالاشتراك مع التحصين (البلازميد) الجينات بندقية IGY الإنتاج تماما غير الغازية (Witkowski آخرون 2009).
في الختام ، وإنتاج الدجاج في آب وIGY الاستخراج عن طريق الربط بين التساقط جدا فعالة من حيث التكلفة والنتائج في آب محددة للغاية مع عيارات مستقرة تصل إلى 1:1،000،000. نظرا لبعد المسافة بين النشوء والتطور وأفيس Mammalia والدجاج هي قادرة على انتاج آب محددة ضد مستضدات الثدييات حفظا للغاية على عكس الأرانب على سبيل المثال. وكمية غير عادية من أب حصلت عليها IGY التكنولوجيا يفتح الباب أيضا لاستخدام IGY ، بكالوريوس في الطب البشري والطب البيطري لأغراض علاجية / وقائية.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من خلال منحة من الوزارة الاتحادية الألمانية للتعليم والبحوث (المشروع BiGRUDI [بي جي ologische efahrenlagen : R isikobewertung ، ش ltraschnelle D etektion اوند أنا dentifizierung فون bioterroristisch relevanten Agenzien ، 13N9594]). نشكر باء Diemar (شاريتيه – Universitätsmedizin برلين ، ومعهد FÜR Pharmakologie) للحصول على مساعدة فنية ممتازة.
Materials
- Dialyse Bag Visking, Type 27/32, cut off -14 kD, Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany
- Falcon tubes Blue Max, 50 ml Polypropylene Conical Tube, Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes NY, USA
- Folded Filter MN 615 ¼, ∅ 150 mm, Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany Heraeus
- Magnetic stirrer, Variomag Mono, H+P Labortechnik AG, Oberschleißheim, Germany
- Micro-Dialyse-Capsule 5,0 ml, Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany
- Multifuge 3SR+, Thermo Scientific, Langenselbold, Germany
- Photometer UV-160A, Shimadzu Deutschland GmbH, Duisburg, Germany
- Polyethylene Glycol 6000, Rotipuran Ph. Eur., Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany
- Premixed PBS-Buffer 10x, Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany
- Roller Mixer SRT2, Stuart, Staffordshire, UK
- Vibrofix VF2, Janke & Kunkel, IKA-Labortechnik, Staufen i.Br., Germany
- Yolk spoon, Fackelmann (houshold effects), Germany
References
- Akita, E. M., Nakai, S. Comparison of four purification methods for the production of immunoglobulins from eggs laid by hens immunized with an enterotoxigenic E. coli strain. J. Immunol. Methods. 160, 207-214 (1993).
- De Meulenaer, B., Huyghebaert, A. Isolation and purification of chicken egg yolk immunoglobulins: a review. Food Agricult. Immunol. 13, 275-288 (2001).
- Klimentzou, P., Paravatou-Petsotas, M., Zikos, C. h., Beck, A., Skopeliti, M., Czarnecki, J., Tsitsilonis, O., Voelter, W., Livaniou, E., Evangelatos, G. P. Development and immunochemical evaluation of antibodies Y for the poorly, immunogenic polypeptide prothymosin alpha. Peptides. 27, 183-193 (2006).
- Pauly, D., Dorner, M., Zhang, X., Hlinak, A., Dorner, B., Schade, R. Monitoring of laying capacity, immunoglobulin Y concentration, and antibody titer development in chickens immunized with ricin and botulinum toxins over a two-year period. Poultry Science. 88, 281-290 (2009).
- Polson, A., von Wechmar, M. B., van Regenmortel, M. H. Isolation of viral IgY antibodies from yolks of immunized hens. Immunol. Commun. 9, 475-493 (1980).
- Schade, R., Behn, I., Erhard, M., Hlinak, A., Staak, C. . Chicken egg yolk antibodies, production and application : IgY-Technology. , (2001).
- Schade, R., Calzado, E. G., Sarmiento, R., Chacana, P. A., Porankiewicz-Asplund, J., Terzolo, H. R. Chicken egg yolk antibodies (IgY-technology): a review of progress in production and use in research and human and veterinary medicine. Altern. Lab Anim. 33, 129-154 (2005).
- Witkowski, P. T., Bourquain, D. R., Hohn, O., Schade, R., Nitsche, A. Gene gun-supported DNA immunisation of chicken for straightforward production of poxvirus-specifiv IgY antibodies. J. Immunol. Methods. 341, 146-153 (2009).
