هذه الدراسة توضح الأسلوب الذي يسمح للتشخيص السريع والواضح من الأمراض الفيروسية النباتية في يوم واحد نحو نصف باستخدام مزيج من الميكروويف بمساعدة محطة إعداد العينات للفحص المجهري الإلكتروني النافذ والأساليب تلطيخ السلبية.
التحقيقات من التغييرات التي تحدثها الفيروسات التركيبية وغالبا ما تكون ضرورية لتحديد بشكل واضح الأمراض الفيروسية في النباتات. مع إعداد العينات للفحص المجهري الإلكترون التقليدي انتقال (TEM) مثل هذه التحقيقات يمكن أن يستغرق عدة أيام 1،2 و بالتالي فهي غير مناسبة لتشخيص السريع للأمراض النباتية الفيروس. ويمكن استخدام الميكروويف لتثبيت خفض كبير مثال لوقت التحضير للتحقيقات TEM مع نتائج مماثلة التركيبية كما لوحظ بعد إعداد العينات تقليديا 3-5. العديد من مختلف الأجهزة المخصصة الميكروويف التي تتوفر حاليا والتي يمكن استخدامها لتثبيت ناجحة وتضمينها من العينات البيولوجية للتحقيقات TEM 5-8. في هذه الدراسة أن نبرهن على فيروس موزاييك التبغ (TMV) إصابة النباتات تبغ نيكوتيانا أنه من الممكن لتشخيص التغيرات التركيبية في الأوراق في يوم واحد نحو نصف الميكروويف باستخدام إعداد نموذج لمساعدة TEM. لقد اخترنا لتنفيذ هذه الدراسة مع جهاز الميكروويف المتاحة تجاريا لأنه يؤدي إعداد العينات تقريبا بالكامل تلقائيا 5 في عكس الأجهزة الأخرى المتاحة حيث لا يزال العديد من الخطوات التي يتعين القيام بها يدويا هي 6-8 وبالتالي مزيد من الوقت والمستهلكة العمل. كما يمكن إعداد العينات يتم تنفيذ كامل تلطيخ السلبية تلقائيا من الجسيمات الفيروسية في العصارة من الأوراق المتبقية TMV المصابين وفحص التركيب الدقيق ليلي وحجم إجراء التثبيت وخلال التضمين.
وقد ثبت الميكروويف عينة النبات بمساعدة استعدادا لTEM لتوفير بيانات التركيبية سريعة وموثوق بها في غضون ساعات قليلة 3،4،16. كان الحفاظ غرامة الهيكلية للعضيات والأغشية تحقيق مع الطريقة المستخدمة في هذه الدراسة مشابهة لعينات التقليدية وcryofixed 5،15 مع الاستفادة من انخفاض كبير في تثبيت العينة وتضمينها الوقت من 3 أيام أو أكثر إلى حوالي 2 ساعة. هذا يمثل أسرع إعداد بروتوكول للعينة TEM المتاحة حاليا في الأدب. الطريقة الموضحة في هذه الدراسة جنبا إلى جنب الميكروويف عينة النبات بمساعدة استعدادا لTEM مع أساليب تلطيخ السلبية التي سمحت تحديد واضح وسريع من TMV الناجم عن التغيرات التركيبية وكيل الفيروسية نفسها. يمكن التحقيق TMV التعديلات التي يسببها التركيبية بعد التشذيب، وتقطيع آخر تلطيخ داخل حوالي 4 ساعات بعد بداية التثبيت في نقل كهربائيترون المجهر. باستخدام عينة بالكامل إعداد وضع تلقائيا الافراج عن الباحث لإجراء تلطيخ السلبية في هذه الأثناء من أجل تحديد حجم وعرض وكيل الفيروسية. وهكذا، يمكننا أن نستنتج أن هذا الأسلوب يسمح للتشخيص واضح وسريع من الأمراض الفيروسية النباتية في يوم واحد نحو نصف وهو أمر ذو أهمية كبيرة لاستخدامها في المستقبل في تجارب الزراعة والعلمية في أمراض النبات النبات. كما يمكن أيضا أن تستخدم هذه الطريقة لتشخيص السريع للحيوان والأمراض التي تصيب الإنسان لديها إمكانيات كبيرة لتطبيقها في المستقبل في علم الأمراض الطبية والبيطرية.
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل صندوق العلوم النمساوية (FWF، P20619 P22988 لوBZ).
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
Glutaraldehyde | Agar Scientific Ltd. | R1312 | |
Osmium tetroxide | Agar Scientific Ltd. | R1022 | |
Agar 100 resin | Agar Scientific Ltd. | R1043 | |
Dodecenyl succinic anhydride | Agar Scientific Ltd. | R1051 | |
Methyl nadic anhydride | Agar Scientific Ltd. | R1081 | |
Benzyl dimethylamine | Agar Scientific Ltd. | R1060 | |
Lead citrate | Agar Scientific Ltd. | R1210 | |
Uranyl acetate | Agar Scientific Ltd. | R1260A | |
Phosphotungstic acid | Agar Scientific Ltd. | R1213 | |
Formvar | Agar Scientific Ltd. | R1202 | |
Leica EM AMW | Leica Microsystems | ||
Leica (Reichert) Ultratrim | Leica Microsystems | Newer model is available | |
Leica (Reichert) Ultracut S | Leica Microsystems | Newer model is available | |
Diatome Ultra 45 | Gröpl | ||
Philips CM10 TEM | FEI (formerly Philips) | Newer model is available | |
Cell D | Olympus Inc. | ||
Optimas 6.5.1 | Media Cybernetics Inc. | Newer version is available |