Durchflusszytometrie-Analyse von Immunzellen innerhalb Murine Aorten

Atherosklerose ist eine chronisch entzündliche Prozess der mittelgroßen und großen Schiffen, die durch die Bildung von Plaques, bestehend aus Schaumstoff, Immunzellen, vaskuläre Endothel-und glatten Muskelzellen, Thrombozyten, extrazelluläre Matrix und einer Lipid-reichen Kern mit ausgedehnter Nekrose gekennzeichnet ist und Fibrose des umgebenden Gewebes. ¹ Die angeborene und adaptive Arme der Immunantwort bei der Initiierung, Entwicklung und Persistenz von Atherosklerose beteiligt. ^{2, 3} gibt es eine beträchtliche Menge Beweise dafür, dass verschiedene Untergruppen der Immunzellen, wie Makrophagen, dendritische Zellen, T-und B-Lymphozyten sind innerhalb des Aorten von gesunden und Arteriosklerose anfällig Mäusen ^4. Darüber hinaus sind Immunzellen in das umgebende Aorten-Adventitia, die eine wichtige Rolle dieses Gewebes schlägt in der Atherogenese gefunden. ²

Für einige Zeit war die quantitative Bestimmung der verschiedenen Arten von Immunzellen, deren Aktivierung den Status und die zelluläre Zusammensetzung innerhalb der Aortenwand durch RT-PCR und immunhistochemische Methoden zur Untersuchung der Atherosklerose beschränkt. Nur wenige wurden Versuche unternommen, die Durchflusszytometrie mit menschlichen Aorten durchzuführen, und eine Reihe von Problemen, wie zum Beispiel eine hohe Autofluoreszenz, berichtet worden ^5,6. Humanen atherosklerotischen Plaques wurden mit Collagenase 1 verdaut und freie Zellen wurden gesammelt und für CD14 gefärbten + / CD11c + zu Makrophagen-abgeleitete Schaumzellen Highlight. In dieser Studie wurde ein "Mock"-Kanal verwendet werden, um falsch-positive Färbung zu vermeiden. ⁶ Necrotic Materialien sammeln während des Aufschlusses entstehen in einer großen Menge von Trümmern, die eine hohe Autofluoreszenz in der Aorta Proben erzeugt. Um dieses Problem zu lösen, hat ein Gremium von negativen und positiven Kontrollen vorgeschlagen worden, aber nur Doppelfärbung konnte in diesen Proben angewendet werden. Wir haben eine neue Basis der Durchflusszytometrie-Methode ⁷ an die Immunzellen Zusammensetzung zu analysieren und zu charakterisieren, die Aktivierung, Proliferation, Differenzierung von Immunzellen bei gesunden und Arteriosklerose anfällig Aorta entwickelt. Diese Methode erlaubt die Untersuchung der Immunzellen Zusammensetzung der Aortenwand und öffnet Möglichkeiten für ein breites Spektrum von immunologischen Methoden zur Untersuchung des Immunsystems Aspekte dieser Krankheit verwendet werden.