Les cellules souches périvasculaires (CSP) sont une classe de cellules souches roman pour la régénération tissulaire du squelette similaire aux cellules souches mésenchymateuses (CSM). CSP peuvent être isolés par FACS (fluorescence tri cellulaire activé) à partir de tissu adipeux prélevés lors des procédures de liposuccion standard, puis combiné avec un ostéoinducteur échafaudage pour atteindre la formation osseuse<em> In vivo</em>.
Les cellules souches périvasculaires (CSP) peuvent être isolés en nombre suffisant à partir de tissus à des fins multiples de l'ingénierie tissulaire osseuse 1-3. CSP sont une population FACS-triés de «péricytes» (CD146 + CD34-CD45-) et des cellules adventice »(CD146-CD34 + CD45-), dont chacun nous l'avons déjà signalé pour avoir des propriétés de cellules souches mésenchymateuses. CSP, comme MSC, sont capables de subir une différenciation ostéogénique, ainsi que sécrètent pro-ostéogénique 1,2 cytokines. Dans le présent protocole, nous démontrons l'osteogenicity de CSP dans plusieurs modèles animaux, y compris une implantation poche musculaire dans SCID (immunodéficience combiné sévère) des souris, une souris SCID défauts crânienne et un défaut segmentaire du fémur (DSE) chez des rats athymiques. Le modèle poche cuisse musculaire est utilisé pour évaluer la formation d'os ectopique. Défauts crânienne sont centrées sur l'os pariétal et standard sont de 4 mm de diamètre (taille critique) 8. DSE sont bicorticale et sont stabilisées avecun bar en polyéthylène et K-fils 4. Le DSE décrit est aussi un défaut de taille critique, ce qui ne modifie pas significativement guérir ses 4 propre. En revanche, si les cellules souches ou des facteurs de croissance sont ajoutés à la site de la lésion, la régénération osseuse significative ne peut être apprécié. L'objectif global de xénogreffe CFP est de démontrer la capacité ostéogénique de ce type de cellule à la fois extra-utérines et orthotopique modèles de régénération osseuse.
L'isolement des CSP est bien décrit par ailleurs 1-3, y compris une publication JoVE soumis séparément traitant spécifiquement protocoles d'isolement de la CFP et les méthodes. L'objectif spécifique de cet article est de décrire et démontrer 3 protocoles pour la CFP en application in vivo de la formation osseuse / régénération. La pochette de souris SCID muscle est un modèle couramment décrit pour la formation osseuse ectopique humaine 7. Des différences importantes existent entre les extra-utérines et orthotopique (défaut) pour les modèles des os, y compris l'interaction avec l'hôte paracrine formation de cellules osseuses 8 ainsi que l'abondance des facteurs de signalisation ostéogéniques présents dans le microenvironnement défaut squelettique. Deux défauts sont présentés ici, un defect8 crânienne et fémorale défaut segmentaire 4. Les deux sont bien documentés pour être critique de taille (c.-à-pas guérir de leur propre).
Des différences intéressantes existent entre les défauts crânienne et fémorale. La première, lacellulaire: interaction entre les cellules et les cellules CSP xénogreffées endogènes est très différente. En termes d'un défaut crânienne, CSP interagir avec la dure-mère sous-jacente (la couche la plus externe des méninges), ainsi que les ostéoblastes et les cellules périostiques circonscrivant le site du défaut. Il est important, l'interaction entre les cellules implantées et les ostéoblastes qui entourent 8, ou des cellules implantées et qui sous-tend-mère (Levi et al., Sous presse) sont essentiels pour les cellules souches normales médiation ostéogenèse de procéder. En ce qui concerne le défaut de fémur segmentaire (DSE), les CSP xénogreffées sont exposés à une cellule très différente et de l'environnement de cytokines. Par exemple, le site DSE est composé de cellules de moelle et d'accompagnement des souches mésenchymateuses, ainsi que l'endoste, le périoste et des os longs des ostéoblastes. Théoriquement, chaque cellule a sa propre réaction à la blessure, et chaque cellule peut avoir: les interactions des cellules avec des xénogreffes de la CFP.
Autres différences claires existent entre crânienneet les défauts du fémur. Les os crânienne forment d'abord par ossification intramembranaire, tandis que les os longs former à travers un intermédiaire du cartilage (ossification endochondrale). En outre, le processus de réparation post-traumatique a également reproduit ces origines développementales. Poste-DSE, la formation de cal cartilage est observée, alors qu'aucune intermédiaire du cartilage est formé dans un défaut osseux pariétal. Enfin, l'origine embryonnaire du crâne peut différer de celle des os longs. La majorité du crâne (y compris les cellules périvasculaires – péricytes – dans la région de la tête entière) est dérivé de la crête neurale (mesectoderm), tandis que le squelette appendiculaire est de dérivation mésoderme paraxial 9. Toutes ces différences peuvent entraîner des différences importantes en termes de réparation osseuse médiée par la CFP.
L'utilisation de CSP a plusieurs avantages par rapport traditionnelles tissu adipeux cellules stromales (ASCS). CSP ne nécessitent pas de culture et sont un whi cellules purifiées de la populationch ne comprennent pas les autres cellules stromales qui ne participent pas au – et peut même réguler négativement – la différenciation ostéogénique, comme les cellules endothéliales 10. En revanche, par exemple, des analyses clonales de CSA montrent que seule une sous-population sont capables de subir une différenciation ostéogénique in vitro 11. En fin de compte, les efforts du squelette de l'ingénierie tissulaire sera probablement incorporer une cellule souche osteocompetent (tels que les CSP) avec facteurs de croissance exogènes et un échafaudage ostéoconducteur (tels que HA-PLGA utilisé dans les méthodes actuelles) de manière à mieux guérir les défauts squelettiques.
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été soutenu par le CIRM Prix Early recherche translationnelle II TR2-01821, NIH / NIDCR (subventions R21 DE0177711 et RO1 DE01607), UC subvention à la découverte 07-10677, AWJ et RKS ont T32 bourses de formation des prix (5T32DE007296-14), jnz a une bourse de formation CIRM (TG2-01169).